克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测及百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测
瘦肉精的检测步骤
瘦肉精快速检测卡操作步骤一、【检测原理】本试纸采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、组织和饲料中的盐酸克仑特罗。
试剂含有被预先固定于膜上检测带（T）的盐酸克仑特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。
检测时样品和标记抗体竞争结合偶联物。
检测限为3ng/ml（3ppb）。
二、【样品制备】肉：装入大约4克碎的肉样本（肉泥）于离心管中（酱猪牛肉加2ml水或PBS），盖紧管盖，在80℃左右的水浴锅中水浴10 分钟；吸取煮出的溶液到1.5ml的离心管中。
如有明显黄色浑浊请离心（3000rpm,5min），取上清检测。
如果检测牛肉请吸出肉汤离心(3000rpm,5min)，取上清检测。
三、【操作步骤】1.在进行测试前先仔细阅读使用说明书，使用前将本品和待检样本溶液恢复至室温。
2.从原包装中取出试剂，打开后平放在桌面上，请在1小时内尽快使用。
3.吸取待检样品溶液，缓慢滴加80~100μl(约2~3滴）于加样孔中，加样后开始计时。
4.在5分钟内读取结果，超过5分钟的结果判读无效。
四、【结果判定】阳性：位置C显示出红色条带，位置T无条带或颜色非常模糊时判为阳性。
阴性：位置C显示出红色条带，位置T同时出现红色条带时，判为阴性。
无效：位置C不显示出红色条带，则无论位置T显示出红色条带与否，该试纸卡均判为无效。
【贮存及有效期】冷藏，忌冷冻，有效期12个月。
【注意事项】1.请按照操作步骤进行测试，操作时请勿触摸试纸显示区。
2.如购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请到购买处更换。
3.本品为一次性产品，请勿重复使用。
4.出现阳性结果，建议用本卡复查一次。
5.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
6.由于样品（尿和饲料）的差异，有的检测线可能偏淡或偏暗，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。
7.若需直接检测标准品，请用PBS或阴性样品配制。
克伦特罗ELISA快速检测方法
克伦特罗ELISA快速检测方法克伦特罗属于-兴奋剂类药物，可以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长。
8.3 当板间差异性大时，可能原因是板与板之间孵育时间相差太大，板与板之间洗涤不一致，移液枪使用不当，温度不同等。
克伦特罗属于-兴奋剂类药物，可以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长。
目前由于多起克伦特罗中毒事件且出现了死亡案例，因此被禁止使用。
克伦特罗ELISA快速检测试剂盒与经典色谱法相比，具有操作过程简单、样品处理快捷，可同时分析多个样品，分析时间短、成本低、灵敏度高且对环境污染小等优点。
1 原理ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。
此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
2 试样的准备2.1 对于尿样可直接用于检测，或者样品比较浑浊时，可适当离心。
当尿样冷冻时，应将尿样回温再测。
2.2 饲料样品要按照说明书的处理步骤进行。
当然，为保证样品充分被提取，可适当延长涡旋时间、离心时间及离心转数。
3 试剂的准备3.1 不同批次的试剂盒不能混用，因为抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。
3.2 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。
ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的应为新鲜的和高质量的。
自配的缓冲液应用pH计测量较正。
3.3 从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后使用。
试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
3.4 检测过程中应尽量保持室温20~25℃，避免在通风口操作，温度过低、过热或蒸发都会影响检测数据的准确性。
同样不应再阳光直射下实验，防止过热或蒸发带来影响。
4 加样4.1 在ELISA中一般有4次加样步聚，即加标本或样品、酶结合物、底物、终止液。
加样时应将所加物加在板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡，当有气泡时可用干净的枪头小心刺破。
4.2 加标准及样品时一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中，每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染。
实验一 克伦特罗直接竞争ELISA检测实验指导
实验一克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测克伦特罗（clenbuterol），化学名为4-氨基-α-[ (叔丁胺基)甲基]-3,5-二氯苯甲醇盐酸盐，属于β-兴奋剂（β-Agonist）的一种。
由于克伦特罗能显著降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率和增加瘦肉产量（由此得名“瘦肉精”），曾在畜牧业上作为生长促进剂被广泛使用。
克伦特罗有较大的毒性，当人们食用高残留克伦特罗的动物性食品时，会出现心悸、头疼、目眩、恶心、呕吐、发烧、颤栗、神经过敏、血管扩张、心率加快、肌肉震颤等中毒症状。
因此，欧美等国早已禁止克伦特罗在畜牧生产上的应用，我国农业部于1997年3月发布[农牧发(1997)]3号文件，禁止克伦特罗在动物生产中的应用。
1999年再次发布文件，禁止其使用，并规定了在动物组织中的最高限量。
然而，由于经济利益的驱使，克伦特罗违法滥用的现象仍然较为普遍，中毒现象屡屡发生。
图1 克伦特罗分子结构式检测克伦特罗的方法主要有高效液相色谱法（HPLC），气相色谱－质谱法（GC-MS），毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）等等。
HPLC法与GC-MS 法是克伦特罗残留检测的确证方法，其优点是检测精确度高，但因其仪器化程度高、检测时间长、过程繁琐、检测费用昂贵等而阻碍其推广应用，而酶联免疫分析（ELISA）快速检测技术因成本低、操作简单、速度快、一次检测样本量大、仪器化程度低，现已成为常用的筛选方法。
1 实验原理在微孔条上预包被偶联抗原；加入样品或标准品，样品或标准品中的克伦特罗与微孔条上预包被的偶联抗原竞争结合酶标记的克伦特罗单克隆抗体，游离的酶标记抗体通过洗涤被除去；再加入显色液，结合的酶标记抗体使无色的显色液转化为蓝色，加入反应终止液后再转变为黄色，在450nm处测量，样品吸光值与样品中克伦特罗含量成负相关，通过标准曲线即可计算出样品中克伦特罗含量。
