鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames)

实验原理

1 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验

鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长。假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌回复突变成原养型，因而能生长形成菌落，据此判断受试物是否为致突变物。

某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变，故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备S9混合液。

10％s9混合液的配制：每10mL由以下成分组成，临用时配制。

活化系统（s-9和s-9混合液）的制备

用哺乳动物如大鼠，经诱导剂处理，取肝组织制备匀浆，9000g离心，上清液为s-9组分，与辅助成分以适当比例组成s-9混合液，用作试验中的代谢活化系统。

磷酸盐缓冲液（0．2mol/L，pH7．4） 6．0mL

氯化钾溶液（1．65mol/L） 0．2mL

氯化镁溶液（0．4mo1／L） 0．2mL

葡萄糖-6．磷酸盐溶液（0．05mol/L） 1．0mL

辅酶-Ⅱ溶液（0．025mol/L） 1．6mL

肝s-9液 1．0mL

混匀，置冰浴中待用。