脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)活性测定试剂盒使用说明
Vc包括脱氢还原
Vc包括脱氢还原目前研究维生素C测定方法的报道较多，有关维生素C的测定方法如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等，各种方法对实际样品的测定均有满意的效果.为了解国内VC含量测定方法及其应用方面的现状及发展态势.方法以“维生素C或抗坏血酸和测定”为检索词对1994～2002年中国期刊网全文数据库(CNKI)中的理工A、B和医药卫生专辑进行篇名检索，对所得有关维生素C含量测定的文献数据分别以年代、作者区域、载刊等级、样品类型、测定方法等进行计量分析.结果核心期刊载刊文献占文献总量的45.06％，其中光度法占65.69％，电化法占18.63％，色谱法占12.75％；复杂被测样品文献占文献总量的45.06％，其中光度法占60.92％，色谱法占19.54％，电化法占10.34％。
结论目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流，但近年来色谱法，特别是HPLC法上升趋势尤为明显。
一．荧光法1．原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline），其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为0.022 g/ml。
2．适用范围本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3. 注意事项3.1 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生C。
3.2 某些果胶含量高的样品不易过滤，可采用抽滤的方法，也可先离心，再取上清液过滤。
3.3活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，但它也有吸附抗坏血酸的作用，故活性炭用量应适当与准确，所以，应用天平称量。
玉米脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆和特性研究
玉米脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆和特性研究袁进成;马海莲;宋晋辉;宋小青;刘颖慧【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2013(33)9【摘要】通过电子克隆方法得到玉米脱氢抗坏血酸还原酶基因,命名为ZmDHAR1.结果显示,ZmDHAR1基因全长723 bp,开放阅读框642 bp,编码214个氨基酸.ZmDHAR1基因与高梁、水稻及小麦等植物的脱氢抗坏血酸还原酶基因高度相似,其中与高梁的DHAR基因相似性为85％,与水稻的DHAR1基因相似性为83％.基因表达分析显示,ZmDHAR1基因在根以外的其他部位都可以检测到表达,而且ZmDHAR1基因可以在4℃低温、100μmol/L ABA、100 mmol/L PEG、250 mmol/L NaCl和机械损伤等多种逆境胁迫下均可应答表达.研究表明,ZmDHAR1基因可能在玉米抗逆境胁迫反应中发挥重要的作用.【总页数】5页(P1745-1749)【作者】袁进成;马海莲;宋晋辉;宋小青;刘颖慧【作者单位】河北北方学院,河北张家口075000;河北北方学院,河北张家口075000;河北北方学院,河北张家口075000;河北北方学院,河北张家口075000;河北北方学院,河北张家口075000【正文语种】中文【中图分类】Q789【相关文献】1.苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因cDNA片段的克隆及序列分析 [J], 张燕子;马锋旺;张军科;梁东2.棉花单脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆及原核表达 [J], 钱雯婕;王斐;石峰;葛娟;李鸿彬3.辣椒单脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆与序列分析 [J], 邹礼平4.棉花脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆、原核表达与纯化 [J], 李学宁;杜军伟;李鸿彬5.大豆脱氢抗坏血酸还原酶基因的电子克隆及进化分析 [J], 李晓晓;李蕊;李雅轩;蔡民华;胡英考因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
植物线粒体中活性氧的产生与抗氧化系统
植物线粒体中活性氧的产生与抗氧化系统摘要活细胞中活性氧不仅在信号转导方面起着关键作用,而且还可以对生物大分子起到伤害作用,所以线粒体中的活性氧必须控制在一定的浓度。
植物线粒体中存在几种抗氧化系统,它们可以控制活性氧的产生,修补活性氧对大分子造成的损伤。
其中抗氧化系统包括依赖于抗坏血酸分子和谷胱甘肽分子途径的,依赖硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)分子和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxudase,GPX)途径的。
综述了线粒体中控制活性氧的各种氧化还原反应途径,并特别强调指出,TRX 和GPX系统,以期能给该方面的研究提供帮助。
关键字线粒体;活性氧;抗氧化系统需氧进行光合作用的生物是在大气中氧存在的情况下出现和进化的,陆生植物也是在大气中氧存在的情况下出现和进化的,结果陆生植物形成了不仅可以极大运用氧气的能力,而且也形成了能限制活性氧不良作用的新陈代谢方式。
单线态氧(1O2)、超氧负离子(O2-)、过氧化物和过氧化氢的氧代谢均可以产生活性氧。
一方面,由于这些氧化物的有害性,植物需要控制它们在细胞中的含量;另一方面,当植物体遭遇病原体入侵时,活性氧可以作为信号分子起作用。
同时,这些分子能使蛋白质发生变化,诱导基因转录。
这种信号系统是细胞与外环境通信的重要组成部分。
在植物细胞中,叶绿体、线粒体和过氧化物体是产生活性氧的部位,由于活性氧可以通过细胞空隙自由扩散进入线粒体,所以线粒体成为活性氧伤害的主要细胞器[1-6]。
最近研究表明,线粒体在信号转导中处于十分重要的地位。
1植物线粒体中活性氧的产生和性质在线粒体的电子传递过程中,电子沿着一系列的电子传递体传递到末端氧化酶,然后再传递给氧,最后质子与离子型氧结合生成水。
但是,位于呼吸链底物端的一些物质,如黄素蛋白、非血红素铁蛋白(non-heme iron proteins)、醌(qu-inols),尤其是半醌(semiquinols)等发生氧化还原的能障(en-ergy barier)是很低的,常常直接启动O2的单电子还原(one-electron reduction),产生O2-。
植物中抗坏血酸含量检测方案设计与抗衰老分析实验中注意事项
植物中抗坏血酸含量检测方案设计与抗衰老分析实验中注意事项实验概要测定植物中的抗坏血酸含量。
实验原理还原型抗坏血酸（AsA）可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉（4，7-二苯基-1，10-菲咯啉，BP）反应，形成红色螯合物，对534nm波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。
脱氢抗坏血酸（DAsA）可由二硫苏糖醇（DTT）还原成AsA；测定AsA总量，从中减去还原型AsA即为DAsA含量。
主要试剂5%三氯乙酸（TCA）；20%TCA；无水乙醇溶液；0.4%磷酸－乙醇溶液；0.5%BP－乙醇溶液；0.03%FeCl3－乙醇溶液；0.6g/LDTT；Na2HPO4－NaOH 溶液：以0.2mol/LNa2HPO4和1.2mol/LNaOH等量混合；60mmol/LDTT－乙醇。
主要设备离心机；分光光度计；研钵；试管。
实验材料受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官。
实验步骤1.制作标准曲线配制浓度为2，4，6，8，10，12，14mg/L的AsA系列标准液。
各取1.0ml于试管中，加入1.0ml5%TCA，1.0ml乙醇，摇匀。
再依次加入0.5ml0.4%H3PO4－乙醇，1.0ml0.5%BP－乙醇，0.5ml0.03%FeCl3－乙醇，总体积5.0ml。
将溶液置于30℃下反应90min，然后测定A534。
以AsA 浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。
2.提取取植物叶片1.0g，按1︰5（W/V）加入5%TCA研磨，离心（4000×g）10min，上清液供测定。
3.测定AsA测定取1.0ml样品提取液于试管中，按上述测标准液相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。
DAsA测定向1.0ml样品液中加入0.5ml60mmol/LDTT－乙醇溶液，用Na2HPO4－NaOH混合液，将溶液pH调至7~8。
置于室温下10min，使DAsA 还原。
保护性酶
保护性酶保护酶系：1. 过氧化物酶POD2. 超氧化物歧化酶SOD3. 苯丙氨酸解氨酶PAL4. 过氧化氢酶CA T5. 多酚氧化酶PPO6. 丙二醛（MDA）含量、游离脯氨酸含量、7. 谷胱甘肽还原酶(GR8. 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)9. 抗坏血酸(ASA)过氧化物酶（APX）Ascorbic acid peroxidase活性氧酶促保护系统主要包括：1 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase ，SOD)、2. 过氧化氢酶（Catalase,CAT）3.抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate Peroxidase，AP)、4 脱氢抗坏血酸还原酶Dehydroascorbate Reductase，DR)5. 单脱氢抗坏血酸还原酶(Monodehydroascorbate Reductase，MR)6 谷胱甘肽还原酶(Glutathione Reductase，GR)7.非特异性过氧化物酶(non—specific peroxidase，POD)等。
张家口农专学报, 2002年6月,第l8卷第2期自由基清除酶一抗坏血酸自由基还原酶抗坏血酸过氧化物酶（APX）亚硒酸钠对小麦幼苗中谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶活性以及谷胱甘肽含量的影响--《植物生理学通讯》2004年02期谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）测试盒说明书一、测定意义谷胱甘肽过氧化物酶是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。
它特异的催化还原型谷胱甘肽对过氧化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。
谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心是硒半光氨酸，硒是GSH-PX的必需部分，每克分子酶含4克原子硒。
测定GSH-PX的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。
测定原理谷胱甘肽过氧化物酶可以促进过氧化氢与还原型谷胱甘肽反应生成H2O及氧化型谷胱甘肽，谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力。
植物抗坏血酸的合成和代谢以及相关酶基因的调控
植物抗坏血酸的合成和代谢以及相关酶基因的调控邹礼平* ,陈锦华孝感学院生命科学技术学院,湖北孝感432000Biosynthesis and Metabolism of Ascorbic Acid and Regulation of Related Genes in PlantsZOU Li-Ping*,CHEN Jin-HuaCollege of Life Science and Technology,Xiaogan University,Xiaogan,Hubei432000,China提要:本文对植物抗坏血酸的生物合成与代谢途径以及相关酶基因调控的研究进展作介绍。
关键词:抗坏血酸;生物合成与代谢;基因调控抗坏血酸(ascorbic acid, AsA)即维生素C (Vc), 在生物体中具有重要的代谢功能和抗氧化作用。
抗坏血酸是人类和动物维持生长、繁殖和保证健康所必需的营养物质, 抗坏血酸缺乏会导致坏血病。
一般来说, 抗坏血酸与植物的抗逆性呈正相关, 植物细胞内的抗坏血酸的含量增加, 植物耐炎热、寒冷和盐碱环境等逆境的能力即增强。
抗坏血酸还与植物细胞的分裂、伸长和植株生长有关。
植物、微生物和大多数动物体内可自行合成抗坏血酸, 但人类自身则已丧失合成能力, 必须从食物中摄取。
因此, 研究植物中抗坏血酸的生物合成与代谢途径, 克隆相关的酶基因, 了解其表达调控机制, 将有利于通过生物技术的方法改良植物, 提高抗坏血酸的含量, 这对于增加植物产品的营养品质和增强植物本身抗逆性, 都有重要意义。
本文介绍植物抗坏血酸生物合成与代谢途径及相关酶基因调控研究的进展。
1 抗坏血酸的生物合成植物和动物抗坏血酸生物合成途径是有差异的。
在动物中, 从D - 葡萄糖经D - 葡萄醛酸、L- 古洛糖酸和L- 古洛糖酸-1,4- 内酯的己糖醛酸途径合成L-抗坏血酸最早是在大鼠上报道的, 放射性示踪研究表明这条途径涉及碳链倒位。
过氧化氢酶在植物生长发育和胁迫响应中的功能研究进展
活性氧(reactive oxygen species,ROS)在植物生长发育和胁迫响应中扮演着十分重要的角色,研究其产生和清除机制有着十分重要的意义。
ROS 主要包括超氧阴离子(O 2-·)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2O 2)、羟基自由基(·OH)和单线态氧(1O 2)等[1]。
其中,H 2O 2是最稳定的存在形式,也是植物体内重要的信号分子,因此维持体内H 2O 2稳态具有十分重要的意义[2]。
过氧化氢酶(catalase,CAT)是发现最早也是目前研究最透彻的H 2O 2清除酶之一,其功能和相关调控机制仍是当下植物研究DOI:10.16605/ki.1007-7847.2023.01.0110过氧化氢酶在植物生长发育和胁迫响应中的功能研究进展刘聪,邓宇宏,刘选明*,林建中*(湖南大学生物学院植物功能基因组学与发育调控湖南省重点实验室国家耐盐碱水稻技术创新中心,中国湖南长沙410082)收稿日期:2023-01-01;修回日期:2023-03-07;网络首发日期:2023-04-10基金项目:国家自然科学基金资助项目(31871595);湖南省自然科学基金资助项目(2020JJ4004);国家耐盐碱水稻技术创新中心项目(2022PT1005);杂交水稻国家重点实验室(湖南杂交水稻研究中心)开放课题(2019KF02);海南省崖州湾种子实验室揭榜挂帅项目(B21HJ0108)作者简介:刘聪(1991—),男,河南郑州人,博士;刘聪和邓宏宇对本文的贡献相同,为本文共同第一作者;*通信作者:林建中(1975—),男,湖南会同人,博士,湖南大学副教授,主要从事植物生理与分子生物学研究,Tel:*************,E-mail:*****************.cn;刘选明(1963—),男,湖南邵阳人,博士,湖南大学教授,主要从事植物功能基因组学研究,Tel:*************,E-mail:*************.cn 。
211138217_燕麦种胚细胞和线粒体AsA
第31卷 第4期V o l .31 No .4草 地 学 报A C T A A G R E S T I A S I N I C A2023年 4月A pr . 2023d o i :10.11733/j.i s s n .1007-0435.2023.04.015引用格式:李红玉,王雅聪,夏方山,等.燕麦种胚细胞和线粒体A s A -G S H 循环对外源H 2O 2引发的响应[J ].