检测原理示意图如下所示：①未包被酶标板②将包被抗原包被在酶标板上③首先将标准品或待检样品加入到包被好的酶标板微空内④然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，孵育期间包被抗原与样品中的被检药物将同时竞争酶标抗体，如果样品中的被检药物含量多则与包被抗原结合的酶标抗体就少，反之就多⑤通过洗涤将反应液中未与包被抗原结合的酶标抗体去除⑥加入底物缓冲液与底物液的混合液，酶标抗体上辣根过氧化物酶将催化底物进行显色反应（由无色变为蓝色）⑦达到显色时间后，加入硫酸溶液终止酶促反应，同时反应溶液由蓝色变为金黄色，此反应液可通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度值，从而通过软件计算得到待检药物的浓度2 实验材料（1）克伦特罗ELISA试剂盒：百睿或其他同类产品。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.025ng～2. 5ng
2 瘦肉精的测定方法
备注 在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更
2 瘦肉精的测定方法
2.2瘦肉精的确证和定量——液相色谱串联质谱法
(1) 原理：试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节PH值，沉淀蛋白质后离心， 上清液用异丙醇-丁酸丁酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱-串联 质谱法测定，内标法定量。 (2)实验方法与步骤：遵照GB-T22286-2008
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
1 瘦肉精知识概述
早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就 发布公告，明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克仑特罗和 莱克多巴胺等7种 “瘦肉精”。
2008年，最高人民检察院、公安部规定新的刑事案件立案追 诉标准，对使用“瘦肉精”养殖生猪，以及宰杀、销售此类猪肉的， 将以生产、销售有毒、有害食品罪追究刑事责任。
2 瘦肉精的测定方法
2.1筛选是否含有瘦肉精——酶联免疫法（ELISA)
(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003 如果采用快速检测卡，则根据检测卡 操作要求开展检测。
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.004ng～0.054ng
瘦肉精三联快速检测卡准确性的因素及对应措施
瘦肉精三联快速检测卡准确性的因素及对应措施任清丹1，何东伟21.吉林省畜牧总站，吉林长春 130062；2.吉林省辽源市动物疫病预防控制中心，吉林辽源 136200“瘦肉精”属于β- 肾上腺受体激动剂类，包括如莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、西马特罗等化学物质。
瘦肉精可以增加动物瘦肉率，减少饲料使用，人食用残留瘦肉精的动物制品，会出现呕吐、肌肉颤抖等症状，甚至可危及生命，长期食用，有可能会导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤。
因此，快速检测卡的准确性，对瘦肉精的管控工作至关重要。
目前，常用检测卡为三联快速检测卡，具有检测快，易判读的优点，但操作细节一旦被忽视，容易影响检测结果准确性。
1 影响猪尿“瘦肉精”快速检测卡准确性的因素1.1 待检动物的生理情况待检动物饮水量的多少和新陈代谢的快慢，都会影响到动物尿液的排放量，尿液中的“瘦肉精”含量会被浓缩或稀释；动物生病治疗过程中使用的硫酸锌或肾上腺激素类药物等，影响检测结果的准确性。
1.2 环境温度的影响环境温度是影响检测卡准确性的因素之一。
尤其在东北地区冬季，室外温度会在0 ℃以下，即使在室内检测动物尿样，也无法在规定时间进行判断和读取。
环境温度低于5 ℃时，检测线产生较缓慢，容易产生假阳性；当温度达到30 ℃以上或强光直射，会出现假阳性或无效；因此，在20～26 ℃室温条件下操作，检测卡出现假阳性或无效概率会大大降低。
1.3 被检动物尿液理化因素动物尿液pH值、澄清度都是影响瘦肉精检测准确性的重要因素，不同动物的尿液在不同生长阶段、不同饮食、不同时间下，尿液pH值白天在8.03±0.15范围内变化；夜间在8.12±0.18范围内变化。
尿液澄清度增高时，检测线速度快，检测结果准确。
1.4 瘦肉精快速检测卡本身存在不足之处“瘦肉精”快速检测卡常温保存，常温操作，特异性强，反应快速且结果肉眼可见、容易判读，但也存在着一些不足之处。
同一品牌不同批次之间检测效果会存在差异，有的反应快，易判定；有的判定线显色差，不易判定。
瘦肉精快检
一．项目名称瘦肉精(盐酸克仑特罗)快速检测卡——肉及内脏样本检测二．简要说明1.产品概述:本产品是一种只需要简单仪器设备的快速检测卡，对肉及内脏（特别是瘦肉、肝脏、肺脏和肾脏）样本中的瘦肉精（盐酸克仑特罗）进行检测，肉及内脏样本渗出液的检测限为3μg/L。
2.检测原理:应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的瘦肉精与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上瘦肉精－BSA偶联物的结合。
如果样本渗出液中瘦肉精含量大于3μg/L，检测线不显颜色，结果为阳性。
反之，检测线显色，结果为阴性。
3.试剂仪器：检验样本肉及内脏样本，试剂组成瘦肉精快速检测卡（40块），展开液，一次性塑料吸管，一次性塑料手套，5ml离心管4.其他设施:1.2~1.5米宽的实验台，水浴锅，插线板。
5.快速检测：检验样本的前期处理→密封装入离心管→90℃加热10~15min(推荐方法水浴)→冷却样本渗出液→滴加2滴至检验卡→30s后滴加展开液1~2滴→5min后观察并对照说明书得出结果备注:质控C线显色，检测T线出现红色条带为阴性；质控C线显色，检测T线不出现红色条带为阳性。
质控C线不显色,说明不正确的操作过程或检测卡失效。
总时长2h三．预期效果该产品能快速筛查出肉及内脏样本中的瘦肉精(注意:若要得到较为准确的结果，尚需使用液质联用法或气质联用法等确证方法)四．注意事项1.检测卡在室温下一次性使用。
检测卡从铝箔取出后，应在半小时内使用。
检测时避免阳光直射和电风扇直吹。
2.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
3.由于肉样的差异，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。
4.出现阳性结果，建议用本卡复查一次。
液质联用法或气质联用法是瘦肉精检测的确证方法。
5.标本收集肉及内脏样本（包括精肉、肝脏、肺脏和肾脏）立即检测或收集在塑料袋中送检。
若不能及时检测，样本在2-8℃冷藏可保存24小时，-20℃冷冻保存1周，冷冻时忌反复冻融。
