HPLC法同时测定重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液的含量及有关物质

HPLC法同时测定重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液的含量及有关物质作者：孙克刚施建国蒋宇丹来源：《上海医药》2012年第07期摘要目的：建立测定重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液含量及有关物质的方法。

方法：采用高效液相色谱法，色谱柱：Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 µm)；流动相：甲醇-乙腈-庚烷磺酸钠溶液（1∶1∶8）；检测波长：280 nm；流速：1ml/min；柱温：30 ℃。

结果：重酒石酸去甲肾上腺素在80～320 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 8；高、中、低3种浓度的平均回收率为101.2%，RSD为0.18%(n=9)。

重酒石酸去甲肾上腺素的最小检测限为152.3 ng/ml。

盐酸去氧肾上腺素在100～400 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 6；高、中、低3种浓度的平均回收率为98.1%，RSD为0.051%(n=9)。

盐酸去氧肾上腺素的最小检测限为103.8 ng/ml。

结论：该法简便、准确、灵敏度高，重现性好，可用于重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液的含量测定和有关物质检查。

关键词高效液相色谱法重酒石酸去甲肾上腺素盐酸去氧肾上腺素注射液含量测定有关物质中图分类号：O657.72；R927.2 文献标识码：A 文章编号：1006-1533(2012)07-0038-04Simultaneous determination of both norepinephrine bitartrate injection and phenylephrine hydrochloride injection and their related substances by HPLC methodSUN Ke-gang, SHI Jian-guo, JIANG Yu-dan(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co., Ltd, Shanghai, 201206)ABSTRACT Objective: To establish a methods for the determination of both norepinephrine bitartrate injection and phenylephrine hydrochloride injection and their related substances. Methods: An HPLC was performed on a column of Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm) with the mobile phase of methanol - acetonitrile - sodium heptane solution (1：1：8) at detection wavelength of 280 nm, flow rate of 1.0 ml/min and column temperature of 30 ℃. Results: For norepinephrine bitartrate, the calibration curve was linear (r=0.999 8) over the range of 80～320 μg/ml, the average recovery was 101.2% with RSD 0.18% and the limit of detection was 152.3 ng/ml. For phenylephrine hydrochloride, the calibration curve was linear (r=0.999 6) over the range of 100～400 μg/ml, theaverage recovery was 98.1% with RSD 0.051% and the limit of detection was 103.8 ng/ml. Conclusion: This method is simple, accurate, sensitive and good reproducible, which can be applied in the determination of both norepinephrine bitartrate injection and phenylephrine hydrochloride injection and their related substances.KEY WORDS HPLC； norepinephrine bitartrate ；phenylephrine hydrochloride； injection；assay； related substances重酒石酸去甲肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均为肾上腺素受体激动药，具有收缩血管的作用。

临床上用于治疗休克及维持血压。

重酒石酸去甲肾上腺素注射液[1]和盐酸去氧肾上腺素注射液[2]均为《中国药典》2010年版二部收载品种。

重酒石酸去甲肾上腺素注射液的含量和有关物质测定均为高效液相色谱法，但色谱条件不同，盐酸去氧肾上腺素注射液含量测定方法采用溴量法，有关物质测定采用薄层色谱法。

故将两种注射液的含量测定及有关物质测定方法进行统一，以方便生产检验。

我们采用同一种色谱条件[3]测定重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液含量及有关物质。

1 仪器与试药美国Agilent 1100高效液相色谱仪，VWD紫外检测器，Sartorius CPA225D电子天平。

重酒石酸去甲肾上腺素：武汉武药制药有限公司；盐酸去氧肾上腺素：深圳沃兰德药业有限公司；重酒石酸去甲肾上腺素注射液（规格：1 ml：2 mg）和盐酸去氧肾上腺素注射液(规格：1 ml∶10 mg)由本公司提供。

乙腈、甲醇、庚烷磺酸钠为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果2.1 重酒石酸去甲肾上腺素注射液的溶液制备1）供试品溶液的制备取重酒石酸去甲肾上腺素注射液适量，加4%醋酸溶液稀释制成0.16 mg/ml的溶液。