草地学报,2023,31(4):1067-1070L IH o n g -y u ,WA N G Y a -c o n g ,X I AF a n g -s h a n ,e t a l .R e s p o n s e o fA s A -G S H C y c l e s t oE x o g e n o u sH 2O 2Pr i m i n g i n t h eE m b r y o n i cC e l l s a n d M i t o c h o n d r i a o fO a t S e e d s [J ].A c t aA gr e s t i aS i n i c a ,2023,31(4):1067-1070燕麦种胚细胞和线粒体A s A -G S H 循环对外源H 2O 2引发的响应李红玉,王雅聪,夏方山*,王 勃,李尹琳,张杰敏(山西农业大学草业学院,山西太谷030801)收稿日期:2022-11-08;修回日期:2022-12-13基金项目:山西农业大学 十四五 生物育种工程项目(Y Z G C 134);国家自然基金项目(31702171);山西省重点研发计划项目(201903D 221091,202102140601006);内蒙古大学 省部共建草原家畜生殖调控与繁育 国家重点实验室开放课题(2021K F 0303)资助作者简介:李红玉(1973-),女,汉族,山西太谷人,硕士,高级实验师,主要从事草种子科学研究,E -m a i l :l i h o n g yu 289@126.c o m ;*通信作者A u t h o r f o r c o r r e s p o n d e n c e ,E -m a i l :d ql x f s 8583@163.c o m 摘要:本研究探讨了外源H 2O 2引发后,燕麦(A v e n a s a t i v a )种胚细胞和线粒体抗坏血酸(A s c o r b i c a c i d ,A s A )-谷胱甘肽(G l u t a t h i o n e ,G S H )循环的抗氧化性能的变化规律,以期为植物种子的长期贮藏技术研究提供理论依据㊂试验以燕麦种子为材料,用浓度为0,0.96,1.92,3.84和7.68m o l ㊃L -1的H 2O 2引发12h 后,分析其种胚细胞和线粒体脂质过氧化水平㊁A s A -G S H 循环中酶促和非酶促抗氧化物质的变化规律㊂结果表明:燕麦种胚细胞和线粒体内A s A 和G S H 含量会随外源H 2O 2浓度的增加而显著降低(P <0.05),其A s A -G S H 循环的酶活性㊁脱氢抗坏血酸和氧化型谷胱甘肽含量均呈先升后降的趋势,其H 2O 2和丙二醛含量显著升高(P <0.05),燕麦种子发芽率则显著降低(P <0.05)㊂燕麦种胚细胞和线粒体A s A -G S H 循环的抗氧化功能变化对H 2O 2浓度升高的响应具有协同性,其抗氧化能力下降导致高浓度(ȡ1.92m o l ㊃L -1)外源H 2O 2引发下燕麦种子发芽率降低,而其A s A 含量及再生能力的降低是造成这一现象的主要原因㊂关键词:抗坏血酸-谷胱甘肽循环;线粒体;过氧化氢;燕麦;种子引发中图分类号:S 512.6 文献标识码:A 文章编号:1007-0435(2023)04-1064-07R e s p o n s e o fA s A -G S HC y c l e s t oE x o g e n o u sH 2O 2P r i m i n g i n t h eE m b r yo n i c C e l l s a n dM i t o c h o n d r i a o fO a t S e e d sL IH o n g -y u ,WA N G Y a -c o n g ,X I AF a n g-s h a n *,WA N GB o ,L IY i n -l i n ,Z H A N GJ i e -m i n (C o l l e g e o fG r a s s l a n dS c i e n c e ,S h a n x iA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,T a i gu ,S h a n x i P r o v i n c e 030801,C h i n a )A b s t r a c t :I n t h i s s t u d y ,t h e c h a n g e s i n t h e a n t i o x i d a n t p r o p e r t i e s o f a s c o r b i c a c i d (A s A )-gl u t a t h i o n e (G S H )c y c l e sw e r e e x p l o r e d a s a r e s p o n s e t o e x o g e n o u sH 2O 2pr i m i n g i n t h e e m b r y o n i c c e l l s a n dm i t o c h o n d r i ao f o a t (A v e n a s a t i v a )s e e d s ,w h i c h p r o v i d e d a t h e o r e t i c a l b a s i s f o r t h e l o n g -t e r ms t o r a geo f p l a n t s e e d s .O a t s e e d sw e r e p r i m e dw i t h0,0.96,1.92,3.84a n d 7.68m o l ㊃L -1H 2O 2fo r 12ha s t h e e x p e r i m e n t a lm a t e r i -a l s ,a n d t h e c h a n g e s i n l i p i d p e r o x i d a t i o n a n d e n z y m a t i c a n d n o n -e n z y m a t i c a n t i o x i d a n t s i nA s A -G S Hc y c l e s w e r e a n a l y z e d i nb o t h t h e i r e m b r yo n i c c e l l s a n dm i t o c h o n d r i a .T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h eA s Aa n dG S H c o n t e n t sw e r e s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d i n t h e e m b r y o n i c c e l l s a n dm i t o c h o n d r i a (P <0.05),a n d e n z ym a t i c a c -t i v i t i e s o fA s A -G S Hc y c l e s a n d c o n t e n t s o f d e h y d r o a s c o r b a t e a n do x i d i z e d g l u t a t h i o n ew e r e a l lw i t ha p a t -t e r no f i n c r e a s i n g f i r s t l y a n d t h e nd e c r e a s i n g .H 2O 2an dm a l o n d i a l d e h y d ec o n t e n t sw e r ea l s os i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d (P <0.05),a n dt h u st h e g e r m i n a t i o n p e r c e n t a g eo fo a ts e e d sw a sr e d u c e ds i g n i f i c a n t l y (P <0.05).E m b r y o n i c c e l l s a n dm i t o c h o n d r i a s h o w e d s i m i l a r r e s u l t s o f c h a n g e s o fA s A -G S Hc y c l e s i n r e s po n s e t o t h e i n c r e a s e o fH 2O 2co n c e n t r a t i o n ,a n d t h e d a m a g e o n t h e i r a n t i o x i d a n t c a p a c i t y r e s u l t e d i n t h e d e c r e a s e o f s e e d g e r m i n a t i o nu n d e r p r i m i n g w i t hh i g hc o n c e n t r a t i o n (ȡ1.92m o l ㊃L -1)o fe x o g e n o u s H 2O 2.I t m i g h t b e c a u s e d l a r g e l y b y th e d e c r e a s e o fA s Ac o n t e n t a n d i t s c o n t i n u o u s p r o d u c t i o n .K e y wo r d s :A s c o r b i c a c i d -g l u t a t h i o n e c y c l e s ;M i t o c h o n d r i a ;H y d r o g e n p e r o x i d e ;O a t ;S e e d p r i m i n g Copyright ©博看网. All Rights Reserved.第4期李红玉等:燕麦种胚细胞和线粒体A s A-G S H循环对外源H2O2引发的响应种业是决定国家稳定发展的基础性和战略性核心产业,已成为推动我国农牧业高质量发展的重要引擎[1]㊂种子活力水平是直接决定着民族种业高质量发展的关键因素,其在储藏中会因为活性氧(R e-a c t i v eo x y g e ns p e c i e s,R O S)的不断积累而逐步降低[2]㊂H2O2的产生与清除是植物维持细胞内R O S 动态平衡的关键环节,其过量积累成为引起贮藏种子活力不断下降的关键原因[3-4]㊂线粒体是种胚细胞内最主要的细胞器,其既是种胚细胞内R O S产生的最主要来源,又是种胚细胞内R O S攻击的首要目标,因而是对种子劣变最敏感的细胞器[5]㊂抗坏血酸(A s c o r b i ca c i d,A s A)-谷胱甘肽(G l u t a t h i o n e, G S H)循环是种子内维持其寿命的诸多系统中最为活跃的核心环节,因而是种胚细胞和线粒体内维持R O S稳态的重要渠道[6-7]㊂研究发现,轻度老化会诱导植物种胚细胞和线粒体内A s A-G S H循环中抗坏血酸过氧化物酶(A s c o r b a t e p e r o x i d a s e,A P X),谷胱甘肽还原酶(G l u t a t h i o n e r e d u c t a s e,G R),超氧化物歧化酶(S u p e r o x i d ed i s m u t a s e,S O D),脱氢抗坏血酸还原酶(D e h y d r o a s c o r b a t e r e d u c t a s e, D H A R)和单脱氢抗坏血酸还原酶(M o n o d e h y d r o a-s o r b a t e r e d u c t a s e,M D H A R)活性升高,其H2O2和丙二醛(M a l o n d i a l d e h y d e,M D A)含量维持一个相对较低的水平,因而其种子活力也基本未降低,但重度老化时则出现完全相反的现象[8-11]㊂外源H2O2引发下燕麦种胚细胞和线粒体中也发现了相似的变化规律[12-13]㊂老化燕麦种子的种胚细胞与线粒体在引发过程中会协同发挥作用,且线粒体是其发挥清除R O S作用的最主要部位[14]㊂然而,植物种胚细胞及线粒体A s A-G S H循环如何协同响应外源H2O2引发处理尚未见报道,其是否与老化种子的引发处理具有相同的规律也仍然不清楚㊂所以本试验旨在探讨燕麦种胚细胞和线粒体A s A-G S H循环对不同浓度外源H2O2引发的响应,以验证内源H2O2含量变化与种子活力水平的内在关系,从而为精确揭示种子老化的内在抗氧化机制提供理论依据㊂1材料与方法1.1H2O2引发处理将均匀饱满的 太阳神 燕麦种子(具体来源及详细信息见文献[12-13])分为约10g每份,并参照文献[15]的方法将其含水量调整至鲜重基础约10%,然后用200m L浓度分别为0,0.96,1.92,3.84和7.68 m o l㊃L-1的H2O2在室温黑暗条件下浸泡12h后,快速用蒸馏水冲洗3次,用滤纸吸掉其表层水分后,于室温黑暗环境中风干至含水量10%(鲜重基础)左右时进行密封,并于4ħ下保存备用㊂以未引发处理的燕麦种子作为对照(C K)㊂每个处理重复4次㊂1.2发芽试验按照国际种子检验协会发布的种子检验规程(2017)[16]规定的条件进行,具体操作方法参照文献[17]进行,并按照公式G p=(G10/N)ˑ100%来计算其发芽率,式中G p代表种子发芽率,G10代表末次计数第10天时的正常发芽种子数,N代表供试发芽种子的总数[16]㊂1.3生理指标的测定提取种胚细胞粗酶液参考K i b i n z a等[18]的方法,具体操作参照文献[12]进行;提取与纯化种胚线粒体则参照Y i n等[19]的方法,具体操作参照文献[13]进行㊂测定可溶性蛋白和H2O2含量采用了建成生物工程研究所的试剂盒,测定MD A含量参考B a i l l y等[20]的方法,测定S O D活性参考R a o等[21]的方法,测定A P X和D HA R活性参考N a k a n o等[22]的方法,测定MD HA R活性参考A r r i g o n i等[23]的方法,测定G R活性参考E s t e r-b a u e r等[24]的方法,测定A s A和脱氢抗坏血酸(D e h y d r o a s c o r b i c a c i d,D HA)含量参照K a m p f e n-k e l等[25]的方法,测定G S H和氧化型谷胱甘肽(O x i d i z e d g l u t a t h i o n e,G S S G)含量参照G r i f f i t h[26]的方法㊂1.4数据分析采用S P S S21.0和E x c e l2010统计软件整理试验数据,并进行方差分析,多重比较则用D u n-c a n s法(P<0.05),以 平均值ʃ标准误 表示最后结果㊂2结果与分析2.1燕麦种子发芽率的变化由图1可知,燕麦种子的发芽率在H2O2浓度为0m o l㊃L-1时与C K无显著性差异,但在H2O2浓度ȡ0.96m o l㊃L-1时显著低于C K(P<0.05),且在H2O2浓度为7.68m o l㊃L-1时为0㊂5601Copyright©博看网. All Rights Reserved.草 地 学 报第31卷图1 H 2O 2引发下燕麦种子发芽率的变化F i g .1 C h a n g e s i n g e r m i n a t i o n p e r c e n t a ge of o a t s e e d su n d e rH 2O 2pr i m i n g 注:不同字母表示存在显著性差异(P <0.05)㊂下同N o t e :D i f f e r e n t l e t t e r s i n d i c a t e s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e s a t t h e 0.05l e v e l .S i m i l a r l y f o r t h e o f l o w i n g f i gu r e s 2.2 燕麦种胚细胞和线粒体内H 2O 2和MD A 含量变化燕麦种胚细胞和线粒体内M D A 和H 2O 2含量随H 2O 2浓度的增大呈不断上升趋势(图2)㊂0m o l ㊃L -1H 2O 2引发时,燕麦种胚细胞和线粒体内M D A ,H 2O 2含量均与C K 无显著性差异,但0.96~7.68m o l㊃L -1H 2O 2引发时,燕麦种胚细胞和线粒体内M D A 和H 2O 2含量呈显著升高趋势(P <0.05),且均显著高于C K (P <0.05)㊂H 2O 2浓度为0~1.92m o l ㊃L -1时,燕麦种胚细胞内H 2O 2含量低于线粒体内,但H 2O 2浓度为3.84m o l ㊃L -1和7.68m o l㊃L -1时,燕麦种胚细胞内H 2O 2含量则高于线粒体内;H 2O 2浓度为0和0.96m o l ㊃L -1时,燕麦种胚细胞内M D A 含量低于线粒体内,但H 2O 2浓度为1.92~7.68m o l ㊃L -1时,燕麦种胚细胞内M D A 含量则高于线粒体内㊂图2 H 2O 2引发下燕麦种胚细胞和线粒体内H 2O 2(A )和M D A (B )含量的变化F i g .2C h a n g e s i nH 2O 2(A )a n d MD A (B )c o n t e n t s o f e m b r y o n i c c e l l s a n dm i t o c h o n d r i a i no a t s e e d su n d e rH 2O 2pr i m i n g 2.3 燕麦种胚细胞和线粒体内抗氧化酶活性变化燕麦种胚细胞和线粒体内S O D ,A P X ,G R ,M D H A R 和D H A R 活性随H 2O 2浓度的增大呈先升后降趋势(图3)㊂H 2O 2浓度为0m o l ㊃L -1时,燕麦种胚细胞和线粒体内S O D ,A P X ,G R ,M D H A R 和D H A R 活性都与C K 无显著性差异㊂种胚细胞S O D和G R 活性在H 2O 2浓度为1.92m o l ㊃L -1时显著高于其他浓度时(P <0.05),但其种胚线粒体S O D 和G R 活性在0.96m o l ㊃L -1H 2O 2引发时显著高于其他浓度时(P <0.05);种胚细胞及线粒体S O D 活性在H 2O 2浓度为7.68m o l ㊃L -1时仍均显著高于C K (P <0.05),种胚细胞G R 活性在H 2O 2浓度为7.68m o l ㊃L -1时也仍显著高于C K (P <0.05),但其种胚线粒体G R 活性在H 2O 2浓度为7.68m o l ㊃L -1时则显著低于C K (P <0.05)㊂种胚细胞A P X 活性在H 2O 2浓度为0.96m o l ㊃L -1时显著高于其他浓度时(P <0.05),其种胚线粒体A P X 活性在1.92m o l㊃L -1H 2O 2引发时显著高于其他浓度时(P <0.05);种胚细胞A P X 活性在H 2O 2浓度为3.84m o l ㊃L -1时已显著低于C K (P <0.05),但其种胚线粒体A P X活性在H 2O 2浓度为7.68m o l ㊃L -1时才显著低于C K (P <0.05)㊂种胚细胞和线粒体M D H A R 和D HA R 活性在0.96m o l ㊃L -1H 2O 2引发时均显著高于其他浓度时(P <0.05);种胚细胞M D H A R 和D HA R 活性在H 2O 2浓度为3.84m o l ㊃L -1时均已显著低于C K (P <0.05),其种胚线粒体M D H A R 活性则在H 2O 2浓度为1.92m o l ㊃L -1时就已显著低于C K (P <0.05),而种胚线粒体D H A R 活性则在H 2O 2浓度为7.68m o l ㊃L -1时才显著低于C K (P <0.05)㊂6601Copyright ©博看网. All Rights Reserved.第4期李红玉等:燕麦种胚细胞和线粒体A s A -G S H 循环对外源H 2O 2引发的响应图3 H 2O 2引发下燕麦种胚细胞和线粒体内As A -G S H 循环抗氧化酶的活性变化F i g .3 C h a n g e s i n t h e a n t i o x i d a n t e n z y m e s a c t i v i t i e s o f i nA s A -G S Hc y c l e s i ne m b r yo n i c c e l l s a n dm i t o c h o n d r i a o f o a t s e e d su n d e rH 2O 2pr i m i n g 2.4 燕麦种胚细胞和线粒体内A s A 含量变化随着H 2O 2引发浓度的增加,燕麦种胚细胞和线粒体内A s A 含量均呈现逐渐下降趋势,而两者D H A 含量则均呈现先升高后降低的趋势(图4)㊂H 2O 2浓度为0m o l ㊃L -1时,燕麦种胚细胞内A s A 含量显著高于C K (P <0.05),但其种胚线粒体内A s A 含量则与C K 无显著性差异,燕麦种胚细胞和线粒体内D H A 含量均与C K 无显著性差异㊂燕麦种胚细胞和线粒体A s A 含量均在H 2O 2浓度为0.96m o l ㊃L -1时就显著低于C K (P <0.05),在H 2O 2浓度为7.68m o l ㊃L -1时显著低于其他浓度(P <0.05);燕麦种胚细胞D H A 含量在H 2O 2浓度为0.96m o l㊃L -1时快速上升,并显著高于其他浓度时(P <0.05),而其种胚线粒体D H A 含量在1.92m o l ㊃L -1H 2O 2引发时仍显著高于其他浓度时(P <0.05),且其种胚细胞和线粒体D H A 含量均在H 2O 2浓度为7.68m o l ㊃L -1时仍显著高于C K (P <0.05)㊂7601Copyright ©博看网. All Rights Reserved.