ProRapiTTM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡 说明书
R-protagenTM0507 Page 1 of 6ProRapiT TM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡使用说明书(TM0507 For Cat. No. FS0002)产品明细产品名称包装Cat. No.ProRapiT TM Clenbuterol Rapid Test 40 assays FS0002产品概述盐酸克伦特罗（Clenbuterol, CLE）是一种肾上腺受体激动剂，俗称瘦肉精。
因该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
食用饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所生产的禽畜产品后，残留的盐酸克伦特罗可对消费者的健康构成极大危害，由盐酸克伦特罗引起的食物中毒在多个国家均有报道，牲畜产品中盐酸克伦特罗残留已成为社会各界关注的公众问题。
因此，世界许多国家禁止在饲料中使用克伦特罗来增加动物的瘦肉率。
R‐Protagen Company Tel:512‐62956169 Fax:512‐62956180‐832 www.r‐ email:sales@r‐FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR HUMAN OR DIAGNOSTIC USE.R-Protagen克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡，系采用免疫胶体金技术，能够快速、半定量、特异的检测尿液、组织样品中的克伦特罗，可通过肉眼直接判读结果，检出定量值为3ppb（3ng/ml），且检测结果精确，与其它Beta受体激动剂等无交叉。
适用于现场、快速、大量样本的筛查，检测成本低，适合基层和非专业人士及家庭使用。
检测原理R-Protagen盐酸克伦特罗快速检测试纸卡采用竞争抑制免疫层析的原理设计，当样本中含有克伦特罗时，待测物将和金标垫上的金标克伦特罗抗体结合并一同向上层析迁移，到达固定有抗原的检测线（T）时，抗原将和样本中的克伦特罗竞争结合金标克伦特罗抗体上有限的抗原结合位点。
克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡使用说明书(组织)(新)
克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡使用说明书（组织）（新）克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡使用手册（纸巾、饲料）简介克伦特罗是一种克伦特罗受体。
由于该药能提高瘦肉率，减少脂肪沉积，促进动物生长，因此被一些畜牧业农民和养殖企业用作养殖促进剂。
人们食用以盐酸克仑特罗为添加剂的动物生产的畜产品后，残留的盐酸克仑特罗会对消费者的健康造成极大危害。
由盐酸克伦特罗引起的食物中毒在许多国家都有报道。
畜产品中盐酸克伦特罗的残留已成为社会各界关注的公共问题。
因此，世界上许多国家禁止使用克伦特罗来提高动物的瘦肉率。
结果检测原理安迪斯克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测尿液样品中的克伦特罗。
具有简单快速，无需仪器设备等特点，既可以在实验室进行，也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。
检测结果准确，灵敏度为5ppb，准确率在95%以上。
阴性阳性无效试剂盒组成：40次/盒。
1、检测试卡：40个。
2.样品提取物：0.5ml×40瓶。
3.样品稀释液：0.5ml×40瓶。
4.一次性取样滴管：40支。
5.一次性塑料手套：5副。
6.说明：1份。
a：阴性：对照线(c)和样品测试线(t)同时出现，表尿液样本中克伦特罗的浓度小于5ng/ml。
b:阳性：只有对照线(c)，无样品测试线(t)。
表明尿液样本中克伦特罗的浓度大于5ng/ml。
c：无效：对照线(c)和测试线(t)都不出现。
储存条件和保质期1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存，忌冷冻。
2、环境温度在4-30℃下使用。
3、有效期见包装盒上。
4.储存期间避免光线、湿度和过热。
样品处理1.称取1g切碎或均质的组织、肉样本、肝脏和制剂合饲料样品，置于含0.5ml样品抽提液管，扭紧管盖，振摇样品１分钟后，100℃水浴10分钟。
2、冷却至室温，取20滴（0.5ml）清亮上清加入含0.5ml样品稀释管，充分混合，取上清液进行检测。
猪肉中瘦肉精的检测
猪肉中瘦肉精的检测猪肉中瘦肉精的检测高峰101279012摘要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。
关键词：瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。
在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。
当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。
长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。
[1] 盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB) ，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O?HCl ，相对分子质量为313.65。
目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。
中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。
对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。
盐酸克伦特罗快速检测卡的检测效果评价
２５ 在不同光 照强度进行检测 ．２ ．
度为 ２ ￣￣ ． 用检测卡进行检测。 ５ ０５ Ｃ ℃）
分别在气
候箱 中以光照强度 ２０ 、６０ 和 ３ｏ ｋ下 （ ０１ １０Ｉ ｘ ｘ ３ｏ 温 ２５ 湿度对检测卡检测能力的影 响 分别 ．３ －
组， 每组 ｌ 个样 ， ３ Ｏ 前 组每份样添加盐酸克伦特 在气候箱 中相对湿度 为 ３ ％一 ４ ％ 、 ％一 ７ ％ Ｏ ０ ５ Ｏ ０ 罗标准液 ， 添加后浓度均为 ８ｇ ｌ ｎ／ ， ｍ 作为 阳性添加 和 ８ ％－０ ５ ９ ％下（ 温度为 ２ ℃± ． ｃ用检测卡进行 ５ Ｏ ｏ） ５ 组； ３ 后 组不添加 ， 作阴性组 。阳性添加组与阴性 检测。
３ 结果
２ ． 在不 同温度进行检测 分别在培养箱 ．１ ５
２ 方 法 ．
２３ 重现性 试验 ．
