微生物实验设计[新版].ppt

1、为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时， 每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释 度应更换一支吸管。
2、在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁 流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部 粘附的检液溶于其内。
3、为减少稀释误差，最好采用取10mL稀释液， 注入90mL缓冲液中。
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每克样品中的菌落数（个）=同稀释度的
各平板平均菌落数（个）×稀释倍数
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结果统计
将计数结果填入下表
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【注意4：计数误差】
1. 到达规定培养时间，应立即计数。 2．计数时应选取菌落数在30~300之间的平板 3．不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比。 4．当平板上有链状菌落生长时，要仔细观察
08级微生物学实验考试试题解答PPT
PPT制作人： 36号 龚鹏
解说人 ： 35号 张青 36号 龚鹏 37号 曾泽文
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问题：
某细菌肥料是由相关的不同 微生物 组成的一个 菌群并通过混合培养得到的一种产品。活菌数 的 多少是质量好坏的一个重要标志之一，请设计 一个实验方案来检测该细菌肥料的质量？在实 验过程中为减少实验误差提高数据的可靠性， 应该注意那些操作步骤？
从题目我们可以看出该题目的要求 是 检测单位质量细菌肥料中的活菌数 ； 减少实验误差 因此， 必须考虑以下几个问题：
4பைடு நூலகம்
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1、该细菌肥料中的不同微生物 有哪几种？
通过查找资料我们了解到细菌肥料，一般 有瘤菌剂 、固氮菌剂 、磷细菌剂 、抗生菌剂 和 复合菌 等分 成。由此，我们推断该细菌肥料中剂大概 有 细菌 、 真菌 和 放线菌 。
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2、如何分离纯培养 这些微生物？
选择性培养基培养； 用平板分离法分离。
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3、怎样 减少实验误差？
解决方法：
采用平板培养计数法要求操作熟练、准确，否则难以 得到正确结果。
要求样品成分混匀，保证每个活细胞都能分别形成菌 落；尽可能选用选择性培养基，保证计数菌落围有效 菌落。
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我们的思路
一、题目分析 二、实验设计 三、解题总结
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一、题目分析
某细菌肥料是由相关的不同微生物 组成的一个菌群并 通过混合培养得到的一种产品。活菌数 的多少是质量好 坏的一个重要标志之一，请设计一个实验方案来检测 该细菌肥料的质量？在实验过程中为减少实验误差提 高数据的可靠性，应该注意那些操作步骤？
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3、实验过程
（一）样品的处理和稀释 （二）培养基的配置及倒平板 （三）涂布 （四）培养 （五）计数和报告
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（一）样品的处理和稀释
1.以无菌操作取检样10g，放于盛有90ml灭菌蒸馏水 的灭菌三角瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充 分研磨、摇床震荡制成1：10的均匀稀释液。
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（四）培养
待琼脂凝固后，将含高氏I号培养基和马丁 氏琼脂培养基的平板倒置与28℃温室中培养35d，牛肉膏蛋白胨平板倒置与37℃温室中培 养1-2d。
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【注意3】
1、无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的 概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得 残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器 具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应 用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
（二）培养基的配置及倒平板
1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用) 2、高氏I号培养基（培养放线菌用） 3、马丁氏琼脂培养基（分离真菌用）
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倒36个培养皿
操作图
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【注意2：倒平板误差】
1. 倒平板时倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不 等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太 薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将 底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。
2、操作应当在超净工作台或经过消毒处理的 无菌室进行。
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（五）计数和报告
操作方法：
培养到时间后，取出培养皿，计算平板内
菌落数目。计数时可用肉眼观察，必要时用放 大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总 数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计 算出每克样品中的菌落数。
计算方法：
2.用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有 9ml灭菌蒸馏水稀释液的试管内，振摇试管混合均匀， 制成1：100的稀释液。
3.另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增 稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
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操作示意图：
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【注意1：样品稀释误差】
平板菌落计数法 ，是种统计物品含菌数的有效方法。方法 如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单 个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个 单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原 样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种 量即可换算出样品中的含菌数。
2.为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后， 应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转， 检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超 过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。
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（三）涂布
操作方法：
选择个 103 \ 104 \ 105 \ 106 4个稀释度，以吸取该 稀释度的吸管移取1ml 稀释液放在无菌的已经 凝固的培养基平板上， 然后用无菌的玻璃涂棒 把稀释液均匀地涂布在 培养基表面上，每个稀 释度做3个平皿。
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思考之后
鉴于，以上几点我们综合考虑，最终决定采 用 稀释涂布平板法 分离纯化微生物并测定样品 中活菌数。
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二、实验设计
1、实验目的 2、实验原理 3、实验过程
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1、实验目的
活菌数 检测单位质量样品细菌肥料中的
。
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2、实验原理
利用选择培养基 ，分离培养样品中的不同微生物。不同的 培养基，由于营养成分不同，因此具有选择性，适合改培养基的 微生物就可以生长；反之，则不能生长，根据不同的选择培养基， 我们可以分离出样品中的不同微生物。