草 地 学 报第31卷图4 H 2O 2引发下燕麦种胚细胞和线粒体内As A (A )及D H A (B )的含量变化F i g .4 C h a n g e s i n t h eA s A (A )a n dD HA (B )c o n t e n t s o f e m b r yo n i c c e l l s a n dm i t o c h o n d r i a i no a t s e e d s u n d e rH 2O 2pr i m i n g 2.5 燕麦种胚细胞和线粒体内G S H 含量变化随着H 2O 2引发浓度的增加,燕麦种胚细胞和线粒体内G S H 含量均呈现逐渐下降趋势,而其种胚细胞和线粒体内G S S G 含量则均呈现先升高后降低的趋势(图5)㊂H 2O 2浓度为0mo l ㊃L -1时,燕麦种胚细胞内G S H 和G S S G 含量均与C K 无显著差异㊂燕麦种胚细胞和线粒体G S H 含量均在H 2O 2浓度为0.96m o l ㊃L -1时已显著低于C K (P <0.05),在H 2O 2浓度为7.68m o l ㊃L -1时显著低于其他浓度(P <0.05);燕麦种胚细胞和线粒体G S S G 含量在H 2O 2浓度为0.96m o l㊃L -1时均显著高于其他浓度时(P <0.05),而在7.68m o l ㊃L -1H 2O 2引发时均显著低于其他浓度时(P <0.05);但燕麦种胚细胞G S S G 含量在H 2O 2浓度为3.84m o l ㊃L -1时已显著低于C K (P <0.05),而其种胚线粒体G S S G 含量则在H 2O 2浓度为7.68m o l ㊃L -1时才显著低于C K (P <0.05)㊂图5 H 2O 2引发下燕麦种胚细胞和线粒体内GS H (A )及G S S G (B )的含量变化F i g .5 C h a n g e s i nG S H (A )a n dG S S G (B )c o n t e n t s o f e m b r y o n i c c e l l s a n dm i t o c h o n d r i a i no a t s e e d su n d e rH 2O 2pr i m i n g 3 讨论H 2O 2在植物体内所发挥的生理生化作用具有明显的浓度效应,低浓度时是植物细胞内抵御各种非生物胁迫的小分子信号物质,但高浓度时则会引起植物细胞的程序性死亡[27-28]㊂因此,外源H 2O 2引发处理对种子萌发的影响与其浓度具有密切关系[17]㊂本试验发现,低浓度(0.96m o l ㊃L -1)H 2O 2引发处理时,燕麦种子发芽率与浓度为0m o l ㊃L -1及C K 间无显著性差异,说明低浓度的H 2O 2引发能使高活力(发芽率可达100%)燕麦种子的发芽率保持较高水平,这与前人在水稻(O r y z a s a t i v a )[29]㊁臭椿(A i l a n t h u sa l t i s s i m a )[30]及茎瘤芥(B r a s s i c aju n c e a )[31]等植物种子的研究中存在差异,主要是因为前人所有种子的发芽率几乎都不高于80%,而低活力种子需要一定的H 2O 2诱导才能激活其萌发代谢及相关免疫反应[17]㊂高浓度(ȡ1.92m o l ㊃L -1)H 2O 2引发处理时,燕麦种子发芽率显著降低(P <0.05),浓度为7.68m o l㊃L -1时已基本丧失活力,这与在水稻[29]㊁臭椿[30]及茎瘤芥[31]等植物种子中的研究结论相似㊂这可能是高浓度H 2O 2处理使其在植物种子内迅速积累而导致了细胞膜系统的损伤,从而造成种子内电解质和大量代谢物质的外渗,最终表现为种子丧失活力[32]㊂燕麦种子内H 2O 2的过量积累会使其抗氧化酶活性大幅度降低,并导致其种胚细胞和线粒体发生脂质过氧化损伤,表现为两者M D A 含量大量增8601Copyright ©博看网. All Rights Reserved.第4期李红玉等:燕麦种胚细胞和线粒体A s A-G S H循环对外源H2O2引发的响应加[9-10]㊂因此,高浓度H2O2引发处理引起的脂质过氧化损伤可能是导致燕麦种子活力逐渐丧失的主要原因[17]㊂试验中,燕麦种胚细胞和线粒体S O D, A P X,G R,M D H A R和D H A R活性,以及两者内M D A,H2O2,A s A,G S H,D H A和G S S G含量变化均具有相同的规律,说明燕麦种胚细胞和线粒体A s A-G S H循环对于外源H2O2引发的响应具有协同性,这与P E G引发下老化燕麦种子的响应一致[14]㊂低浓度(0.96m o l㊃L-1)H2O2引发处理时,燕麦种胚细胞和线粒体内H2O2含量已均显著高于浓度为0m o l㊃L-1及C K(P<0.05),这说明已经造成了燕麦种胚细胞和线粒体内H2O2积累,因而其M D A含量也显著高于C K(P<0.05),表明发生了脂质过氧化损伤㊂此时,燕麦种胚细胞和线粒体内S O D,A P X,G R,M D H A R和D HA R活性也均显著高于浓度为0m o l㊃L-1及C K(P<0.05),这说明此时燕麦种胚细胞和线粒体A s A-G S H循环的关键酶仍具有较高的清除R O S的能力,因而其A s A 和G S H含量会显著低于浓度为0m o l㊃L-1及C K (P<0.05),且其D H A和G S S G含量则均显著高于浓度为0m o l㊃L-1及C K(P<0.05),这说明A s A和G S H被作为A s A-G S H循环的底物而大量用于清除种胚细胞及线粒体内R O S[33]㊂然而H2O2浓度为1.92m o l㊃L-1时,尽管燕麦种胚细胞和线粒体A s A-G S H循环的关键酶的活性仍保持较高水平,但其抗氧化能力已经开始逐渐减弱,表现为其种胚细胞和线粒体M D H A R和D H A R活性显著低于H2O2浓度为0.96m o l㊃L-1时(P<0.05),其A s A和G S H含量也继续显著降低(P<0.05),因而其H2O2和M D A含量也继续显著增加(P< 0.05),燕麦种子的发芽率也显著降低(P<0.05)㊂种子内A s A-G S H循环中M D H A R,D H A R及G S H的主要功能是使循环中A s A能够再生[33],因而高浓度H2O2造成A s A含量及其再生功能降低是导致燕麦种子活力丧失的主要原因,这是因为燕麦种子内M D H A R和D H A R对于A s A的再生具有更重要的催化作用[15,34]㊂4结论燕麦种子发芽率在高浓度外源H2O2引发下降低是其种胚细胞和线粒体A s A-G S H循环的抗氧化功能降低造成的,二者对H2O2浓度升高的响应具有协同性,而种胚细胞和线粒体内A s A含量及其再生功能降低是高浓度H2O2造成燕麦种子活力逐渐丧失的主要原因㊂参考文献[1]郑怀国,赵静娟,秦晓婧,等.全球作物种业发展概况及对我国种业发展的战略思考[J].中国工程科学,2021,23(4):45-55[2] E B O N E L A,C A V E R Z A N A,C H A V A R R I A G.P h y s i o l o g i ca l t e r a t i o n si n o r t h o d o xs e e d sd u et od e t e r i o r a t i o n p r o c e s s e s[J].P l a n t P h y s i o l o g y a n dB i o c h e m i s t r y,2019(145):34-42 [3] L IY,WA N G Y,X U E H,e t a l.C h a n g e s i nt h em i t o c h o n d r i a lp r o t e i n p r o f i l e d u e t oR O Se r u p t i o nd u r i n g a g e i n g o f e l m(U l-m u s p u m i l a L.)s e e d s[J].P l a n tP h y s i o l o g y a n dB i o c h e m i s-t r y,2017(114):72-87[4] X I AFS,C H E N G H,C H E NLL,e t a l.I n f l u e n c e o f e x o g e n o u sa s c o rb ic a c i da nd g l u t a t h i o ne p r i m i n g o n m i t o c h o n d r i a l s t r u c-t u r a l a n df u n c t i o n a l s y s t e m st oa l l e v i a t ea g i n g d a m a g e i no a t s e e d s[J].B M CP l a n tB i o l o g y,2020(20):104[5] L I B E R A T O R E K L,D U K OW I C-S C HU L Z E S,M I L L E R ME,e ta l.T h er o l eo fm i t o c h o n d r i ai n p l a n td e v e l o p m e n ta n d s t r e s s t o l e r a n c e[J].F r e eR a d i c a lB i o l o g y a n d M e d i c i n e,2016 (100):238-256[6] MA R TíA M C,F L O R E Z-S A R A S AI,C AM E J O AD,e t a l.R e-s p o n s eo f m i t o c h o n d r i a la n t i o x i d a n ts y s t e m a n d r e s p i r a t o r y p a t h w a y s t o r e a c t i v e n i t r o g e n s p e c i e s i n p e a l e a v e s[J].P h y s-i o l o g i aP l a n t a r u m,2013,147(2):194-206[7] WA N G Y,L IY,X U E H,e t a l.R e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s-p r o-v o k e dm i t o c h o n d r i a-d e p e n d e n t c e l l d e a t hd u r i n g a g e i n g o f e l m (U l m u s p u m i l a L.)s e e d s[J].T h eP l a n tJ o u r n a l,2015,81(3):438-452[8] X I N X,T I A N Q,Y I N G K,e t a l.R e d u c e dm i t o c h o n d r i a l a n da s c o rb a t e-g l u t a t h i o n e ac t i v i t y a f t e ra r t i f i c i a l a g e i n g i ns o y b e a ns e e d[J].J o u r n a l o f P l a n tP h y s i o l o g y,2014,171(2):140-147 [9] X I AF,C H E N L,S U N Y,e t a l.R e l a t i o n s h i p sb e t w e e nu l t r a-s t r u c t u r eo fe m b r y oc e l l sa n d b i o c h e m i c a lv a r i a t i o n sd u r i n ga g e i n g o f o a t(A v e n a s a t i v a L.)s e e d sw i t hd i f f e r e n tm o i s t u r ec o n t e n t[J].A c t aP h y s i o l o g i a eP l a n t a r u m,2015(37):1-11[10]X I A F,WA N G X,L I M,e ta l.M i t o c h o n d r i a l s t r u c t u r a l a n da n t i o x i d a n t s y s t e mr e s p o n s e s t o a g i n g i n o a t(A v e n a s a t i v a L.)s e e d sw i t hd i f f e r e n tm o i s t u r ec o n t e n t s[J].P l a n tP h y s i o l o g ya n dB i o c h e m i s t r y,2015,94:122-129[11]唐嘉,毛培胜,毛春力,等.不同活力水平老芒麦种胚线粒体的抗氧化生理变化[J].中国草地学报,2021,43(5):1-7[12]李红玉,王雅聪,曾佳,等.外源H2O2引发对燕麦种胚细胞A s A-G S H循环的影响[J].草地学报,2022,30(7):1668-1674[13]李红玉,王雅聪,夏方山,等.外源H2O2引发对燕麦种胚线粒体A s A-G S H循环的影响[J].草地学报,2022,30(9):86-94 [14]夏方山,董秋丽,毛培胜,等.P E G引发对老化燕麦种胚细胞与线粒体结构及抗氧化性能的影响[J].草业学报,2018,27(5): 170-177[15]夏方山.不同老化处理对燕麦种子线粒体结构及抗氧化系统的影响[D].北京:中国农业大学,2015:20-219601Copyright©博看网. All Rights Reserved.草地学报第31卷[16]A N O N.I n t e r n a t i o n a l r u l e s f o rs e e dt e s t i n g:T h e g e r m i n a t i o nt e s t[M].Z u r i c h:I n t e r n a t i o n a lS e e d T e s t i n g A s s o c i a t i o n, 2017:25[17]夏方山,王婷婷,董秋丽,等.外源H2O2处理对燕麦种子活力的影响[J].草业学报,2018,27(3):201-207[18]K I B I N Z AS,V I N E LD,CÔM ED,e t a l.S u n f l o w e r s e e d d e t e r i-o r a t i o na sr e l a t e dt o m o i s t u r ec o n t e n td u r i n g a g e i n g,e n e r g y m e t a b o l i s ma n d a c t i v e o x y g e n s p e c i e s s c a v e n g i n g[J].P h y s i o l-o g y a n dP l a n t,2006,128(3):496-506[19]Y I N G,S U N H,X I N X,e ta l.M i t o c h o n d r i a ld a m a g e i nt h es o y b e a ns e e da x i sd u r i n g i m b i b i t i o na tc h i l l i n g t e m p e r a t u r e s [J].P l a n t a n dC e l l P h y s i o l o g y,2009,50(7):1305-1318 [20]B A I L L YC,B E N AMA R A,C O R B I N E A UF,e t a l.C h a n g e s i nm a l o n d i a l d e h y d ec o n t e n ta n d s u p e r o x i d e d i s m u t a s e,c a t a l a s ea n d g l u t a t h i o n e r e d u c t a s e a c t i v i t i e s i n s u n f l o w e r s e e d s a s r e l a t-e d t od e t e r i o r a t i o nd u r i n g a c c e l e r a t e da g i n g[J].P h y s i o l o g i aP l a n t a r u m,1996(97):104-111[21]R A O K V,S R E S T Y T V S.A n t i o x i d a t i v e p a r a m e t e r s i nt h es e e d l i n g s o f p i g e o n p e a(C a j a n u s c a j a n(L.)M i l l s p a u g h)i n r e s p o n s e t oZ na n d N i s t r e s s e s[J].P l a n tS c i e n c e,2000,157(1):11328[22]N A K A N O Y,A S A D A K.H y d r o g e n p e r o x i d e s c a v e n g e db y a-s c o r b a t e-s p e c i f i c p e r o x i d a s e i ns p i n a c hc h l o r o p l a s t[J].P l a n ta n dC e l l P h y s i o l o g y,1981,22(5):867-880[23]A R R I G O N IO,D I P I E R OS,B O R R A C I N O G.A s c o r b a t e f r e er a d i c a l r e d u c t a s e:ak e y e n z y m eo ft h ea s c o r b i ca c i ds y s t e m [J].F E B SL e t t e r s,1981,125(2):242-244[24]E S T E R B A U E R H,G R I L L D.S e a s o n a l v a r i a t i o no f g l u t a t h i-o n e a n d g l u t a t h i o n er e d u c t a s e i nn e e d l e so f P i c e aa b i e s[J].P l a n t P h y s i o l o g y,1978,61(1):11921[25]K AM P F E N K E LK,V A NM O N T A G U M,I N Z ED.E x t r a c t i o na n d d e t e r m i n a t i o n o fa s c o rb a t e a n d d e h y d r o a sc o r b a t ef r o mp l a n t t i s s u e[J].A n a l y t i c a lB i o c h e m i s t r y,1995,225(1):165-167[26]G R I F F I T H O W.D e t e r m i n a t i o no f g l u t a t h i o n ea n d g l u t a t h i-o n ed i s u l f i d eu s i n gg l u t a t h i o n er e d u c t a s ea n d2-v i n y l p y r i d i n e [J].A n a l y t i c a l B i o c h e m i s t r y,1980,106(1):207-212 [27]任艳芳,何俊瑜,杨军,等.