２ 检测方法与结果判 断 将 检测卡 平放 ． １ 取 阳性尿样（２ １ｇ １ ８ ５ｎ／ ） ． ｍ 和阴性尿样各一份 ， 在桌面上 ， 直接滴入 ２ 约 １０ Ｌ尿液 。此时尿 分 别 在 ０ｒｌｒ２ｒ３ｒ ｈ、ｈ、ｈ、ｈ、０ｒ 滴（ ０ ｕ） ｈ、ｈ 、 、ｈ、 ｒ５ｒ７ｒ９ｒ１ｈ、 ｈ ４
将不 同浓 度 的盐 酸克伦特 罗标 准液 分为 ５
组， 每组 １ ， Ｏ个 各组浓度分别为 ：ｎ／ ｌ ｎ／ｌ ３ｇｎ、 ｇ 、 ｒ ４ ｍ
ｌ 仪 器 Ｇ Ｚ型智能光照培养箱 、Ｑ ４ Ｘ Ｒ Ｘ型 ５ｇ ｌ ｎ／ ｌ ｎ／ｌ ｎ／ 、 ｇ 、 ｇ ， ｍ ６ ｍ ７ ｍ 分别用检测卡检测 ， 实验室 人工气候箱， 均为南京同立实验仪器有限公司生产。 温度为 ２ ｃ， ４【 相对湿度 ６ ％，０ ＝ ３ １ 分钟 内观察结果。
（湖南省畜禽水产品质量检验检测中心 １ ．
瘦肉精快速检测方法[参考提供]
![瘦肉精快速检测方法[参考提供]](https://img.taocdn.com/s3/m/24879f7169eae009581becc4.png)
既快速又精确目前检测瘦肉精的方法有以下几种，胶体金快检卡是最快速简单的一种方法，适用于多种流通领域和各种实验室一般企业会采用自己检测与外部有资质的机构测试相结合，因为样品数量巨大，如果均外部测试一是费用非常高，二是送样、检测、获得结果的周期长，效率低，无法满足实际应用的需求，所以自检也是顺应企业高效节约的宗旨的，对自己用检测出值得怀疑的样本再送检测机构检测。
一."瘦肉精"快速检测新方法初获成功盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精），是一种饲料添加剂，能改进脂肪性动物肉和脂肪的比例，加速动物生长，但是它能够长期残留在动物体内，一般的烹饪加热不能将其消除。
人们一旦食用了含有瘦肉精残留的动物性食品，便会对人们的健康造成严重危害。
目前已有的快速检测方法（试剂条等），均不能定量，而定量的检测手段，大都依赖于酶联免疫（ELLSA）和高效液相色谱（HPLC）等技术，这些方法有些步骤繁琐，非常耗时，有些则需要昂贵的仪器和熟练的操作人员，并且都不能实时地监视动态反应过程等。
研制的HPSPR－6000 表面等离子共振生物分析仪用于盐酸克伦特罗快速检测，有效地克服了现有方法的缺点，其优点有：（1）盐酸克伦特罗的最低检出限约为1.0ppb，接近和达到了高效液相色谱和酶联免疫等现行的方法的检出限（0.05～1.0ppb）；（2）每个样品检测时间为10min，与目前常规方法最低需要2～3h 相比，检测时间缩短10 倍以上；（3）样品前处理简单、免标记；（4）能够实时监控相互作用分子的结合、解离等动力学信息。
二．快检卡：猪肉方面，目前使用胶体金试纸，只需要取一些猪肉样品，放在离心管中，在水浴中煮10分钟，将煮出的汁液加同样体积的配套缓冲液，混匀，用于检测即可，几个ppb（μg/Kg，ng/g）的瘦肉精就能被测出。
北京华安麦科生物技术有限公司自主研发生产的瘦肉精类快检卡可的检出限可达到1ppb，全程只需十几分钟。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附法，在微孔条上预包被克仑特罗的单抗，克仑特罗的标准品（或样本中的残留物克仑特罗胺药物）与酶标记克仑特罗抗原竞争结合包被的莱克多巴胺抗体，酶标记物放大信号后，加入底物显色，终止液终止反应，酶标仪450 nm测定其吸光值。
瘦肉精快速检测方法
既快速又精确目前检测瘦肉精的方法有以下几种，胶体金快检卡是最快速简单的一种方法，适用于多种流通领域和各种实验室一般企业会采用自己检测与外部有资质的机构测试相结合，因为样品数量巨大，如果均外部测试一是费用非常高，二是送样、检测、获得结果的周期长，效率低，无法满足实际应用的需求，所以自检也是顺应企业高效节约的宗旨的，对自己用检测出值得怀疑的样本再送检测机构检测。
一."瘦肉精"快速检测新方法初获成功盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精），是一种饲料添加剂，能改进脂肪性动物肉和脂肪的比例，加速动物生长，但是它能够长期残留在动物体内，一般的烹饪加热不能将其消除。
人们一旦食用了含有瘦肉精残留的动物性食品，便会对人们的健康造成严重危害。
目前已有的快速检测方法（试剂条等），均不能定量，而定量的检测手段，大都依赖于酶联免疫（ELLSA）和高效液相色谱（HPLC）等技术，这些方法有些步骤繁琐，非常耗时，有些则需要昂贵的仪器和熟练的操作人员，并且都不能实时地监视动态反应过程等。
研制的 HPSPR－6000 表面等离子共振生物分析仪用于盐酸克伦特罗快速检测，有效地克服了现有方法的缺点，其优点有：（ 1）盐酸克伦特罗的最低检出限约为1.0ppb，接近和达到了高效液相色谱和酶联免疫等现行的方法的检出限（0.05～1.0ppb）；（ 2）每个样品检测时间为 10min，与目前常规方法最低需要 2～3h 相比，检测时间缩短 10 倍以上；（ 3）样品前处理简单、免标记；（ 4）能够实时监控相互作用分子的结合、解离等动力学信息。
二．快检卡：猪肉方面，目前使用胶体金试纸，只需要取一些猪肉样品，放在离心管中，在水浴中煮10分钟，将煮出的汁液加同样体积的配套缓冲液，混匀，用于检测即可，几个ppb（μg/Kg，ng/g）的瘦肉精就能被测出。
北京华安麦科生物技术有限公司自主研发生产的瘦肉精类快检卡可的检出限可达到1ppb，全程只需十几分钟。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定—酶联免疫快速测定法
2 酶联免疫法检测瘦肉精 2.2操作 2.2.1 国标-酶联免疫法（ELISA) )实验方法与步骤
(1)主要试剂： 高氯酸、异丙醇+乙酸乙酯(40+60)、克伦特罗酶联免疫试剂盒等
(2)主要仪器:匀浆器、离心机微量移液器：单道20ul、50ul、100ul和多道50ul- 250ul 可调、 酶标仪（配备450nm滤光片）
2.2操作 2.2.2 克伦特罗快速检测卡检测步骤
（1）取5 g匀浆去脂肪肉样（或肉泥）于50 mL离心管中，盖紧管盖。 （2）将装有样品的离心管放入沸水中加热10 min，用微量移液器或滴管取出管中 液体移至干净离心管中，冷却至室温（注意：样品温度应控制在20±5℃）。 （3）取出检测卡，开封后平放于桌面，使用本产品附带滴管，吸取离心管中的上 清液加3-4滴于样品孔中。 （4）加样后3-5min，观察显色区，判断结果，其他时间判断无效。
2 酶联免疫法检测瘦肉精
2.2.1酶联免疫法（ELISA) )实验方法与步骤
(3)测定 ① 提取肌肉、肝脏及肾脏试样 ② 准备竞争酶标记物、克伦特罗抗体、包被有抗抗体的微孔板条试样；
准备试样：提取物取20ul进行分析。高残留的试样用蒸馏水进一步稀释。
测定：详细过程参考实训指导书或国标GB-T5009.192-2003。
酶联免疫法测定激素（盐酸克伦 特罗、莱克多巴胺）-初筛Fra bibliotek目录页
检测依据 酶联免疫法检测瘦肉精
1 检测依据
检测标准： GB-T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的
测定第三法酶联免疫法（ELISA筛选法）
2 酶联免疫法检测瘦肉精
2.1酶联免疫法（ELISA)原理