2）对照品溶液的制备精密称取重酒石酸去甲肾上腺素对照品适量，加4%醋酸溶液制成0.16 mg/ml的溶液。

3）有关物质对照溶液的制备精密量取供试品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，用4%醋酸溶液稀释至刻度，摇匀。

4）有关物质对照品溶液的制备精密称取肾上腺素对照品适量，加4%醋酸溶液稀释成1.6 µg/ml的溶液，作为对照品溶液。

2.2 盐酸去氧肾上腺素注射液的溶液制备1）供试品溶液的制备取盐酸去氧肾上腺素注射液适量，加流动相制成0.2 mg/ml的溶液。

2）对照品溶液的制备精密称取盐酸去氧肾上腺素对照品适量，加流动相制成0.2 mg/ml 的溶液。

3）对照溶液的制备精密量取供试品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

2.3 色谱条件色谱柱：Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 µm)。

流动相：甲醇-乙腈-庚烷磺酸钠溶液（取庚烷磺酸钠1.76 g，加水溶解并稀释至800 ml，摇匀）（1：1：8）[3]。

检测波长：280 nm；流速：1 ml/min；柱温：30 ℃；进样量：20 µl。

2.4 系统适用性试验取重酒石酸去甲肾上腺素对照品10 mg，加0.1 mol/L盐酸5 ml使溶解，取1 ml，加30%过氧化氢溶液0.1 ml，摇匀，在紫外光灯（254 nm）下照射90 min，加流动相9 ml，摇匀，作为系统适用性试验溶液[3]。

取系统适用性试验溶液20 µl，注入液相色谱仪，除主成分峰外，应有相对保留时间1.2和1.5的两个降解峰，主峰与两个降解产物之间的分离度均应符合要求。

理论板数按去甲肾上腺素峰计算不低于2 000(图1)。

2.5 专属性试验分别取空白辅料溶液及“2.1”项下的两种注射液的供试品溶液、对照品溶液各20 µl，进样，结果表明空白辅料不干扰重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液的含量测定。

见图2、3。

2.6 线性关系及范围分别精密称取重酒石酸去甲肾上腺素适量，按“2.1 2）”配制成约80、128、160、192、256、320 μg/ml的溶液，按“2.3”项下测定，记录色谱图。

以重酒石酸去甲肾上腺素峰面积(X)对其质量浓度(Y，mg/ml)进行回归，得重酒石酸去甲肾上腺素肾上腺素回归方程为：Y=9.350×103X-113.2，r=0.999 8。

结果表明重酒石酸去甲肾上腺素在80～320 μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

分别精密称取盐酸去氧肾上腺素适量，按“2.2 2）”配制成约100、160、200、240、320、400 μg/ml的溶液，按“2.3”项下测定，记录色谱图。

以盐酸去氧肾上腺素峰面积(X)对其质量浓度(Y，mg/ml)进行回归，得盐酸去氧肾上腺素回归方程为：Y=28.65+8.126×103X，r=0.999 6。

结果表明盐酸去氧肾上腺素在100～400 μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

2.7 检测限的考察按信噪比3:1测得重酒石酸去甲肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素的最小检测限分别为152.3 ng/ml和103.8 ng/ml。

2.8 精密度试验配制含量测定供试品溶液共6份，分别进样20 µl，重酒石酸去甲肾上腺素注射液的标示量RSD值为0.20%；盐酸去氧肾上腺素注射液的标示量RSD值为0.65%。

2.9 回收试验按处方量的80%、100%、120%并分别按“2.1”和“2.2”配制128、160、192 μg/ml的重酒石酸去甲肾上腺素溶液和160、200、240 μg/ml的盐酸去氧肾上腺素溶液，按照“2.3”项下方法测定，计算得重酒石酸去甲肾上腺素的平均回收率为101.2%，RSD值为0.18%(n=9)；盐酸去氧肾上腺素的平均回收率为98.1%，RSD值为0.051%(n=9)。

2.10 含量测定取对照品溶液、供试品溶液各20 µl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。

将重酒石酸去甲肾上腺素注射液三批和盐酸去氧肾上腺素注射液三批含量测定结果分别与《中国药典》2010年版方法比较，差异不大(表1、2)，但方法更简便。

2.11 有关物质的测定精密量取系统适用性试验溶液、供试品、有关物质对照品溶液与对照溶液各20 µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。