外源H2O2对盐胁迫下小白菜种子萌发和幼苗生理特性的影响[J].生态学报,2019,39(20): 7745-7756[28]李俊周,李梦琪,刘磊,等.水稻种子H2O2流速和种子活力的关系研究[J].华北农学报,2017,32(4):189-194 [29]谭志军,黄逸强,王桂元,等.过氧化氢对多胚水稻种子萌发和生长的影响[J].中国水稻科学,1991,5(1):41-44 [30]宋丽华,陶利刚,许扬.双氧水对臭椿㊁刺槐种子发芽的影响[J].宁夏农学院学报,2004,25(1):40-42[31]何士敏,李昌满,于文博.过氧化氢浸种对茎瘤芥种子萌发的影响[J].长江蔬菜,2012(1):22-26[32]P A S Q U I N I S,M I Z Z A U M,P E T R U S S AE,e t a l.S e e d s t o r a g ei n p o l y e t h y l e n e b a g s o f a r e c a l c i t r a n t s p e c i e s(Q u e r c u s i l e x):a-n a l y s i so fs o m eb i o-e n e r g e t i ca n do x i d a t i v e p a r a m e t e r s[J].A c t aP h y s i o l o g i a eP l a n t a r u m,2012(34):1963-1974[33]T U L L I O M CD,A R R I G O N IO.T h e a s c o r b i c a c i ds y s t e mi ns e e d s:t o p r o t e c t a n d t o s e r v e[J].S e e dS c i e n c eR e s e a r c h,2003(13):249-260[34]刘备,宋玉梅,孙铭,等.燕麦劣变种子吸胀过程中线粒体A s A-G S H循环的生理响应[J].草地学报,2021,29(2):211-219(责任编辑闵芝智)0701Copyright©博看网. 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脱氢抗坏血酸结构式
脱氢抗坏血酸结构式
摘要：
1.脱氢抗坏血酸的概述
2.脱氢抗坏血酸的结构式
3.脱氢抗坏血酸的性质与稳定性
4.脱氢抗坏血酸的用途
5.脱氢抗坏血酸的生态学数据
正文：
脱氢抗坏血酸（英文名：dehydroascorbic acid，别名：维生素C，维他命C，丙种维生素，L-抗坏血酸）是一种白色结晶，无气味，具有柠檬酸样酸味。
其分子式为C6H8O6，分子量为176.13。
在干燥空气中，脱氢抗坏血酸是稳定的，但若与空气和光线接触，则会被氧化成脱氢抗坏血酸。
此外，碱、铁和铜等物质会加速其氧化反应。
脱氢抗坏血酸是一种相对强的还原剂，长时间贮存会导致颜色变深，呈现不同程度的浅黄色。
在1 克的产品中，约可以溶解于3 毫升的水、30 毫升的乙醇和50 毫升的乙醚。
脱氢抗坏血酸广泛应用于医药、食品、化妆品等行业。
在医药领域，它可以用于预防和治疗坏血病、增强免疫力等。
在食品和化妆品行业，它具有抗氧化作用，可以保持产品的新鲜度和活性。
然而，脱氢抗坏血酸对环境可能具有一定的危害性。
在接触空气和光线时，容易发生氧化反应，产生有害物质。
因此，在储存和使用过程中，应尽量避免与氧化物接触。
植物谷胱甘肽还原酶的生物学特性及功能_林源秀
different metabolites with redox properties for the ＲOS detoxification． GＲ catalyzes GSSG into GSH using NADPH， which produced by G6PDH． And together with MDAＲ （ monodehydroascorbate reductase ） and DHAＲ （ dehydroascorbate reductase ） ， GＲ provides redox coupling of ascorbate and glutathione，which are antioxidants and play important role in ＲOS scavenging system［5］
Abstract Glutathione reductase （ GＲ； EC 1. 6. 4. 2 ） ，one of the most important bioactive antioxidants in plants，works in the glutathione reducing reaction to generate reduced glutathione （ GSH ） from its oxidized form （ oxidized glutathione，GSSG ） ． In this reaction，GＲ helps scavenging reactive oxygen species （ ＲOS） as reducing power and protects plants from ＲOS damage． In this review ，we focused on GＲ biological functions and characteristics by study their distribution and comparing gene and amino acid sequences． In order to make the discussion clearly，we summarized a huge amount of relative research progresses - plants' GＲ functions in stress conditions and enzymedeficiency researches． As a result，a conclusion on GＲ functions in plant in vivo was made，particularly on the expression and regulation functions of GＲ pathway and physiological functions of metabolic products． Further，we discussed its possible origins of GＲ and made a hypothesis on its evolutionary process based on former research results and our theoretical analysis． This review will make a significant reference for further researches on GＲ． Key words glutathione reductase； biological characteristics； expression regulation； evolution analysis 谷胱甘肽是由 γ谷氨酸与半胱氨酸及甘氨酸 GluCysGly ） ， 组成的三肽 （ γ是植物体内主要的低 分子量巯基化合物， 对清除活性氧 （ reactive oxygen species， ＲOS） 和外源性有害物质及其代谢产物有重 要作用
脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)检测
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脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）检测
脱氢抗坏血酸还原酶（Dehydroascorbate reductase, DHAR）是植物体内一种重要的抗氧化酶，是抗坏血酸-谷胱甘肽（ASA-GSH）循环中的关键酶，通过抗坏血酸-胱甘肽循环将氧化型抗坏血酸还原为还原型抗坏血酸，在维持植物体内抗坏血酸的正常代谢水平，保护细胞组分抵御氧化损伤方面发挥着重要作用。
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脱氢抗坏血酸在重铬酸钾对A549细胞毒性效应中的作用
脱氢抗坏血酸在重铬酸钾对A549细胞毒性效应中的作用画宝勇;马丽华;李时恩【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(048)001【总页数】2页(P136-137)【关键词】重铬酸钾;脱氢抗坏血酸;细胞增殖抑制;A549细胞系【作者】画宝勇;马丽华;李时恩【作者单位】郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室,郑州,450001【正文语种】中文铬在自然界中分布广泛，六价铬[Cr(Ⅵ)]已被证实具有致癌性，其所致的肺癌是8种职业性肿瘤之一。
有研究[1-3]表明，活体细胞内90%的抗坏血酸(ascorbic acid，Asc)参与Cr(Ⅵ)的还原代谢，且是Cr(Ⅵ)的主要还原剂。
机体肺细胞内Asc 的平均水平为1.3 mmol/L[4]，但在体外细胞培养中含量却非常低[5-6]，脱氢抗坏血酸(dehydroascorbic acid，DHA)孵育可以使细胞内氧化形成Asc，使其达到或接近机体正常生理浓度[7]。
Reynolds等[8]发现DHA孵育H460和IMR90细胞90 min后，再用Cr(Ⅵ)染毒细胞，细胞的急性毒性增强。
作者用DHA孵育A549细胞后，观察重铬酸钾(K2Cr2O7)对A549细胞的增殖及毒性作用，探讨DHA在K2Cr2O7致A549细胞损伤中的作用。
1 材料与方法1.1 实验材料、主要试剂人胚肺A549细胞购于武汉大学中国典型培养物保藏中心。
K2Cr2O7 (天津化工厂)，DMEM/F12(美国Gibco公司)，优级胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，DHA、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)(美国Sigma公司)，Sunrise Remote 酶标仪(奥地利TECAN公司)。
1.2 DHA对K2Cr2O7刺激的A549细胞增殖的影响用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养液复苏A549细胞，培养传2代后用于实验。
当A549细胞铺瓶底达80%～90%时，用2.5 g/L的胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，调整密度为4.0 ×104 mL-1，以每孔200 μL接种于96孔板，接种6板。
柑桔汁中脱氢抗坏血酸的还原与抗血酸的测定
柑桔汁中脱氢抗坏血酸的还原与抗血酸的测定MasayoshiSawamura;陈金栋
【期刊名称】《福建热作科技》
【年(卷),期】1992(000)003
【摘要】本文综述了柑桔类果汁中L－脱氢抗坏血酸用12克／升的氢硫化钠溶液进行处理，在35℃下经20分钟后使其转化成L－抗坏血酸（维生素C）已获得了成功，接着用一种简便的液相色谱技术来分析测定柑桔汗中的抗坏血酸含量。
【总页数】3页(P75-77)
【作者】MasayoshiSawamura;陈金栋
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】TS255.44
【相关文献】
1.猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶和脱氢抗坏血酸还原酶cDNA片段的克隆与序列分析 [J], 牛歆雨;雷玉山;梁东;马锋旺;王西锐
2.电位滴定法测定桔汁饮品中抗坏血酸含量研究初报 [J], 陈忠明
3.《橙、柑、桔汁及其饮料中果汁含量的测定》国家标准概况 [J], 徐清渠
4.高效液相色谱法同时测定水果蔬菜中L-抗坏血酸、D-异抗坏血酸、脱氢抗坏血酸及总维生素C的含量 [J], 杨媛;冯晓元;石磊;杨军军;张莹莹;张开春
5.柑桔汁中脱氢抗坏血酸的还原与抗血酸的测定 [J], Sawam.,M;陈金栋
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脱氢抗坏血酸用途
脱氢抗坏血酸用途
脱氢抗坏血酸具有以下多种用途。
首先，它被广泛用作维生素C的膳食补充剂，在很多保健品和营养补充剂中都可以找到它的身影。
其次，脱氢抗坏血酸也被用于制作化妆品，它能够改善皮肤外观，被添加到许多护肤产品和美容用品中。
例如，它可以用于处理烫发和进行免晒美黑应用。
在细胞培养基中，脱氢抗坏血酸被用来确保细胞摄取的维生素C 不含抗坏血酸转运类型。
最后，脱氢抗坏血酸还具有一些药物用途。
研究表明，它可以保护神经元免受中风引起的损伤。
水杨酸处理诱导采后甜瓜抗坏血酸-还原型谷胱甘肽循环代谢清除过氧化氢的作用及机制
水杨酸处理诱导采后甜瓜抗坏血酸-还原型谷胱甘肽循环代谢清除过氧化氢的作用及机制杨 乾，范存斐，王 毅，任亚琳，毕 阳*（甘肃农业大学食品科学与工程学院，甘肃 兰州 730070）摘 要：目的：研究抗坏血酸（ascorbic acid，AsA）-还原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）循环代谢在水杨酸处理采后甜瓜诱导的过量H2O2清除过程中的作用。
方法：用4 mmol/L水杨酸浸泡‘玉金香’厚皮甜瓜10 min，测定处理后果实常温贮藏过程中丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，分析活性氧的积累水平、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和过氧化氢酶（catalase，CAT）活力，以及AsA-GSH循环过程相关酶活力及产物和底物含量。
结果：水杨酸处理降低了果实MDA含量，第10天处理组MDA含量较对照组降低14.6%；显著提高了果实O2－·的产生速率和H2O2含量（P＜0.05），其中处理后第2天O2－·的产生速率高出同期对照组的1.9 倍，第6天H2O2含量高出对照组果实29.7%；提高了果实SOD活力，但抑制了CAT活力，说明H2O2的清除可能是依赖于除酶促系统外的其他系统。
此外，水杨酸处理提高了果实抗坏血酸过氧化物酶、单脱氢抗坏血酸过氧化物酶、脱氢抗坏血酸还原酶和谷胱甘肽还原酶的活力，增加了AsA和氧化型谷胱甘肽的含量，降低了脱氢抗坏血酸和GSH的含量。
结论：水杨酸处理诱导了厚皮甜瓜果实的氧爆，抑制了MDA产生，由水杨酸诱导产生的过量H2O2主要依靠AsA-GSH循环系统清除。
关键词：甜瓜；水杨酸；活性氧；抗坏血酸-还原型谷胱甘肽循环Role and Underlying Mechanism of the Ascorbic Acid-Reduced Glutathione Cycle in Scavenging Hydrogen Peroxide in Postharvest Melons Induced by Salicylic AcidYANG Qian, FAN Cunfei, WANG Yi, REN Yalin, BI Yang*(College of Food Science and Engineering, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China)Abstract: Objective:To ascertain the role of the ascorbic acid-reduced glutathione (AsA-GSH) cycle in scavenging excessive H2O2 in melons induced by salicylic acid (SA) during postharvest storage. Methods: Melon (cv. Yujinxiang) fruit were soaked in 4 mmol/L SA for 10 min, and stored at ambient temperature. Malondialdehyde (MDA) content and the accumulation level of reactive oxygen species, and the activity of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) were determined as well as enzyme activities involved in the AsA-GSH cycle and the contents of substrate and product. Results:SA treatment reduced MDA content, resulting in a 14.6% reduction in MDA content compared with the control group on day 10.SA significantly increased superoxide anion radical production rate and H2O2 content in the fruit (P < 0.05). On day 2 after the treatment, the production rate of superoxide anion radical in the treated group was 1.9 times higher in than that in the control at the same time point, and H2O2 content was 29.7% higher than that in the control on day 6. The chemical increased SOD activity and inhibited CAT activity, suggesting that scavenging of H2O2 is not dependent on the enzymatic system but other systems. Moreover, SA increased the activity of ascorbate peroxidase, glutathione reductase, monodehydroascorbate peroxidase, and dehydroascorbate reductase as well as the contents of ascorbic acid and oxidized glutathione, and decreased the contents of dehydroascorbic acid and reduced glutathione. Conclusion:SA treatment promoted oxygen burst in melons and reduced MDA content. Excessive H2O2 induced by SA was scavenged mainly through the AsA-GSH cycle.Keywords: melon; salicylic acid; reactive oxygen species; ascorbic acid-reduced glutathione cycleDOI:10.7506/spkx1002-6630-20191128-276收稿日期：2019-11-28基金项目：公益性行业（农业）科研专项（201303075）第一作者简介：杨乾（1993—）（ORCID: 0000-0001-9740-7445），男，硕士研究生，研究方向为果蔬采后生物学与技术。