基于抗原抗体反应进行竞争性抑制测定。微孔板包被有针对克仑特罗IgG的包被抗体。 克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标记物、标准或试样溶液。 克仑特罗与竞争性标记物竞争克仑特罗抗体，没有与抗体连接的克伦特罗标记酶在洗涤步 骤中被除去。将底物（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中孵育，结合的 标记酶将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色。在 450nm处测量吸光度值，吸光度比值与克伦特罗浓度的自然对数成反比。
两种瘦肉精之快速检测方法
瘦肉精的两种快速检测方法瘦肉精之快速检测方法一：胶体金检测卡法产品特点：1、操作简单、检测速度快，尿样检测时间约5分钟，组织约10分钟；2、无需其他仪器设备；3、样本量需求少；4、适用于大量样本的快速初步筛；5、结果判断简单明了。
结果判断：阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。
检测对象：猪尿液、组织；猪饲料；猪肉制品适用单位：生猪养殖场、屠宰厂、农业、贸易等主管部门保质期：18个月瘦肉精之快速检测方法二：酶联免疫(ELISA)法：一、方案特点：A、检测原理：测定的基础是抗原抗体反应。
微孔板上包被有针对兔IgG（Clenbuterol抗体）的羊抗体，含有克伦特罗抗原的样品或标准品与酶标记物被加入到小孔中，经过孵育及洗涤步骤后，游离的抗原与抗原酶标记物竞争抗体结合位点，没有结合的抗原酶标记物在清洗步骤中被除去，将显色液加入到孔中并且孵育，结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。
加入反应停止液后使颜色由蓝色转为黄色。
在450nm处测量，吸光强度与样品的克伦特罗浓度成反比。
B、操作时间： 30分钟左右C、检测下限： 0.1ppb（微克/公斤）D、检测对象：猪尿样和血清、饲料、肝脏等组织。
二、检测需要仪器设备配备方案：三、天迈生物生长激素类兽药酶联试剂盒产品系列：编码品名规格灵敏度SJ4001 瘦肉精(盐酸克伦特罗)检测试剂96孔/盒0.05ppb 盒SJ4002 莱克多巴胺检测试剂盒96孔/盒0.2ppb SJ4003 沙丁胺醇检测试剂盒96孔/盒0.2ppb。
瘦肉精(盐酸克伦特罗)快速检测卡
猪瘟抗体快速检测试剂盒——（胶体金法）使用说明书一、原理：本试纸采用酶联免疫原理和胶体金层析技术制成快速检测猪血清中的猪瘟抗体。
将猪瘟抗原包被在硝酸纤维素膜的检测线（T）上，兔抗猪瘟抗体包被在硝酸纤维素膜的质控线（C）上，用胶体金标记的猪瘟抗原干燥后置于玻璃纤维素膜下端。
当血清加入加样孔内，由于层析的原理，血清开始沿纸条移动，当遇上干燥的金标抗原，将其溶解，并带着金标抗原继续往上移动，至硝酸纤维素膜的检测线。
如果样品中有猪瘟抗体存在时，会与玻璃纤维素上的金标猪瘟抗原和包被在检测线上的猪瘟抗原，在检测上形成一个夹心的免疫复合物，呈一条紫红色线。
样品中的抗体越高，色线颜色越深，判定为阳性。
如果样品中没有猪瘟抗体，检测线（T）线上没有色带出现，判定为阴性。
样品和金标抗原继续往上移至质控线时，此处的兔抗猪瘟抗体将会同金标猪瘟抗原结合，在质控线（C）上形成一条紫红色线，证明本试纸有效。
整个试验仅需20分钟。
操作简便、快速、准确、灵敏度高，直观、结果容易判定。
二．产品组成：1、检测卡(1个)：由一特制的塑料检测卡将猪瘟抗体检测试纸条夹于卡内，卡面上设有加样孔和观察孔。
加样孔作为加入待检血清，观察孔内为试剂检测线（T），试剂质控线（C）。
一个检测试剂卡用一个铝箔袋包装，内装干燥剂。
2、吸样管1个；3、5份塑料手套；4、使用说明书一份。
三．操作方法：1．用1.5ml样品管，采血0.5~1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右，使血清析出。
2．将检测卡平置于桌面上，用吸样管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。
在室温下反应20分钟判定结果。
（检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行检测）四．结果判断：1．阳性：在检测线（T）处，质控线（C）处，各出现一条紫红色条带，判定为阳性；检测线（T）处条带色泽的深浅，依检测样品中猪瘟抗体效价的高低而变化，效价越高色带越深，反之越浅。
盐酸克伦特罗快速检测方法的研究进展
盐酸克伦特罗快速检测方法的研究进展程 政（河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳４７１０００）中图分类号：Ｓ８１６．７９ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００５－７３０７（２０２３）０４－００１１－００４ 盐酸克伦特罗（ＣＬＢ）作为一种β受体激动剂类药物，多用于临床，又因其具有促进畜禽生长、提高畜禽瘦肉率等作用而用于畜禽养殖。
人食用后易造成心悸、心慌、胸闷、心律失常等并发症，因此国内外多数国家已严禁使用，我国也明令禁止在饲料中添加。
盐酸克伦特罗作为一种能在短期内迅速提升畜禽瘦肉率的肾上腺素类药物，其有效快速的检测手段一直被学者广为研究。
吕睿研究出利用混合铱／硅纳米线基质，可将质谱信号提高１０倍，灵敏检测克伦特罗和其他小分子。
刘文光建立了包括克伦特罗在内的１６种β 受体激动剂类药物在猪、牛、羊毛发及尿液中的超高效液相色谱串联质谱的多残留检测方法。
周珊珊通过ＥＬＩＳＡ方法检测猪尿中克伦特罗残留量，分析此方法定性检出限为０．１４７μｇ／Ｌ，定量检出限为０．４９０μｇ／Ｌ。
马璐瑶开发了一种基于微流纸的酶联免疫吸附测定牛奶中的盐酸克伦特罗含量，检测极限为０．２μｇ／Ｌ。
张雪娇则研究了山羊体内盐酸克伦特罗的检测靶标，结果表明肝脏和尿液更为适合作残留检测靶标。
而近期更有研究发现使用硼碳氧氮化物（ＢＣＮＯ）纳米片作为传感介质用于电化学检测猪血清和药片中盐酸克伦特罗有良好的稳定性和分析性，该传感器有１７ｎｇ的低检测限，为盐酸克伦特罗的检测提供了新策略。
结合近年来相关的快速检测方法，如色谱法、传感器分析法、免疫分析法为盐酸克伦特罗新型检测技术提供新的思路和参考，将检测条件优化、检测效率提高，为食品及其他类别中盐酸克伦特罗残留量做出更精准的测定。
１ 快速检测盐酸克伦特罗的方法１．１ 色谱法１．１．１ 液相色谱 质谱联用法 盐酸克伦特罗测定的国家标准《动物源性食品中多重β 受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》曾于２００８年出台，并将于２０２３年２月１日废止。
动物组织中盐酸克伦特罗(瘦肉精)的快速检测.
中图分类号:O657.63; 文献标识符:B;文章篇号:1007-2764(200303-0030-70动物组织中盐酸克伦特罗 (瘦肉精的快速检测康笑枫徐淑元秦晓霜(广州市农业科学研究所广州 510315摘要 :本文对我国强制性农业行业标准 (NY/T468-2001“动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱 -质谱法”的检测方法的样品预处理进行适当调整,然后再按标准方法对预处理过的样品进行乙酸铵抽提,净化、衍生,用 GC-MS 气相色谱 -质谱联用仪分析定量。
结果发现此方法不影响检测结果,而且可大大缩短检测时间。
