旋光度测定法

目的：建立旋光度测定法的标准操作程序，规范旋光度测定法的操作。

范围：适用于旋光度测定法。

职责：检验室主任、检验员。

规程：

1 简述

旋光度测定法是利用平面偏振光，通过含有某些光学活性化合物的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或右旋转，此种旋转在一定条件下有一定度数，称为旋光度。使偏振光向右旋转者（顺时针方向）称为右旋物质，常以“十”号表示。使偏振光向左旋转者（反时针方向），称为左旋物质，常以“一”号表示。影响物质旋光度的因素很多，除化合物特性外，还有偏振光通过供试品液层的浓度和厚度，通过光线的波长和测定时的温度。当偏振光通过长ldm、每1ml中含有旋光性物质1g的溶液，使用光线波长通常用为钠光D线（589.3nm）汞的404. 7、546.1nm等谱线，测定温度为20℃时，测得旋光度称为该物质的比施度，以［a］20

表示。比旋度是物质的物理常数。因此可用以区别或检查某些药品

D

的光学活性和药品的纯杂程度。由于旋光度在一定条件下与浓度呈线性关系，故而还可以用来测定含量。

平面偏振光的产生，过去都是使用尼科尔棱镜，这是用一种天然的晶体如方解石等切割后制成，现在大都用塑料膜涂上某些具有光学活性的化学物质，使其产生偏振光。最早的圆盘旋光仪，就是由钠光灯光源、起偏镜、检偏镜、测试管、半影板调零装置和支架六部分组成。由于用人的眼睛观察视野光强是否一致，比较费力，而且主观误差也大，因此目前大都被光电机相互结合组成的自动指示旋光仪或数字显示仪所取代。

2 仪器与性能测试

2.1 旋光仪又称旋光计，是较早出现的商品分析仪器。六十年代前我们使用的仪器大都是国外的圆盘旋光仪，规格为0.05°或0.01°。其后，我国上海等地仪器厂也生产一些圆

盘旋光仪，但精密度不高。七十年代后国外由于自动指示旋光仪的出现，圆盘旋光逐渐被淘汰，同时在我国也相继出现了不同形号的自指示旋光仪。八十年代数显式自动指示旋光仪和投影式自动指示旋光仪相继出现。仪器的读数精度也有了很大提高，由原来的0.05°提高为0.02°、0.01°和0.005°。有些国外旋光仪尚可选用不同波长的光，读数可达0.001°。中国药典2000年规定用读数至0.01°并经过检定的旋光计。

2.2 仪器的性能测试根据中华人民共和国国家计量规程JJG675-90旋光仪的规定，按照仪器测量结果的准确度，仪器分为0.01、0.02和0.03三种准确度等级，仪器检定的项目，除准确度外，还有重复性和稳定性，其它尚有对测试管盖玻片内应力和测试管长度误差等的检查。

旋光仪的检定，中国药典2000年版规定可用标准旋光管进行，读数误差应符合规定。

我国国家技术监督局已有旋光标准石英管供应，即可用+5°和-1°标准石英管，检定方法参照JJG675-90规定，要求在规定温度下，记录仪器的零点值，再放上旋光标准石英管，读取仪器示值，如此反复测定6次，按规定处理测定结果，与示值不能超出±0.01。此外并要求将测定管旋转不同角度和倒向测定，误差都不得大于0.04°。

中国药典1990年版附录收载有用蔗糖作为基准物作旋光仪的性能检定。系取经105℃干燥2小时的蔗糖（化学试剂一级），精密称定，加水溶解，并定量稀释至1ml中含0.2g 的溶液，依法测定，结果在20℃时比旋度应为十66.60°。但用蔗糖的纯度、水分都必须符合要求，称量和稀释也必须非常准确，否则测定结果容易产生误差。而且蔗糖溶液易生霉，不能长时间放置；因此目前国际上多不采用标准糖液法校验仪器，国际统一糖分析委员会(ICUMSA)推荐用标准石英旋光管校验仪器，我国国家技术督局颁布的旋光仪检定规程，也采用标准石英旋光管校准仪器。

3 样品测定操作法

旋光度测定法主要用于药典某些品种性状项下比旋度的测定，或一些制剂的含量测定。

3.1 比旋度测定按各品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的温度和放置时间内测定。中国药典要求：如无特殊规定，旋光度的测定温度，应在（20±0.5）℃。测定前首先应将室温调至规定温度，然后用配制供试品的空白溶液校正零点或测定停点，以便扣除空白读数。如调节室温有困难，宜用具有夹层可联通恒温水溶的试样管，盛供试品溶液，恒

后测定。不得已时，可在恒温水浴中配制供试品溶液，再迅速移入试样管测定。药典规定常用测定比旋度的溶液多为水溶液，有时也用稀释的盐酸溶液或氢氧化钠试液，或有机溶剂如乙醇、氯仿、二氧六环等溶液，主要是按照供试品在各种溶剂中的溶解情况决定。药典配制溶液的浓度大都根据药品的比旋度大小，使配成的测定液旋光度一般应在左旋或右旋2～8℃范围，测定值太小，在读取旋光度时容易造成误差，且在称量上也易产生误差，一些溶解度小的可以例外。用旋光法作含量测定时应当称取2份做平等试验。装入测定溶液时应避免产生气泡，旋紧测试管两端螺帽时，不应用力过大以免产生应力，造成误差，测定旋光度应重复读取3次，取平均值，按规定公式计算结果。

3.2 用旋光测定供试品的含量，测定时要求按照各该品种含量测定项下规定操作，配制浓度太大或太小，有时会影响测定结果的准确度，其它操作可参考3.1。

4 测定操作注意事项

4.1 温度对旋光度影响不大的供试品，一般可在室温测定。对温度有严格要求约供试品，必须按规定执行，否则会造成误差。

4.2 未接通电源前应检查仪器样品室内有无异物，钠光灯和其它示数开关是否放在关或规定的位置，仪器放置位置是否合适。钠光灯启辉后仪器不许搬动，以免损坏钠灯。具有直流极性开关的仪器应适当选择转换方向。

4.3 钠光灯启辉后至少20分钟后发光才能稳定，测定或读数时应在钠光稳定后读取，测定时钠光灯尽量使用直流电路供电。有的仪器规定不测定时间间隔较长时，可置于交流供电，以延长钠灯寿命。

4.4 测定零点或停点时，必须按动复测按纽数次，使检偏镜分别向左或向右偏离光学零位，减少仪器的机械误差。同时通过观察左右复测数次的停点，检查仪器的重复性和稳定性，必要时也可用旋光标准石英管校正仪器的准确度。

4.5 测定管若有气泡，应先使气泡浮于凸颈处或除去。透光面两端的玻璃应用软布擦干，测定管两端的螺帽应旋至适中位置，过紧容易产生应力，过松容易漏液。测定管旋转时应注意标记的位置和方向。读取零点或停点应重复3次。

4.6 往测试管加入供试品溶液时，应反复用供试品溶液冲洗测试管数次，以免供试液浓度改变。