复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制
第４７卷㊀第２期２０２３年３月南京林业大学学报（自然科学版）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．４７，Ｎｏ．２Ｍａｒ．，２０２３㊀收稿日期Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２０２２⁃０１⁃２４㊀㊀㊀㊀修回日期Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２０２２⁃０４⁃２４㊀基金项目：国家自然科学基金项目（３１８６００７３）；生物资源保护与利用湖北省重点实验室２０２０年度开放基金项目（ＰＴ０１２００８）㊂㊀第一作者：刘相泉（ｌｉｕｘｉａｎｇｑｕａｎ２０２１＠１６３．ｃｏｍ）㊂∗通信作者：邓志军（ｄｅｎｇｚｈｉｊｕｎ＠ｈｂｍｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ），副教授㊂㊀引文格式：刘相泉，赵仁菲，朱艳芳，等．复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制［Ｊ］．南京林业大学学报（自然科学版），２０２３，４７（２）：３５－４１．ＬＩＵＸＱ，ＺＨＡＯＲＦ，ＺＨＵＹＦ，ｅｔａｌ．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｅｅｄｖｉｇｏｕｒｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄｉｔｉｏｎ），２０２３，４７（２）：３５－４１．ＤＯＩ：１０．１２３０２／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２００６．２０２２０１０３８．复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制刘相泉，赵仁菲，朱艳芳，邓仕明，李吉涛，邓志军∗（湖北民族大学，生物资源保护与利用湖北省重点实验室，恩施州特色植物资源种质工程技术研究中心，林学园艺学院植物种质资源实验室，湖北㊀恩施㊀４４５０００）摘要：ʌ目的ɔ探明植冠种子库中种子活力变化的生理生态机制，准确认识植冠种子库的生态意义㊂ʌ方法ɔ以复羽叶栾树（Ｋｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ）植冠种子库为研究对象，在果实进入成熟期后每隔一定时间从植冠种子库中采集种子，分别进行萌发测试，种子干质量㊁含水量㊁浸出液电导率㊁丙二醛（ＭＤＡ）含量测定，以及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）㊁抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）㊁过氧化氢酶（ＣＡＴ）㊁脱氢抗坏血酸还原酶（ＤＨＡＲ）等４种主要抗氧化酶活性的测定，并对种子萌发率和各生理指标进行相关性分析㊂ʌ结果ɔ在研究期内，复羽叶栾树植冠种子库中的种子先后经历了生理成熟㊁成熟脱水㊁休眠诱导和休眠解除４个生理时期；各生理时期的种子总体上在模拟的秋季变温条件下萌发最好，其次为春季变温，再次为夏季变温；完成成熟脱水的种子在植冠种子库中宿存期间始终保持着高活力水平；４种抗氧化酶的活性与模拟的春㊁夏㊁秋季节变温条件下的萌发率间具有显著或极显著的正相关性，且均随着种子休眠的诱导而下降，随着种子休眠的解除而升高，表明抗氧化酶在植冠种子库中种子活力的获得和保持中起着重要的积极作用，并证实了种子休眠与萌发的 胚胁迫学说 ㊂ʌ结论ɔ本研究促进了对植冠种子库的深入认识，还发现复羽叶栾树植冠种子库中种子具有较强的活力保持能力，建议在森林经营管理和植被恢复中充分利用其植冠种子库㊂关键词：复羽叶栾树；植冠种子库；种子活力；休眠；萌发；抗氧化酶中图分类号：Ｓ７２２；Ｓ６８５㊀㊀㊀㊀㊀㊀文献标志码：Ａ开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：文章编号：１０００－２００６（２０２３）０２－００３５－０７ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｅｅｄｖｉｇｏｕｒｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａＬＩＵＸｉａｎｇｑｕａｎ，ＺＨＡＯＲｅｎｆｅｉ，ＺＨＵＹａｎｆａｎｇ，ＤＥＮＧＳｈｉｍｉｎｇ，ＬＩＪｉｔａｏ，ＤＥＮＧＺｈｉｊｕｎ∗（ＨｕｂｅｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃＲｅｓｏｕｒｃｅｓＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｆｏｒＧｅｒｍｐｌａｓｍＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃＰｌａｎｔＲｅｓｏｕｒｃｅｓｉｎＥｎｓｈｉＰｒｅｆｅｃｔｕｒｅ，ＴｈｅＰｌａｎｔＧｅｒｍｐｌａｓｍＲｅｓｏｕｒｃｅｓＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＨｕｂｅｉＭｉｎｚｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｅｎｓｈｉ４４５０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ʌＯｂｊｅｃｔｉｖｅɔＴｈｉｓｓｔｕｄｙｅｘｐｌｏｒｅｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｅｅｄｖｉｇｏｒｃｈａｎｇｅｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａｉｎｏｒｄｅｒｔｏａｃｃｕｒａｔｅｌｙｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｓ．ʌＭｅｔｈｏｄɔＡｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫ．ｂｉｐｉｎｎａｔａｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｏｂｊｅｃｔｏｆｓｔｕｄｙ，ａｎｄｓｅｅｄｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋａｔｃｅｒｔａｉｎｔｉｍｅｉｎｔｅｒｖａｌｓａｆｔｅｒｆｒｕｉｔｓｅｎｔｅｒｅｄｔｈｅｒｉｐｅｎｉｎｇｐｅｒｉｏｄ．Ｗｅｔｈｅｎｃｏｎｄｕｃｔｅｄａｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｅｓｔａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈｅｓｅｅｄｄｒｙｍａｓｓ，ｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔ，ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅｃｏｎｔｅｎｔ，ａｎｄａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＳＯＤ，ＡＰＸ，ＣＡＴａｎｄＤＨＡＲ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｗｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｎａｎａｌｙｓｉｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｄｉｃｅｓ．ʌＲｅｓｕｌｔɔＤｕｒｉｎｇｔｈｅｓｔｕｄｙｄｕｒａｔｉｏｎ，ｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｄｆｏｕｒｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｅｒｉｏｄｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｍａｔｕｒｉｔｙ，ｍａｔｕｒｅｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ，ｄｏｒｍａｎｃｙｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｌｅａｓｅ．Ｔｈｅｓｅｅｄｓｉｎｅａｃｈｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｅｒｉｏｄｇｅｎｅｒａｌｌｙｈａｄｔｈｅｂｅｓｔｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｕｎｄｅｒｓｉｍｕｌａｔｅｄａｕｔｕｍｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ，ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｓｐｒｉｎｇａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓａｎｄｓｕｍｍｅｒａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ．Ｔｈｅｖｉｇｏｒｏｆｔｈｅｓｅｅｄｓｗａｓｍａｉｎｔａｉｎｅｄａｔａｈｉｇｈｌｅｖｅｌａｆｔｅｒｍａｔｕｒｅｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｗａｓｆｉｎｉｓｈｅｄ，ａｎｄｔｈｅｆｏｕｒａｎｔｉｏｘｉｄａｓｅｓｐｌａｙｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｐｏｓｉｔｉｖｅｒｏｌｅｉｎｔｈｅａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎａｎｄｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｓｅｅｄｖｉｇｏｒ，ｂｅｉｎｇｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｖｅｗｉｔｈｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓｕｎｄｅｒｓｉｍｕｌａｔｅｄｓｐｒｉｎｇ，ｓｕｍｍｅｒａｎｄａｕｔｕｍｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｔｈｅｙａｌｌｄｅｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｓｅｅｄｄｏｒｍａｎｃｙａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆｄｏｒｍａｎｃｙ，ｗｈｉｃｈａｌｓｏｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈｅ Ｅｍｂｒｙｏｓｔｒｅｓｓｔｈｅｏｒｙ ｏｆｓｅｅｄｄｏｒｍａｎｃｙａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．ʌＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎɔＴｈｉｓｓｔｕｄｙｎｏｔｏｎｌｙｐｒｏｍｏｔｅｓｆｕｒｔｈｅｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｓ，ｂｕｔａｌｓｏｆｉｎｄｓｔｈａｔｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫ．ｂｉｐｉｎｎａｔａｈａｖｅａｓｔｒｏｎｇａｂｉｌｉｔｙｔｏｍａｉｎｔａｉｎｖｉｇｏｒ．Ｆｕｌｌｕｓｅｏｆｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｓｉｎｆｏｒｅｓｔｍａｎａｇｅｍｅｎｔａｎｄｖｅｇｅｔａｔｉｏｎｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎｓｈｏｕｌｄｂｅｅｎｃｏｕｒａｇｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｋｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ；ｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋ；ｓｅｅｄｖｉｇｏｕｒ；ｄｏｒｍａｎｃｙ；ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅ㊀㊀许多植物种子成熟后会在短时间内集中脱落，进入土壤种子库（ｓｏｉｌｓｅｅｄｂａｎｋ），随即或等待萌发［１］；也有相当一部分植物种子成熟后以植冠种子库（ｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋ）的形式宿存在植株上，随后不定时地陆续脱落［２］，宿存时间１ ３０ａ，甚至更长［３］㊂与土壤种子库一样，植冠种子库也是植物的一种生态适应策略，具有调节种子萌发时间㊁维持种子有效供应㊁利于物种保护和植被更新等生态意义［２，４－７］㊂植冠种子库在干旱荒漠区比较普遍，是植物应对干旱环境的一种重要适应特征［３］㊂以往的植冠种子库研究大多聚焦于具有植冠种子库植物的识别㊁种子脱落机理㊁对土壤种子库的补充㊁与植株的关系㊁生态功能以及种子活力的分布与变化特征［３］，鲜有关注湿润地区的植冠种子库以及其中种子活力变化的生理生态机制㊂种子活力是反映种子质量的一个综合性指标［８］，也是植冠种子库实现生态功能的生理基础［３］㊂一般而言，种子发育至生理成熟时其活力水平也达到最高，随后活力会发生不可逆的下降，直至种子死亡，这个种子活力逐渐丧失的过程即为种子老化（ｓｅｅｄａｇｉｎｇ）或种子劣变（ｓｅｅｄｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ）［８－９］㊂在自然条件下，环境温度和湿度是影响种子老化的最重要因素，低温干燥会延缓种子老化，而高温高湿则会加速其老化［８］㊂另外，干湿循环对种子活力也有重要影响，通常初期会提高种子活力，而随后则会加速种子老化［１０］㊂种子老化是一个复杂的生理生态过程，通常与活性氧物质（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅ⁃ｃｉｅｓ，ＲＯＳ）过量产生所引起的氧化胁迫，与超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）㊁过氧化氢酶（ＣＡＴ）㊁抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）等种子自身抗氧化酶的防御作用有关［１１］㊂复羽叶栾树（Ｋｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ）为无患子科（Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ）栾树属落叶乔木［１２］，其枝叶茂密，花果艳丽，速生且适应性强，木材可制家具，因此既是优良的景观树种，也是理想的造林树种；同时，其根与花均可入药，花还可做黄色染料，极具医药和工业应用价值［１２］㊂目前关于复羽叶栾树的研究主要涉及繁育［１３－１４］㊁植物保护［１５］㊁系统发育［１６］和生态修复［１７－１８］等方面，鲜见种子生物学方面的研究，以及有关复羽叶栾树种子生态，尤其是其植冠种子库方面的报道㊂据观察，其植冠种子库可存续约１０个月㊂鉴于复羽叶栾树在造林和生态修复方面的应用潜力［１７－１８］，对其植冠种子库，尤其是植冠种子库中种子活力变化的生理生态机制进行研究，有助于进一步深入认识植冠种子库，且对于该树种的生态应用和管理具有重要的指导意义㊂１㊀材料与方法１．１㊀供试材料种子采集自湖北省恩施市市郊（１０９ʎ０４ᶄ４８ᵡ １０９ʎ５８ᶄ４２ᵡＥ，２９ʎ５０ᶄ３３ᵡ ３０ʎ３９ᶄ３０ᵡＮ）至少１５株树龄相仿的成年复羽叶栾树㊂分５批次采集，时间分别为２０１７年１０月６日（Ｄ１）㊁２０１７年１１月４日（Ｄ２）㊁２０１７年１２月５日（Ｄ３）㊁２０１８年１月６日（Ｄ４）㊁２０１８年２月４日（Ｄ５）㊂１．２㊀种子含水率和干质量测定为了监测种子的发育状态，参照冯景等［１９］的烘干称质量法对采集的每批次种子进行种子含水量和干质量测定㊂干质量（ｍｇ）测定８次重复，每次重复１０００粒种子㊂含水率测定３次重复，每次重复１５粒种子；种子含水率（％）以鲜质量为基础进行计算㊂１．３㊀种子萌发测试为了检测所采集种子的活力，从各种子批次中随机取样，分别在模拟当地（湖北省恩施市）春㊁夏㊁秋季气温的变温培养箱中进行萌发测试㊂在当地气象局近３年的每日气温监测数据基础上，计算春㊁夏㊁秋３个季节的日平均最高温和最低温，依此来设置萌发测试培养箱的变温条件，光照条件统一设置为每天１２ｈ光照和１２ｈ黑暗，每天的光照和黑暗时间分别与变温的高温和低温时间相同步，光合光量子通量密度（ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐｈｏｔｏｎｆｌｕｘｄｅｎ⁃ｓｉｔｙ，ＰＰＦＤ）为（１２１ʃ２）μｍｏｌ／（ｍ２㊃ｓ）㊂３种模拟的季节变温（夜／日）分别为春（１２ħ／２２ħ）㊁夏（２２ħ／３１ħ）㊁秋（１１ħ／２２ħ）㊂每个处理４次重复，每次重复５０粒种子，以用蒸馏水充分湿润６３㊀第２期刘相泉，等：复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制的珍珠岩为培养介质，萌发测试期内适时适量添加蒸馏水，以胚根突破种皮ȡ２ｍｍ作为萌发标准㊂３０ｄ后统计萌发率㊂１．