关键词 :克伦特罗;样品预处理;衍生;气相色谱 -质谱法Rapid determination of clenbuterol hydrochloride in animal tissueKang Xiaofeng Xu Shuyuan QinXiaoshang( Guangzhou Agricultural Science Institute, Guangzhou 510315Abstract: The sample pretreatment of determination of Clenbuterol hydrochloride by GC-MS was simplified in the paper. the result show it not only can shorten the time of determination, but also it would not influence the result of the determination.Keywords: Clenbuterol hydrochloride; rapid determination , GC-MS目前, 测定动物组织中的克伦特罗的方法有高效液相色谱一质谱联用法(HPLC-MS、气相色谱一质谱联用法 (GC-MS、高效液相色谱法 (HPLC和酶联免疫吸附法 (ELISA等。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡说明书
盐酸克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡说明书【产品名称】产品名称：盐酸克伦特罗快速检测卡（胶体金法）英文名称：Clenbuterol Rapid Test Card(Colloidal Gold)【产品简介】盐酸克伦特罗（瘦肉精主要成分）是为提高猪肉瘦肉率而使用的兴奋剂药物，在动物可食性组织中蓄积，危害食用者的健康，我国已经禁止用其做动物饲料添加剂。
本产品用于快速检测猪肉和其他肉类肌肉组织中盐酸克伦特罗残留，检测过程只需20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构快速筛查。
【产品组成】盐酸克伦特罗快速检测卡（5条）；200μL刻度吸管（5支）；提取瓶（内含盐酸克伦特罗提取液0.5mL，5瓶）；小勺（1个）。
【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。
【检测限】本产品检测方法对肌肉组织中盐酸克伦特罗的检出限为5 μg/kg。
【使用方法】1、取一小块瘦肉，用刀切成碎肉，用小勺将碎肉装入提取液的瓶盖内，高度与瓶盖相平（约2.0g）。
2、将瓶盖量取的碎肉转移到提取瓶内，盖紧瓶盖后振荡，使碎肉与提取液充分混匀，放入盛有热水(>80℃)的容器中热水浴10分钟后取出，冷却至室温。
3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取肉品提取液，垂直滴加2-3滴于加样孔（S孔）中。
4、室温环境计时5分钟，对照结果判断示意图判定检测结果，其他时间判定无效。
【结果判断】阴性（-）：C线和T线都显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于检出限。
阳性（+）：C线显色，T线不显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度等于或高于检出限。
无效：C线未出现，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。
【注意事项】1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡恢复至室温。
2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。
3、本检测卡为一次性产品，请勿重复使用。
瘦肉精三联检测卡
瘦肉精三联检测卡(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇联合检测卡）说明书【简介】瘦肉精是一类人工合成的β-受体激动剂，根据结构差异分为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。
因该类药物可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
人食用了饲喂瘦肉精的禽畜产品后，残留的瘦肉精可引起食物中毒，牲畜产品中瘦肉精残留已成为公众关注的社会问题。
因此，世界许多国家禁止在饲料中使用瘦肉精。
瘦肉精三联快速检测卡可同时测定猪尿中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇，提供生猪饲养时是否使用瘦肉精的依据。
【检测原理】瘦肉精三联快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂，可同时检测尿液样品中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三类瘦肉精。
具有简单、快速、无需特殊的仪器设备等特点，既可以在实验室进行，也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本需要量少、简便快速、适用于大量样本的筛查。
结果准确，检测盐酸克伦特罗灵敏度为3ppb、莱克多巴胺灵敏度为5ppb、沙丁胺醇的灵敏度为10ppb，准确率大于95%。
【样品处理】尿液可直接用于检测。
若尿样呈浑浊状，需先用滤纸过滤或离心，取清亮部分用于检测。
【操作步骤】1、从检测卡袋中取出所需的检测卡，放置室温复温，在卡上做好样品编号标记。
2、用一次性取样滴头吸取样品，滴入加样孔，每孔3滴(75ul)，在加液过程中勿使液体溢出加样孔。
3、5-10分钟内观察结果，15分钟后的结果无效。
【结果】对照线(C)和检测线（T）同时出线，表明尿液样品中【储存条件】1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存，忌冷冻。
2、在4-30℃下的环境温度操作。
3、有效期见包装盒侧面。
4、保存期间应避免光照、潮湿和过热。
检测卡保质期为12个月。
5、检测线T出现，产品失效。
【结果判断】泳道1：克伦特罗泳道2：莱克多巴胺泳道3：沙丁胺醇阴性（-）：质控线出现、检测线清晰出现，表示样品中不含有瘦肉精或其浓度低于检测限。
盐酸克伦特罗快速检测
盐酸克伦特罗快速检测摘要本实验采用了百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡对样品进行定性检测。
盐酸克伦特罗快速检测卡适用于尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗的测定。
检出限为3ng/mL（3ppb）。
关键词盐酸克伦特罗快速检测卡定性检出限前言盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB),又名瘦肉精,分子式为C12H18Cl2N2O•HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。
