实验二 细菌培养及细菌的生化反应

五、正常人体咽喉部细菌检查（操作，2人/组） 正常人体咽喉部细菌检查（操作，
材料： 材料： 方法： 方法： 血平板、咽拭子 血平板、 平板分离划线接种法 ①区由咽拭子取样后划种， 区由咽拭子取样后划种， ②③④区同前 ②③④区同前
实验报告要求
一、平板分离划线培养 1、实验目的 2、实验结果（描述实验现象） 实验结果（描述实验现象） 3、实验结论与讨论 二、半固体培养基穿刺接种（同上） 半固体培养基穿刺接种（同上） 三、正常人体咽喉部细菌检查（同上） 正常人体咽喉部细菌检查（同上） 四、常用生化反应（示教） 常用生化反应（示教） 分别描述阳性、阴性反应观察要点 分别描述阳性、阴性反应观察要点
（一）分离培养 1. 平板分离划线接种法（操作，1人/组） 平板分离划线接种法（操作，
普通平板， 普通平板，1人/块。 菌种：混合菌液 菌种：
（红色的平板为练习平板） 红色的平板为练习平板）
2 1 3
1
2
3
4
接种方法
培养结果
注意事项： 注意事项： 1. ①区和②区之间要灭菌 区和② 2. ④区不要接上①区 区不要接上① 3. 用力适当，不要划破琼脂表面 用力适当， 4. 注意无菌操作
3. 液体培养基接种法（示教） 液体培养基接种法（示教）
三、细菌在培养基上生长现象（示教） 细菌在培养基上生长现象（示教）
1. 固体 2. 半固体 3. 液体 菌落 菌苔 动力+ 动力动力+ 动力沉淀—成链生长 沉淀 成链生长 浑浊—均匀分散生长 浑浊 均匀分散生长 菌膜—表面生长 需氧菌） 表面生长（ 菌膜 表面生长（需氧菌）
（二）纯培养 1. 半固体培养基接种法（操作， 2人/2支/组） 半固体培养基接种法（操作， /2支
菌种：大肠埃希菌、 菌种：大肠埃希菌、痢疾志 贺菌 方法：穿刺接种 方法：
结果：沿穿刺线生长——动力（－） 动力（ 结果：沿穿刺线生长——动力 扩散生长——动力 动力（ 扩散生长——动力（+）
2. 斜面培养基接种法（示教） 斜面培养基接种法（示教）
实验二
细菌的培养及生化反应
基础培养基的制备（讲解） 一、基础培养基的制备（讲解） 细菌的接种法（操作， 二、细菌的接种法（操作，1人/组） 三、细菌在培养基上生长现象 四、常用生化反应
示教
示教
正常人体咽喉部细菌检查（操作， 五、正常人体咽喉部细菌检查（操作，2人/组）
一、肉汤培养基的制备步骤
牛肉 500g碎牛肉+1000ml水 500g碎牛肉+1000ml水 碎牛肉+1000ml 4℃冰箱过夜 4℃冰箱过夜
按用途分： 按用途分：
二、细菌的接种法 （一）分离培养
1. 平板分离划线接种法（操作） 平板分离划线接种法（操作）
（二）纯培养
1. 半固体培养基接种法（操作） 半固体培养基接种法（操作） 2. 斜面培养基接种法（示教） 斜面培养基接种法（示教） 3. 液体培养基接种法（示教） 液体培养基接种法（示教）
100℃30′ 过滤
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矫正PH7.6矫正PH7.6-7.8 PH7.6
过滤、矫正PH 过滤、矫正PH
高压灭菌、 分装 、高压灭菌、备用
培养基的种类
液体培养基 按物理性状分： 固体培养基（1%-2%） 按物理性状分： 固体培养基（1%-2%） 半固体培养基（0.5%） 半固体培养基（0.5%） 基础培养基 营养培养基 鉴别培养基 选择培养基 厌氧培养基
2
3
-
+
-
常用生化反应观察要点： 常用生化反应观察要点：
1. 糖发酵试验 紫色黄色 +；黄色 气泡 + 、紫色 ；黄色+气泡
2.吲哚试验（靛基质试验） 2.吲哚试验（靛基质试验） 吲哚试验 滴加数滴吲哚试剂， 滴加数滴吲哚试剂，液面出现红色玫瑰环 +；无则 ； 3.硫化氢试验 3.硫化氢试验 4.尿素分解试验 4.尿素分解试验 黑色沉淀 +；无黑色沉淀 ； 红色 + ； 黄色 -
大肠埃希菌(+) 例 大肠埃希菌(+)
3、硫化氢试验 硫化氢试验
细菌分解含硫氨基酸 硫化氢+ 细菌分解含硫氨基酸→硫化氢+铅/铁离子 含硫氨基酸→ 黑色（硫化铅/硫化亚铁） →黑色（硫化铅/硫化亚铁）
例 变形杆菌(+) 沙门氏菌(+) 大肠埃希菌（-） 变形杆菌(+) 沙门氏菌(+) 大肠埃希菌（
实验结果： 实验结果：
1. 平板分离培养 分离到两种菌落 大肠埃希菌菌落：扁平、宽大、 大肠埃希菌菌落：扁平、宽大、无色素 金葡菌菌落：小而凸、金黄色脂溶性色素 金葡菌菌落：小而凸、 2. 半固体穿刺接种 大肠埃希菌：沿穿刺线扩散生长 动力 动力+ 大肠埃希菌：沿穿刺线扩散生长/动力 痢疾志贺菌：沿穿刺线生长/动力 动力痢疾志贺菌：沿穿刺线生长 动力 3. 咽喉部细菌检查 血平板
四、常用生化反应（示教） 常用生化反应（示教） 1、糖发酵试验
细菌分解糖→ 细菌分解糖→酸+气体 + 无甲酸解氢酶） 或→酸（无甲酸解氢酶）+
* 指示剂为溴甲酚紫
+
+
-
2、吲哚（靛基质）试验 吲哚（靛基质）
细菌分解色氨酸 吲哚+吲哚试剂→ 细菌分解色氨酸→吲哚+吲哚试剂→玫瑰色 色氨酸→
未接种管 阴性 阳性
阳性
强阳性
阴性
4、尿素酶试验 尿素酶试验
细菌分解尿素 细菌分解尿素→氨+酚红(指示剂)→红色 尿素→ 酚红(指示剂)→ )→红色 变形杆菌(+) 例 变形杆菌(+) 大肠埃希菌( 大肠埃希菌(-)
1
1. Uninoculated control: negative 2. Proteus vulgaris: positive 3. Escherichia coli: negative
甲链菌落：细小、 甲链菌落：细小、狭窄的草绿色溶血环 乙链菌落：细小、 乙链菌落：细小、宽大的透明溶血环