４㊀种子电导率、丙二醛含量及酶活性测定从每批次种子中随机取样，参照文献［２０］的方法进行电导率测定，用以检测不同批次种子电解质渗漏情况㊂每个处理４次重复，每次重复１０粒种子㊂最后计算相对电导率（ｒｅｌａｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ，ＲＥＣ）㊂为了检测不同批次种子的脂质过氧化情况，参照文献［２１］的分光光度法，从每批次种子中随机取样并测定丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）含量㊂每个处理４次重复，每次重复５０粒种子㊂从每批次种子中随机取样并采用分光光度法测定几种主要抗氧化酶的活性㊂超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活性测定参照文献［２２］，抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）的活性测定参照文献［２３］，过氧化氢酶（ＣＡＴ）的活性测定参照文献［２４］，脱氢抗坏血酸还原酶（ｄｅｈｙｄｒｏａｓｃｏｒｂａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＤＨＡＲ）的活性测定参照文献［２５］的分光光度法㊂均设４次生物学重复，每次重复５０粒种子㊂１．５㊀数据处理使用Ｒ４．１．２软件完成作图㊁Ｐｅａｒｓｏｎ相关性分析㊁方差分析及多重比较（Ｓｔｕｄｅｎｔ⁃Ｎｅｗｍａｎ⁃Ｋｅｕｌｓ，Ｓ⁃Ｎ⁃Ｋ，Ｐ＝０．０５）㊂为保证方差齐性，所有以百分率表示的数据在统计分析前首先进行反正弦转换㊂统计数据均以平均值ʃ标准误表示㊂２㊀结果与分析２．１㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子含水率和干质量的变化及影响萌发的因素㊀㊀研究期内，复羽叶栾树植冠种子库中种子的含水率和干质量均发生了显著变化（图１）㊂Ｄ１ Ｄ３时期内，种子含水率持续显著下降（Ｐ＜０．０５），Ｄ３期以后，含水率保持在最低水平，不再有显著变化（Ｐ＞０．０５）㊂而种子干质量则呈现出 升 降 升 的变化趋势，Ｄ２时期的干质量最大，显著高于其他４个时期㊂分析发现，宿存时间和萌发温度均对复羽叶栾树种子萌发具有极显著影响（Ｐ＜０ ０１），且宿存时间和萌发温度之间存在显著的交互作用（图２，表１，Ｐ＜０ ０５）㊂总体上，随着宿存时间的延长，种子在３种模拟季节变温下的萌发率都大致呈现出 升 降 升 的变化趋势，最低萌发率均出现在Ｄ４时期；Ｄ４时期种子在夏季变温下的萌发率最低，为（３７．５ʃ８ ３）％，而最高萌发率则均出现在Ｄ２时期和Ｄ５时期，Ｄ５时期种子在秋季变温下的萌发率最高，为（９４．５ʃ１．７）％曲线上不同小写英文字母表示不同采种期间差异显著（Ｓ⁃Ｎ⁃Ｋ，Ｐ＜０．０５）㊂下同㊂Ｔｈｅｒｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｔｈｅｓｔａｔｉｓ⁃ｔｉｃａｌｖａｌｕｅｓｍａｒｋｅｄｗｉｔｈｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｓ（Ｓ⁃Ｎ⁃Ｋ，Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．图１㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子含水量和干质量的变化Ｆｉｇ．１㊀ＣｈａｎｇｅｓｏｆｍｏｉｓｔｕｒｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｄｒｙｍａｓｓｏｆｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ春㊁夏㊁秋为研究区春㊁夏和秋季模拟变温㊂Ｓｐｒｉｎｇ，ｓｕｍｍｅｒａｎｄａｕｔｕｍｎｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｆｅｒｔｏｔｈｅｓｐｒｉｎｇ，ｓｕｍｍｅｒａｎｄａｕｔｕｍｎｓｅａｓｏｎａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｓｉｍｕｌａｔｅｄＥｎｓｈｉＣｉｔｙｉｎＨｕｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ．图２㊀３种模拟季节变温下植冠种子库中不同宿存时间种子的萌发率Ｆｉｇ．２㊀Ｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｓｅｅｄｓｓｔｏｒｅｄｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｕｒａｔｉｏｎｕｎｄｅｒｔｈｒｅｅａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓｉｍｕｌａｔｅｄｓｅａｓｏｎａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ表１㊀宿存时间和萌发温度对种子萌发影响的双因素方差分析Ｔａｂｌｅ１㊀Ｔｈｅｔｗｏ⁃ｗａｙＡＮＯＶＡｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ变异来源ｓｏｕｒｃｅｏｆｖａｒｉａｔｉｏｎｄｆＦＰ宿存时间ｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅ４３２．８１８＜０．００１萌发温度ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ２２８．０４４＜０．００１宿存时间ˑ萌发温度ｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅˑｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ８２．６８８０．０１７㊀㊀注：宿存时间对应５个采种日期㊂Ｔｈｅｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｓｔｏｆｉｖｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄａｔｅｓｏｆｓｅｅｄｈａｒｖｅｓｔ．７３南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷２．２㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子生理生化指标的变化㊀㊀变温处理下，复羽叶栾树植冠种子库宿存种子丙二醛（ＭＤＡ）含量㊁相对电导率（ＲＥＣ）变化情况见图３㊂由图３Ａ㊁３Ｂ可知，随着种子在植冠种子库中宿存时间的延长，种子ＲＥＣ与ＭＤＡ含量均有极显著变化（Ｆ电导率＝２５３．９６３，Ｐ电导率＜０．０１；ＦＭＤＡ＝１８ ３３８，ＰＭＤＡ＜０．０１）㊂Ｄ１ Ｄ５时期，种子中的ＭＤＡ含量呈现出 降 升 降 的变化趋势，最高值出现在Ｄ４时期，最低值分别出现在Ｄ２和Ｄ５时期（图３Ａ）；而相对电导率在Ｄ１ Ｄ３时期未发生显著变化（Ｐ＞０．０５），保持在最低水平，随后在Ｄ３ Ｄ５时期持续显著升高（Ｐ＜０ ０５，图３Ｂ）㊂植冠种子库中复羽叶栾树种子内几种主要抗氧化酶活性的变化见图３㊂由图３Ｃ ３Ｆ可知，种子在树冠上宿存期间，其ＳＯＤ㊁ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性均呈现出先降后升的变化趋势，Ｄ１ Ｄ３时期均无显著变化（Ｐ＞０．０５），然后在Ｄ４时期降至最低水平，随后又上升至初始水平（ＳＯＤ和ＤＨＡＲ）或比初始更高的水平（ＣＡＴ）；而ＡＰＸ活性则呈现出 升 降 升 的变化趋势，Ｄ１和Ｄ４时期的活性最低，Ｄ２和Ｄ５时期的活性最高㊂图３㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子ＭＤＡ含量㊁相对电导率及４种酶活性的变化Ｆｉｇ．３㊀ＴｈｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ，ｒｅｌａｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｆｏｕｒｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫ．ｂｉｐｉｎｎａｔａ２．３㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子各生理指标间的相关性㊀㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子各生理指标间的相关性见表２㊂由表２可知，种子干质量与含水量及模拟春季变温下的萌发率均呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１），与模拟夏季变温下的萌发率呈显著正相关（Ｐ＜０．０５）；种子含水量与模拟春季变温下的萌发率呈显著正相关（Ｐ＜０．０５），与模拟秋季变温下的萌发率及相对电导率呈显著负相关（Ｐ＜０ ０５）㊂模拟春季变温下的萌发率与模拟夏季变温下的萌发率及ＳＯＤ活性间极显著正相关（Ｐ＜０ ０１），与ＡＰＸ㊁ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性呈显著正相关（Ｐ＜０ ０５），与ＭＤＡ含量呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１）㊂模拟夏季变温下的萌发率与模拟秋季变温下的萌发率及ＳＯＤ㊁ＡＰＸ㊁ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性间均呈显著正相关（Ｐ＜０ ０５），与ＭＤＡ含量呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１）㊂模拟秋季变温下的萌发率与ＡＰＸ㊁ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性间均呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１），与相对电导率呈显著正相关（Ｐ＜０ ０５），与ＭＤＡ含量呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１）；ＭＤＡ含量与ＳＯＤ㊁ＡＰＸ和ＣＡＴ活性均呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１），与ＤＨＡＲ活性呈显著负相关（Ｐ＜０ ０５）；ＳＯＤ活性与ＡＰＸ和ＣＡＴ活性呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１），与ＤＨＡＲ活性呈显著正相关（Ｐ＜０ ０５）；ＡＰＸ活性与ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１）；ＣＡＴ活性与ＤＨＡＲ活性呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１）㊂８３㊀第２期刘相泉，等：复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制表２㊀植冠种子库中种子各活力指标间的相关性分析Ｔａｂｌｅ２㊀ＡＰｅａｒｓｏｎｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｂｅｔｗｅｅｎｖａｒｉｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｖｉｇｏｒｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｆｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋ指标ｉｎｄｅｘ干质量ｄｒｙｍａｓｓ含水量ｍｏｉｓｔｕｒｅｃｏｎｔｅｎｔ萌发率ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅ春ｓｐｒｉｎｇ夏ｓｕｍｍｅｒ秋ａｕｔｕｍｎ相对电导率ＲＥＣＭＤＡ含量ＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ酶活性ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙＳＯＤＡＰＸＣＡＴＤＨＡＲ干质量ｄｒｙｍａｓｓ１含水量ｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔ０．６９３∗∗１萌发率ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅ春ｓｐｒｉｎｇ０．６２５∗∗０．５２８∗１夏ｓｕｍｍｅｒ０．５２６∗０．２１７０．６５３∗∗１秋ａｕｔｕｍｎ０．０３３－０．５５４∗０．１４９０．５２５∗１相对电导率ＲＥＣ－０．１４４－０．５４１∗－０．３４１０．１２３０．５９３∗１ＭＤＡ含量ＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ－０．４９４－０．０１４－０．６７０∗∗－０．７９８∗∗－０．７０３∗∗－０．２０９１酶活性ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙＳＯＤ０．４３８０．２２４０．８１５∗∗０．５５５∗０．４０３－０．１９０－０．７２３∗∗１ＡＰＸ－０．３６１－０．１１７０．５７１∗０．６４７∗０．８１０∗∗０．２６６－０．７３８∗∗０．７３０∗∗１ＣＡＴ－０．３６３－０．０５９０．５９０∗０．６２９∗０．７１２∗∗０．４２７－０．８３７∗∗０．７３６∗∗０．７３４∗∗１ＤＨＡＲ－０．３７２－０．０７５０．５７０∗０．５５２∗０．６６５∗∗０．１７０－０．５９０∗０．６２４∗０．８１７∗∗０．６５９∗∗１㊀㊀注：∗∗．Ｐ＜０．０１；∗．Ｐ＜０．０５㊂３㊀讨㊀论３．１㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子生理活性的变化㊀㊀综合复羽叶栾树植冠种子库中种子含水量㊁干质量和萌发变化，可以判断出，植冠种子库中的种子依次经历了生理成熟（Ｄ１ Ｄ２时期）㊁成熟脱水（Ｄ２ Ｄ３时期）㊁休眠诱导（Ｄ３ Ｄ４期时）和休眠解除（Ｄ４ Ｄ５时期）等４个生理过程㊂其中生理成熟和成熟脱水生理过程在时间上存在着重叠，在生理成熟过程中即伴随着成熟脱水㊂当种子完成生理成熟达到最大干质量后，种子干质量又发生了先下降（Ｄ３时期）后升高（Ｄ５时期）的变化㊂这或许是因为种子达到生理成熟后，内部生理活动尚未停止，呼吸作用会消耗一部分营养物质，从而使干质量发生下降，直至休眠诱导完成后（Ｄ４时期）生理活动几乎趋于完全停止时为止［２６］；而后随着种子休眠的解除，种子生理活动被重新激活，还未彻底枯死果实中的营养物质还有可能被继续运输至种子保存，从而使种子干质量再次上升［２７］㊂由此可知，植冠种子库中的种子在宿存早期或许发生着复杂的生理变化，而这应该也是与土壤种子库的重要差异之一㊂种子休眠与萌发特性是植物的一种重要适应特征，使种子在合适的时空条件下萌发成苗［２８］㊂总体上看来，复羽叶栾树植冠种子库中宿存不同时间的种子在模拟的当地秋季变温下萌发最好，其次为春季变温，再次为夏季变温㊂这应该是复羽叶栾树对当地环境的一种适应㊂恩施地处长江以南的武陵山区，冬无严寒，种子秋季成熟后萌发所成的幼苗可以安全过冬㊂尽管夏季变温下萌发情况最差，但最低萌发率也达（３７．５ʃ８．３）％㊂值得注意的是，尽管春季和秋季变温仅低温部分相差１ħ，但Ｄ４和Ｄ５时期种子在秋季变温下的萌发率却显著高于春季变温下的萌发率（Ｐ＜０．０５），其背后的生理生态机制值得进一步研究㊂在３种模拟的季节变温下，均是Ｄ４时期的种子萌发率最低，随后Ｄ５时期种子的萌发率又升高至和生理成熟时（Ｄ２时期）相当的水平，表明植冠种子库中的种子在完成成熟脱水后经历了休眠诱导（Ｄ３ Ｄ４时期，２０１７年１２月至２０１８年１月，冬季）和休眠解除（Ｄ４ Ｄ５时期，２０１８年１月至２月，冬末春初）过程，这也是植物的一种生态适应㊂休眠循环（ｄｏｒｍａｎｃｙｃｙｃｌｅ／ｃｙｃｌｉｎｇ）现象是种子休眠与萌发特性在生态适应方面的重要表现形式之一，多见于土壤种子库中［２９－３０］㊂植冠种子库中的种子是否也存在休眠循环现象目前尚未见相关报道㊂由于本研究持续时间不够长，有待进一步研究㊂植冠种子库中种子休眠的诱导与解除，以及活力的逐渐丧失，应该主要与不定期的降水所引起的种子吸湿回干循环有关［１０，３１－３３］，其生理生态机制也值得深入研究㊂３．２㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子氧化伤害及抗氧化防御的变化㊀㊀在正常情况下，细胞中ＲＯＳ（包括超氧阴离子㊁Ｈ２Ｏ２和羟自由基等）的产生量很少，并且保持着一种相对稳态；细胞一旦遭受胁迫，ＲＯＳ就会大量产生从而打破稳态［３４］㊂大量产生的ＲＯＳ一方９３南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷面作为一种激活胁迫响应的信号，另一方面又会导致氧化胁迫［３５－３６］㊂在一定范围内，细胞自身的抗氧化防御系统会及时清除产生的过量ＲＯＳ，但若ＲＯＳ的产生超过抗氧化防御系统的清除能力时，氧化胁迫就会发生，会导致脂质过氧化等伤害，进而使质膜发生破裂［３７］㊂活性氧的清除主要依赖于ＳＯＤ㊁ＡＰＸ和ＣＡＴ等几种主要抗氧化酶［３８－４０］㊂其中，胁迫所致的活性氧的大量清除主要依赖于ＣＡＴ，而ＡＰＸ则因其对Ｈ２Ｏ２的相对高亲和力，可能主要通过微调的方式在胁迫信号转导方面起作用［３７］㊂超氧阴离子首先在ＳＯＤ的催化下转化为Ｈ２Ｏ２，然后Ｈ２Ｏ２再通过水⁃水循环㊁抗坏血酸⁃谷胱甘肽循环㊁谷胱甘肽过氧化物酶循环和ＣＡＴ等途径被还原为水或Ｏ２，从而彻底清除掉ＲＯＳ的氧化破坏性［３７］㊂在本研究中，脂质过氧化产物ＭＤＡ的含量先随种子生理成熟下降，然后随成熟脱水和休眠诱导上升，最后又随休眠解除再次下降，说明在生理成熟和休眠解除过程中脂质过氧化程度呈下降趋势，而成熟脱水和休眠诱导过程中脂质过氧化程度呈上升趋势㊂成熟脱水对于种子来说无疑是一种胁迫㊂按Ｄｅｎｇ等［２８］的观点，休眠对于胚来说实质上也是一种胁迫㊂相对电导率在生理成熟和成熟脱水过程中均没有显著变化，始终保持在最低水平，然后随着休眠诱导和解除则持续升高㊂相对电导率和ＭＤＡ含量间之所以没有显著相关性（Ｐ＞０ ０５），并且ＭＤＡ含量与３种模拟季节变温下的萌发率均极显著负相关（Ｐ＜０．０１），而相对电导率仅与模拟的秋季变温下的萌发率显著正相关（Ｐ＜０ ０５），这可能是因为脂质过氧化（导致ＭＤＡ含量增加）与电解质渗漏（脂质过氧化诱发膜破裂所致）之间存在着程度积累和时间滞后现象所致㊂除了ＳＯＤ活性与模拟的秋季变温下的萌发率间相关性不显著（Ｐ＞０．０５），几种抗氧化酶的活性与３种模拟季节变温下的萌发率间均呈显著正相关（Ｐ＜０．