当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在养猪业中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到饲料中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。
当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。
国家农业部农牧发[2002]1号文5关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知6中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。
1实验步骤（1）使用前将待测样本溶液恢复至室温（2）取出检测卡平放，用移液枪吸取待测样品溶液100ul，垂直加于加样孔，开始计时（3）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
【结果判断】2 实验结果实验结果如下图 1由图可知，左边表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于 3 ng/mL ，或不含有盐酸克伦特罗；右边样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。
3结果与讨论3.1实验原理若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA 偶联物)金标盐酸克伦特罗单抗 复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线);测试端多余的金标盐酸克伦特阴性（-）：两条紫红色条带出现。
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克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测及百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测摘要：为熟悉盐酸克伦特罗(瘦肉精)的不同检测方法，本实验采用了克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测和盐酸克伦特罗快速检测卡检测两种方法对盐酸克伦特罗阳性样品和阴性样品进行了检测，求出了阳性样品和阴性样品中的盐酸克伦特罗含量。
并对两种盐酸克伦特罗的检测方法进行了简单比较。
结果表明，ELISA检测法具有具有特异性强、便于大规模检查及适合现场和基层使用等优点。
而快速检测卡则具有敏感、特异、快速、简便,且无需任何仪器设备等优点。
关键词：盐酸克伦特罗(瘦肉精)、ELISA检测、快速检测卡1前言：盐酸克伦特罗(瘦肉精)又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，化学名为α -［(叔丁氨基）甲基］4 - 氨基- 3 , 5 二氯苯甲醇盐酸盐。
它是一种β肾上腺受体激动剂，是一种白色或类似白色的结晶体粉末，无臭，微苦，化学性质稳定，加热到170℃才能分解。
因此，一般的烹调加热方法不能将猪肉和脏器中残留的“瘦肉精”毒性破坏。
长期摄入盐酸克伦特罗超标的猪肉，会造成人体胃肠道菌群失衡、发生过敏反应和变态反应并产生“三致”作用[1]。
因此必需建立有效的检测方法，完善对畜牧业的监管，以保障食品的质量，让消费者吃得放心。
2材料与方法2.1实验材料与试剂2.1.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测克伦特罗ELISA试剂盒：百睿或其他同类产品。
试剂盒包含如下试剂：酶标记物（绿盖）1瓶3,3’5,5’-四甲基联苯胺（TMB）底物液（黑盖）1瓶底物缓冲液（白盖）1瓶终止液（黄盖）1瓶浓缩洗液（透明白盖）1瓶0μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶0.1μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶0.3μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶0.9μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶2.7μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶8.1μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶包被偶联抗原的96孔酶标板（12条8孔可拆酶标条）1块塑料封口袋1个内装干燥剂1袋盐酸克伦特罗阳性样品盐酸克伦特罗阴性样品2.1.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测盐酸克伦特罗阳性样品2.2实验仪器2.2.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测微量移液器：100 或 200 μL水浴锅或烘箱：保温，可选。
酶标仪：MK-13或同类仪器。
洗瓶：500 mL，手洗时盛装洗液。
吸水纸：吸干板条残留液体。
样本：尿液或组织样品或饲料样品。
蒸馏水。
洗板机：可选，可用手洗替代。
移液器配套枪头：100或 200 μL规格。
枪头盒。
2.2.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡2.3实验方法2.3.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测（1）取出96孔酶标板，将需用的条板固定于支架，按顺序编号。
1~6号孔为标准品孔，7号孔为阳性样品孔，8为号孔阴性样品孔；（2）在标准品孔中加入50μL标准品，样品孔加入50μL待测样品。
然后每孔加入50μL抗体工作液（加入标品和样品时无时间差的影响），轻拍混匀，盖好。
37℃条件下温育30min；（3）倒出孔中的液体，用洗液充入各孔中，轻轻振荡，倒出孔中的液体，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证完全除去孔中的液体，重复操作5遍；（4）每孔加入100μL酶标记物，盖好。
37℃条件下温育20min；（5）倒出孔中的液体，用洗液充入各孔中，轻轻振荡，倒出孔中的液体，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证完全除去孔中的液体，重复操作5遍；（6）每孔加入100μL显色液，轻轻振荡，盖好。
37℃条件下温育10min；（7）每孔加入50μL反应终止液，混匀后在波长450nm（以空气为空白）测定各孔吸光值（必须在加入终止液后60min内读取吸光值。
2.3.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测（1）使用前将待检样本溶液恢复至室温；（2）从原包装袋中取出检测卡，并于一个小时内使用；（3）将检测卡平放，用移液枪吸取待检样品溶液100μL垂直加于加样孔，开始计时；（4）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
结果判定：阴性（-）：两条紫红色条带出现。
表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL，或不含有。
阳性（+）：检测T线无显色，则表示样品中盐酸克伦特罗浓度高于 3ng/mL。
无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
3实验结果与分析3.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测图1克伦特罗标准曲线图根据上图计得出盐酸克伦特罗阳性样品与盐酸克伦特罗阴性样品中的克伦特罗含量如下图：表1 样品中克伦特罗的含量样品OD值1OD值2平均OD值相对OD值ln浓度浓度（μg/L）盐酸克伦特罗阳性样品0.3480.3360.34274.754 1.664 5.280盐酸克伦特罗阴性样品1.632 1.885 1.759384.372-1.9490.142实验结果表明，盐酸克伦特罗阳性样品中的克伦特罗含量高于盐酸克伦特罗阴性样品中的克伦特罗含量，结果符合实验规律。
其中，理论上不应检测出克伦特罗的阴性样品中也检测出了微量盐酸克伦特罗，这可能是因为包被抗原和酶标抗体结合的时间或温度不够，包被抗原未能全部与酶标抗体结合，导致检测结果高于理论值。
3.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测图2检测卡检测结果实验结果表明，阳性样品显示了一条线，含有盐酸克伦特罗，阴性样品显示了两条线不含盐酸克伦特罗。
结果符合实验规律。
4讨论4.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测法的原理是什么？在微孔条上预包被偶联抗原；加入样品或标准品，样品或标准品中的克伦特罗与微孔条上预包被的偶联抗原竞争结合酶标记的克伦特罗单克隆抗体，游离的酶标记抗体通过洗涤被除去；再加入显色液，结合的酶标记抗体使无色的显色液转化为蓝色，加入反应终止液后再转变为黄色，在450nm处测量，样品吸光值与样品中克伦特罗含量成负相关，通过标准曲线即可计算出样品中克伦特罗含量。
4.2克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测法有什么优缺点？在免疫分析法中，ELISA是一种将抗体、抗原的特异反应与酶底物的高效催化作用相结合起来的高敏感性分析方法，具有特异性强、便于大规模检查及适合现场和基层使用等特点[2]，是临床诊断和免疫检测的常用方法。
但同其他免疫诊断方法一样，酶免试剂在它的研究、生产及使用中常常会碰到非特异性显色的问题[3]，导致实验结果不够准确。
4.3如何改进克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测法？ELISA检测法最主要的问题是非特异性显色，非特异性显色的原因很多，如试剂盒特异性（固相载体的选择、包被物的纯度、包被抗体的效价）、检验标本中含酶标记物的干扰物（内源干扰物及外源干扰物），操作过程中的问题等。
对于试剂盒特异性的问题，可通过对使用的微孔板型号进行认证，评估、提高包被抗原的纯度和选择高亲和力和高特异性的包被抗体来减少非特异性显色；对于含酶标记物的干扰物的问题，可通过控制样品采集、贮存和处理的环境条件，避免样品污染，从而减少非特异性显色；对于操作过程中的问题，可通过锻炼操作人员的实验操作技术或用机器代替操作人员（如使用全自动酶免加样系统处理标本，可较好地避免样品在加样时出现的误差）来减少非特异性显色。
另外，酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正; 其次酶标仪波长设置要正确，最好使用双波长，一个检测波长，一个参考波长，以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的干扰[3]。
4.4百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测法的原理是什么？百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡根据竞争抑制免疫层析法设计，由测试端、显色区和手柄端3部分构成。
测试端含有加样纤维层和盐酸克伦特罗金标单抗纤维层;显色区为硝酸纤维素膜层,其上含有判定检测结果的检测印迹和对照印迹, 分别为盐酸克伦特罗-BSA 偶联物和羊抗鼠IgG 多克隆抗体；手柄端内含吸水材料层(图3)。
若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA 偶联物—金标盐酸克伦特罗单抗复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线)；测试端多余的金标盐酸克伦特罗单抗在硝酸纤维素膜上继续层析可被对照印迹羊抗鼠IgG 单克隆抗体捕获形成红色的对照条带(对照线)。
当待测尿样中含有一定量的盐酸克伦特罗时,盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗金标单抗形成复合物,从而与硝酸纤维素膜上的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物形成竞争,抑制了检测印迹处包被的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物捕获盐酸克伦特罗金标单抗的量,而不能在检测线形红色印迹或形成颜色较浅的红色印迹,多余的盒标盐酸克伦特罗单抗继续层析在对照印迹处形成对照线[4]。
图3盐酸克伦特罗快速检测卡原理图4.5百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡什么优缺点？对比ELISA检测法，盐酸克伦特罗快速检测卡具有敏感、特异、快速、简便的特点，灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备，在10 min内就能检测出结果，适合现场快速检测和筛选工作[5]。
但检测卡只能判断样品中是否含有克伦特罗，不能准确地检测样品中克伦特罗的含量。
同时检测卡的检测结果受许多因素影响，如采样时间、所留标本时间长短、提供标本者的饮食情况、以及检测时的环境条件, 都将影响检测结果, 尤其是尿液中样本成分复杂, 特别是在含有盐酸克伦特罗结构相近的代谢物时, 都将导致出现假阳性[5]。
参考文献[1] 董昕，王娟. 盐酸克伦特罗的残留与食品安全[J]. 肉类研究. 2006(12): 37-39.[2] 袁利鹏，卢倚群，孙远明，等. 盐酸克伦特罗抗体纯化及直接竞争ELISA方法研究[J]. 食品科学. 2013(14): 227-231.[3] 孔莉娜，李北，李燕红. ELISA非特异性显色原因分析[J]. 中国实用医药. 2011(31): 133-134.[4] 姜艳彬，孙冠如，王海，等. 盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制[J]. 中国畜牧兽医. 2010(10): 109-113.[5] 谭美英，潘荞，肖安东，等. 盐酸克伦特罗快速检测卡的检测效果评价[J]. 饲料工业. 2007(03): 33-35.。