０５），且除了ＤＨＡＲ活性与ＭＤＡ含量呈显著负相关（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ㊁ＡＰＸ和ＣＡＴ活性均与ＭＤＡ含量呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１），表明植冠种子库中的种子在经历生理成熟㊁成熟脱水㊁休眠诱导和解除的过程中，几种抗氧化酶在种子活力获得和保持中起着重要的积极作用㊂值得注意的是，几种抗氧化酶的活性均随着种子休眠的诱导而下降，随着休眠的解除而升高，这似乎再次证明了Ｄｅｎｇ等［２８］２０１６年提出的种子休眠与萌发的 胚胁迫学说 ㊂植冠种子库是植物的一种生态策略，有利于种子有效扩散和适时萌发成苗［４，３８］㊂而种子活力决定着植冠种子库各种生态功能的实现㊂鉴于复羽叶栾树植冠种子库中种子较强的活力保持能力，建议在森林经营管理和植被恢复中充分利用其植冠种子库㊂参考文献（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）：［１］ＷＡＮＧＹＣ，ＪＩＡＮＧＤＭ，ＴＯＳＨＩＯＯ，ｅｔａｌ．Ｒｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｓｏｉｌｓｅｅｄｂａｎｋｒｅｓｅａｒｃｈ［Ｊ］．ＣｏｎｔｅｍｐＰｒｏｂｌＥｃｏｌ，２０１３，６（５）：５２０－５２４．ＤＯＩ：１０．１１３４／ｓ１９９５４２５５１３０５０１８１．［２］ＬＡＭＯＮＴＢＢ，ＰＡＵＳＡＳＪＧ，ＨＥＴＨ，ｅｔａｌ．Ｆｉｒｅａｓａｓｅｌｅｃｔｉｖｅａｇｅｎｔｆｏｒｂｏｔｈｓｅｒｏｔｉｎｙａｎｄｎｏｎｓｅｒｏｔｉｎｙｏｖｅｒｓｐａｃｅａｎｄｔｉｍｅ［Ｊ］．ＣｒｉｔＲｅｖＰｌａｎｔＳｃｉ，２０２０，３９（２）：１４０－１７２．ＤＯＩ：１０．１０８０／０７３５２６８９．２０２０．１７６８４６５．［３］马君，刘志民．植冠种子库及其生态意义研究［Ｊ］．生态学杂志，２００５，２４（１１）：１３２９－１３３３．ＭＡＪ，ＬＩＵＺＭ．Ｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋａｎｄｉｔｓｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ：ａｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＥｃｏｌ，２００５，２４（１１）：１３２９－１３３３．ＤＯＩ：１０．１３２９２／ｊ．１０００－４８９０．２００５．０１５４．［４］ＡＧＵＡＤＯＭ，ＶＩＣＥＮＴＥＭＪ，ＭＩＲＡＬＬＥＳＪ，ｅｔａｌ．ＡｅｒｉａｌｓｅｅｄｂａｎｋａｎｄｄｉｓｐｅｒｓａｌｔｒａｉｔｓｉｎＡｎｔｈｅｍｉｓｃｈｒｙｓａｎｔｈａ（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ），ａｃｒｉｔｉｃａｌｌｙｅｎｄａｎｇｅｒｅｄｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．ＦｌｏｒａＭｏｒｐｈｏｌＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎＦｕｎｃｔＥｃｏｌＰｌａｎｔｓ，２０１２，２０７（４）：２７５－２８２．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｆｌｏｒａ．２０１２．０２．００２．［５］ＢＨＡＴＴＡ，ＰＨＯＮＤＡＮＩＰＣ，ＰＨＡＲＴＹＡＬＳＳ，ｅｔａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆａｅｒｉａｌｓｅｅｄｂａｎｋｓｏｎｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｔｈｒｅｅｄｅｓｅｒｔｐｌａｎｔｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．ＪＰｌａｎｔＥｃｏｌ，２０１６，１０（６）：９９４－１０００．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｊｐｅ／ｒｔｗ１１３．［６］苏文华，崔凤涛，赵元蛟，等．云南松球果延迟开放及其植冠种子库［Ｊ］．生态学报，２０１７，３７（２）：５４１－５４８．ＳＵＷＨ，ＣＵＩＦＴ，ＺＨＡＯＹＪ，ｅｔａｌ．ＣａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋａｎｄｓｅｒｏｔｉｎｏｕｓｃｏｎｅｓｏｆＰｉｎｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓｆｏｒｅｓｔｓ［Ｊ］．ＡｃｔａＥｃｏｌＳｉｎ，２０１７，３７（２）：５４１－５４８．ＤＯＩ：１０．５８４６／ｓｔｘｂ２０１５０７０４１４１４．［７］ＳＵＷＨ，ＹＵＪＥ，ＺＨＡＮＧＧＦ，ｅｔａｌ．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｃａｎｏｐｙａｎｄｓｏｉｌｓｅｅｄｂａｎｋｓｏｆＰｉｎｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓｉｎｃｅｎｔｒａｌＹｕｎｎａｎ，Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＦｏｒＥｃｏｌＭａｎａｇ，２０１９，４３７：４１－４８．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｆｏｒｅｃｏ．２０１９．０１．００２．［８］邓志军，宋松泉，艾训儒．植物种子保存和检测的原理与技术［Ｍ］．北京：科学出版社，２０１９．ＤＥＮＧＺＪ，ＳＯＮＧＳＱ，ＡＩＸＲ．Ｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅａｎｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｐｌａｎｔｓｅｅｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃ⁃ｔｉｏｎ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，２０１９．［９］李振华，王建华．种子活力与萌发的生理与分子机制研究进展［Ｊ］．中国农业科学，２０１５，４８（４）：６４６－６６０．ＬＩＺＨ，ＷＡＮＧＪＨ．Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｓｅｅｄｖｉｇｏｒａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＳｃｉＡｇｒｉｃＳｉｎ，２０１５，４８（４）：６４６－６６０．ＤＯＩ：１０．３８６４／ｊ．ｉｓｓｎ．０５７８－１７５２．２０１５．０４．０３．［１０］陈快．吸湿⁃回干循环对水杉种子活力的影响［Ｄ］．恩施：湖北民族大学，２０２０．ＣＨＥＮＫ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｈｙｄｒａｔｉｏｎ⁃ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｃｙ⁃ｃｌｅｓｏｎｓｅｅｄｖｉｇｏｒｏｆＭｅｔａｓｅｑｕｏｉａｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｏｉｄｅｓ［Ｄ］．Ｅｎｓｈｉ：ＨｕｂｅｉＭｉｎｚｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０２０．［１１］ＬＩＵＨ，ＺＨＵＹＦ，ＬＩＵＸ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄａｇｉｎｇｏｎｔｈｅｖｉｇｏｒｏｆＭｅｔａｓｅｑｕｏｉａｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｏｉｄｅｓｓｅｅｄｓ［Ｊ］．ＪＦｏｒＲｅｓ，２０２０，３１（３）：７６９－７７９．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１１６７６－０１８－０８４０－１．［１２］中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志：第４７卷第１册［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８５：５６．ＥｄｉｔｏｒｉａｌｃｏｍｍｉｔｔｅｅｏｆｆｌｏｒａｏｆＣｈｉｎａ，ＣＡＳ．ＦｌｏｒａｏｆＣｈｉｎａ：ｖｏｌ．４７（１）［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：０４㊀第２期刘相泉，等：复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，１９８５：５６．［１３］钟军弟，蔡进改，张涛，等．复羽叶栾树育苗基质配方的筛选［Ｊ］．北方园艺，２０１７（４）：８３－８９．ＺＨＯＮＧＪＤ，ＣＡＩＪＧ，ＺＨＡＮＧＴ，ｅｔａｌ．ＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｓｕｂｓｔｒａｔｅｆｏｒｍｕｌａｆｏｒｓｅｅｄｌｉｎｇｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ［Ｊ］．ＮｏｒｔｈＨｏｒｔｉｃ，２０１７（４）：８３－８９．ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１７０４０１９．［１４］ＴＡＷＦＩＫＡ，ＩＢＲＡＨＩＭＯ，ＴＡＨＡ．ＭｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａｕｓｉｎｇｊｕｖｅｎｉｌｅａｎｄｍａｔｕｒｅｅｘｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＣｕｒｒＪＡｐｐｌＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ，２０２１，２０（３）：４７０－４７８．ＤＯＩ：１０．１４４５６／ｃａｓｔ．２０２０．３１．［１５］ＹＡＮＧＹ，ＹＡＮＧＹ，ＹＵＹ，ｅｔａｌ．ＦｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆｒｕｓｔｄｉｓｅａｓｅｏｎＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａｃａｕｓｅｄｂｙＮｙｓｓｏｐｓｏｒａｋｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｅｉｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓ，２０１６，１００（５）：１０１４．ＤＯＩ：１０．１０９４／ｐｄｉｓ－１０－１５－１１８２－ｐｄｎ．［１６］ＣＡＯＬＭ，ＬＩＵＪＨ，ＬＩＮＱ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｆｌｏｒａｌｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆＫｏｅｌ⁃ｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａａｎｄｉｔｓｖａｒｉｅｔｙＫ．ｂｉｐｉｎｎａｔａｖａｒ．ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ（Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ）：ｅｖｉｄｅｎｃｅｏｆｆｌｏｒａｌｃｏｎｓｔｒａｉｎｔｓｏｎｔｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏｓｙｍｍｅｔｒｙ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｙｓｔＥｖｏｌ，２０１８，３０４（８）：９２３－９３５．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ００６０６－０１８－１５１９－ｙ．［１７］ＬＵＯＺＨ，ＴＩＡＮＤＬ，ＮＩＮＧＣ，ｅｔａｌ．ＲｏｌｅｓｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａａｓａｓｕｉｔａｂｌｅａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒｔｒｅｅｓｐｅｃｉｅｓｉｎｒｅｍｅｄｉａｔｉｎｇＭｎ，Ｚｎ，Ｐｂ，ａｎｄＣｄｐｏｌｌｕｔｉｏｎｏｎＭｎｍｉｎｉｎｇｗａｓｔｅｌａｎｄｓｉｎＳｏｕｔｈｅｒｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＥｎｖｉｒｏｎＥａｒｔｈＳｃｉ，２０１５，７４（５）：４５４９－４５５９．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１２６６５－０１５－４５１０－８．［１８］李萧萧．复羽叶栾树对Ｃｄ㊁Ｐｂ污染的修复潜力研究［Ｄ］．重庆：西南大学，２０１９．ＬＩＸＸ．ＳｔｕｄｙｏｎｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔｅＦｒａｎｃｈ．ｆｏｒＣｄａｎｄＰｂｐｏｌｌｕｔｉｏｎ［Ｄ］．Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ：ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１９．［１９］冯景，沈永宝，史锋厚．银杏种子脱水敏感性的研究［Ｊ］．南京林业大学学报（自然科学版），２０１９，４３（６）：１９３－２００．ＦＥＮＧＪ，ＳＨＥＮＹＢ，ＳＨＩＦＨ．ＳｔｕｄｙｏｎｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＧｉｎｋｇｏｂｉ⁃ｌｏｂａｓｅｅｄｓ［Ｊ］．ＪＮａｎｊｉｎｇＦｏｒＵｎｉｖ（ＮａｔＳｃｉＥｄ），２０１９，４３（６）：１９３－２００．ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２００６．２０１８０８０２６．［２０］宋松泉．种子生物学研究指南［Ｍ］．北京：科学出版社，２００５：６１－６２．ＳＯＮＧＳＱ．Ｓｅｅｄｂｉｏｌｏｇｙｒｅｓｅａｒｃｈｇｕｉｄｅ［Ｍ］．Ｂｅｉ⁃ｊｉｎｇ：ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，２００５：６１－６２．［２１］ＨＥＡＴＨＲＬ，ＰＡＣＫＥＲＬ．Ｐｈｏｔｏｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎｉｎｉｓｏｌａｔｅｄｃｈｌｏｒｏ⁃ｐｌａｓｔｓ．Ｉ：ｋｉｎｅｔｉｃｓａｎｄｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｙｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｒｃｈＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ，１９６８，１２５（１）：１８９－１９８．ＤＯＩ：１０．１０１６／０００３－９８６１（６８）９０６５４－１．［２２］ＲＡＯＫＶＭ，ＳＲＥＳＴＹＴＶＳ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓｏｆｐｉｇｅｏｎｐｅａ（Ｃａｊａｎｕｓｃａｊａｎ（Ｌ．）Ｍｉｌｌｓｐａｕｇｈ）ｉｎｒｅ⁃ｓｐｏｎｓｅｔｏＺｎａｎｄＮｉｓｔｒｅｓｓｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０００，１５７（１）：１１３－１２８．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ０１６８－９４５２（００）００２７３－９．［２３］ＮＡＫＡＮＯＹ，ＡＳＡＤＡＫ．Ｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅｉｓｓｃａｖｅｎｇｅｄｂｙａｓｃｏｒ⁃ｂａｔｅ⁃ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｉｎｓｐｉｎａｃｈｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ，１９８１，２２（５）：８６７－８８０．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｏｘｆｏｒｄｊｏｕｒｎａｌｓ．ｐｃｐ．ａ０７６２３２．［２４］ＬÜＣＫＨ．Ｃａｔａｌａｓｅ［Ｃ］／／ＢＥＲＧＭＥＹＥＲＨＵ．Ｍｅｔｈｏｄｓｏｆｅｎｚｙ⁃ｍａｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９６５：８８５－８９４．［２５］ＡＲＲＩＧＯＮＩＯ，ＤＥＧＡＲＡＬ，ＴＯＭＭＡＳＩＦ，ｅｔａｌ．ＣｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅａｓｃｏｒｂａｔｅｓｙｓｔｅｍｄｕｒｉｎｇｓｅｅｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＶｉｃｉａｆａｂａＬ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９９２，９９（１）：２３５－２３８．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．９９．１．２３５．［２６］ＤＩＡＳＤＣＦＳ，ＲＩＢＥＩＲＯＦＰ，ＤＩＡＳＬＡＳ，ｅｔａｌ．Ｔｏｍａｔｏｓｅｅｄｑｕａｌｉｔｙｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｆｒｕｉｔｍａｔｕｒａｔｉｏｎａｎｄｐｏｓｔ⁃ｈａｒｖｅｓｔｓｔｏｒａｇｅ［Ｊ］．ＳｅｅｄＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ，２００６，３４（３）：６９１－６９９．ＤＯＩ：１０．１５２５８／ｓｓｔ．２００６．３４．３．１５．［２７］ＢＡＲＢＥＤＯＡＳ．Ｃ，ＺＡＮＩＮＡＣ．Ｗ，ＢＡＲＢＥＤＯＣＪｅｔａｌ．Ｅｆｅｉｔｏｓｄａｉｄａｄｅｅｄｏｐｅｒｉｏｄｏｄｅｒｅｐｏｕｓｏｐóｓ⁃ｃｏｌｈｅｉｔａｄｏｓｆｒｕｔｏｓｓｏｂｒｅａｑｕａｌｉｄａｄｅｄｅｓｅｍｅｎｔｅｓｄｅｂｅｒｉｎｊｅｌａ［Ｊ］．ＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａＢｒａｓｉｌｅｉｒａ，１９９４，１２（１）：１４－１８．［２８］ＤＥＮＧＺＪ，ＨＵＸＦ，ＡＩＸＲ，ｅｔａｌ．ＤｏｒｍａｎｃｙｒｅｌｅａｓｅｏｆＣｏｔｉｎｕｓｃｏｇｇｙｇｒｉａｓｅｅｄｓｕｎｄｅｒａｐｒｅ⁃ｃｏｌｄｍｏｉｓｔｓｔｒａｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ａｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ／ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｃａｃｉｄａｎｄｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｐｒｏ⁃ｔｅｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＮｅｗＦｏｒ，２０１６，４７（１）：１０５－１１８．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１１０５６－０１５－９４９６－２．［２９］ＢＡＳＫＩＮＣＣ，ＣＨＥＳＳＯＮＰＬ，ＢＡＳＫＩＮＪＭ．Ａｎｎｕａｌｓｅｅｄｄｏｒｍａｎｃｙｃｙｃｌｅｓｉｎｔｗｏｄｅｓｅｒｔｗｉｎｔｅｒａｎｎｕａｌｓ［Ｊ］．ＪＥｃｏｌ，１９９３，８１（３）：５５１．ＤＯＩ：１０．２３０７／２２６１５３３．［３０］ＦＩＮＣＨ⁃ＳＡＶＡＧＥＷＥ，ＦＯＯＴＩＴＴＳ．Ｓｅｅｄｄｏｒｍａｎｃｙｃｙｃｌｉｎｇａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｄｏｒｍａｎｃｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｔｏｔｉｍｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｖａｒｉａｂｌｅｆｉｅｌｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＪＥｘｐＢｏｔ，２０１７，６８（４）：８４３－８５６．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｊｘｂ／ｅｒｗ４７７．［３１］ＬＩＭＡＡＴ，ＭＥＩＡＤＯＭＶ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｈｙｄｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｃｙ⁃ｃｌｅｓｏｎＭｉｍｏｓａｔｅｎｕｉｆｌｏｒａｓｅｅｄｓｄｕｒｉｎｇｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｉｎｉｔｉａｌｄｅ⁃ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．ＳＡｆｒＮＪＢｏｔ，２０１８，１１６：１６４－１６７．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｓａｊｂ．２０１８．０３．０１７．［３２］ＴＲＩＮＤＡＤＥＬＩＭＡＡ，ＭＡＲＩＡＤＥＯＬＩＶＥＩＲＡＤ，ＶＩＮＩＣＩＵＳＭＥ⁃ＩＡＤＯＭ．ＥｆｆｅｃｔｏｆｈｙｄｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｃｙｃｌｅｓｏｎＭａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍｓｅｅｄｓｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｕｎｄｅｒｗａｔｅｒｄｅｆｉｃｉｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＣｏｍｍｕｎＰｌａｎｔＳｃｉ，２０１８，８（１）：５５－６１．ＤＯＩ：１０．２６８１４／ｃｐｓ２０１８００８．［３３］ＳＯＥＤＡＹ，ＫＯＮＩＮＧＳＭＣＪＭ，ＶＯＲＳＴＯ，ｅｔａｌ．ＧｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｇｒａｍｓｄｕｒｉｎｇＢｒａｓｓｉｃａｏｌｅｒａｃｅａｓｅｅｄｍａｔｕｒａｔｉｏｎ，ｏｓｍｏｐｒｉｍｉｎｇ，ａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｒｅｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｆｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓａｎｄｔｈｅｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅｌｅｖｅｌ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，２００５，１３７（１）：３５４－３６８．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．１０４．０５１６６４．［３４］ＰＯＬＬＥＡ．Ｄｉｓｓｅｃｔｉｎｇｔｈｅｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ⁃ａｓｃｏｒｂａｔｅ⁃ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ⁃ｐａｔｈｗａｙｉｎｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓｂｙｍｅｔａｂｏｌｉｃｍｏｄｅｌｉｎｇ：ｃｏｍ⁃ｐｕｔｅｒｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓａｓａｓｔｅｐｔｏｗａｒｄｓｆｌｕｘａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，２００１，１２６（１）：４４５－４６２．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．１２６．１．４４５．［３５］ＤＥＳＩＫＡＮＲ，Ａ⁃Ｈ⁃ＭＡＣＫＥＲＮＥＳＳＳ，ＨＡＮＣＯＣＫＪＴ，ｅｔａｌ．Ｒｅｇｕ⁃ｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｂｙｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，２００１，１２７（１）：１５９－１７２．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．１２７．１．１５９．［３６］ＫＮＩＧＨＴＨ，ＫＮＩＧＨＴＭＲ．Ａｂｉｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ：ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｃｒｏｓｓ⁃ｔａｌｋ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉ，２００１，６（６）：２６２－２６７．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｓ１３６０－１３８５（０１）０１９４６－ｘ．［３７］ＭＩＴＴＬＥＲＲ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓａｎｄｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉ，２００２，７（９）：４０５－４１０．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ１３６０－１３８５（０２）０２３１２－９．［３８］程淑娟，唐东芹，刘群录．盐胁迫对两种忍冬属植物活性氧平衡的影响［Ｊ］．南京林业大学学报（自然科学版），２０１３，３７（１）：１３７－１４１．ＣＨＥＮＧＳＪ，ＴＡＮＧＤＱ，ＬＩＵＱＬ．ＲｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓｏｆｔｗｏＬｏｎｉｃｅｒａｓｐｅｃｉｅｓｕｎｄｅｒｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＪＮａｎｊｉｎｇＦｏｒＵｎｉｖ（ＮａｔＳｃｉＥｄ），２０１３，３７（１）：１３７－１４１．［３９］ＢＯＷＬＥＲＣ，ＭＯＮＴＡＧＵＭＶ，ＩＮＺＥＤ．Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅａｎｄｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．ＡｎｎｕＲｅｖＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌＰｌａｎｔＭｏｌＢｉｏｌ，１９９２，４３：８３－１１６．ＤＯＩ：１０．１１４６／ａｎｎｕｒｅｖ．ｐｐ．４３．０６０１９２．０００５０３．［４０］ＷＩＬＬＥＫＥＮＳＨ，ＣＨＡＭＮＯＮＧＰＯＬＳ，ＤＡＶＥＹＭ，ｅｔａｌ．ＣａｔａｌａｓｅｉｓａｓｉｎｋｆｏｒＨ２Ｏ２ａｎｄｉｓｉｎｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅｆｏｒｓｔｒｅｓｓｄｅｆｅｎｃｅｉｎＣ３ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ，１９９７，１６（１６）：４８０６－４８１６．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｅｍｂｏｊ／１６．１６．４８０６．（责任编辑㊀郑琰燚）１４。
脱氢抗坏血酸(DHA)含量检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4388
脱氢抗坏血酸（DHA）含量检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：UPLC-MS-4388规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存标准品粉剂×1瓶-20℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
溶解后可分装保存于-20℃；2、标准品：临用前加入5.743mL蒸馏水充分溶解，即为1μmol/mL DHA；再用蒸馏水稀释为0.5μmol/mLDHA备用。
溶解后可分装保存于-20℃。
产品说明：AsA作为植物细胞一个重要生理指标，其AsA的含量、氧化还原状态(AsA/DHA比率)及其合成与代谢相关酶类活性的变化涉及植物对一系列环境胁迫的响应。
DHA是AsA的可逆的氧化型，在生物体内，与抗坏血酸共同组成氧化还原系统，具有电子受体的作用。
DTT还原DHA生成AsA，通过测定体系中AsA的生成速率，即可计算出DHA含量。
技术指标：最低检出限：0.0065μmol/mL线性范围：0.015625-1μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g样本，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g4℃离心20min，取上清液待测。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2、试剂一在25℃水浴锅中预热30min以上。
3、标准管：依次在1mL石英比色皿加入100μL标准液、800μL预热的试剂一和100μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录10s和130s的吸光值，分别为A1、A2，ΔA标准管=A2-A1。
低温胁迫对草莓叶片SOD和AsA-GSH循环酶系统的影响
低温胁迫对草莓叶片SOD和AsA-GSH循环酶系统的影响罗娅;汤浩茹;张勇【期刊名称】《园艺学报》【年(卷),期】2007(34)6【摘要】以草莓试管苗为试材,研究低温胁迫对草莓离体叶片抗坏血酸、脱氢抗坏血酸含量和SOD以及抗坏血酸—谷胱甘肽(AsA-GSH)循环中4种酶活性的影响。
结果表明,低温胁迫导致超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和单脱氢抗坏血酸还原酶活性上升,脱氢抗坏血酸还原酶和谷胱甘肽还原酶活性下降;同时使还原态抗坏血酸含量下降而脱氢抗坏血酸含量上升。
随着低温处理时间延长,过多活性氧不能被防御体系有效清除,植物受到伤害。
试验结果还表明,抗坏血酸过氧化物酶具有较强的氧化还原抗坏血酸的能力,单脱氢抗坏血酸还原酶是AsA-GSH循环再生抗坏血酸的主要酶。
【总页数】6页(P1405-1410)【关键词】草莓;低温胁迫;抗坏血酸;超氧化物岐化酶;抗坏血酸-谷胱甘肽循环【作者】罗娅;汤浩茹;张勇【作者单位】四川农业大学林学园艺学院【正文语种】中文【中图分类】S668.4【相关文献】1.ALA对低温胁迫下辣椒植株叶片中AsA-GSH循环的影响 [J], 刘涛;徐刚;高文瑞;郭世荣;李德翠;孙艳军2.夜间低温胁迫对番茄叶片活性氧代谢及AsA-GSH循环的影响 [J], 刘玉凤;李天来;高晓倩3.SA对低温胁迫后枇杷幼果AsA-GSH循环酶系统的影响 [J], 黄志明;吴锦程;陈伟健;蔡丽琴;谢翠萍;林良津;黄世杰;叶美兰4.低温弱光胁迫下外源ASA与CaCl2对菊花叶片AsA-GSH循环的影响 [J], 杨庆贺;郑成淑5.外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)对低温胁迫下枇杷叶片AsA-GSH循环的影响 [J], 曹碧珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脱氢抗坏血酸(DHA)含量检测试剂盒说明书 微量法
脱氢抗坏血酸（DHA）含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1245规格：100T/96S产品内容：提取液：液体110mL×1瓶，室温保存。
试剂一：液体20mL×1瓶，室温保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
标准品：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入5.743mL蒸馏水充分溶解；吸取0.1mL上述溶液，加入0.9mL蒸馏水，混匀，即为0.1μmol/mL DHA。
产品说明：AsA作为植物细胞一个重要生理指标，其AsA的含量、氧化还原状态(AsA/DHA比率)及其合成与代谢相关酶类活性的变化涉及植物对一系列环境胁迫的响应。
DHA是AsA的可逆的氧化型，在生物体内，与抗坏血酸共同组成氧化还原系统，具有电子受体的作用。
DTT还原DHA生成AsA，通过测定体系中AsA的生成速率，即可计算出DHA含量。
自备仪器和用品：低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样品中DHA提取：称取约0.1g样品，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g4℃离心20min，取上清液待测。
二、DHA测定操作：1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2.试剂一在25℃水浴锅中预热30min以上。
3.标准管：依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL标准液、160μL预热的试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录10s和130s的吸光值，分别为A1，A2，△A标准管=A2-A1。
4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL上清液、160μL预热的试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录10s和130s的吸光值，分别为A3，A4，△A测定管=A4-A3。
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脱氢抗坏血酸还原酶（dehydroascorbate reductase,DHAR）活性测定试剂盒使用说明产品简介：
DHAR存在于线粒体、细胞质和叶绿体中。
DHAR催化GSH还原DHA生成AsA，调控细胞AsA/DHA比值，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。
提高植物体内的DHAR活性，可提高植物食品中AsA含量，进而提高植物食品的营养品质。
DHAR催化GSH还原DHA生成AsA，通过测定DHA被还原量可计算得DHAR活性。
试验中所需的仪器和试剂：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、蒸馏水产品内容：
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体35mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。
临用前加入5mL双蒸水充分溶解；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL双蒸水充分溶解；
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称取约0.1g样品，加试剂一1mL，冰上充分研磨，16000g4℃离心20min，取上清液待测。
二、测定操作表：
分光光度计预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
试剂二在25℃水浴锅中预热30min以上。
空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、100μL试剂三、100μL试剂四和700μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录30s和150s的吸光值。
测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、100μL试剂三、100μL试剂四和700μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录30s和150s的吸光值。
DHAR活力计算：
DHAR活力单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成1μmol AsA为1U。
计算公式：
DHAR(U/mg prot)=[(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷（Cpr×V样）÷T
=0.092×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
ε:AsA在265nm处摩尔吸光系数，5.42×104L/mol/cm；106：摩尔分子换算成微摩尔分子；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1mL=0.001L；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/ml；T：反应时间，2min。