微生物实验设计[新版].ppt
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1、为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时， 每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释 度应更换一支吸管。
2、在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁 流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部 粘附的检液溶于其内。
3、为减少稀释误差，最好采用取10mL稀释液， 注入90mL缓冲液中。
15
......
每克样品中的菌落数（个）=同稀释度的
各平板平均菌落数（个）×稀释倍数
22
......
结果统计
将计数结果填入下表
23
......
【注意4：计数误差】
1. 到达规定培养时间，应立即计数。 2．计数时应选取菌落数在30~300之间的平板 3．不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比。 4．当平板上有链状菌落生长时，要仔细观察
08级微生物学实验考试试题解答PPT
PPT制作人： 36号 龚鹏
解说人 ： 35号 张青 36号 龚鹏 37号 曾泽文
1
......
问题：
某细菌肥料是由相关的不同 微生物 组成的一个 菌群并通过混合培养得到的一种产品。活菌数 的 多少是质量好坏的一个重要标志之一，请设计 一个实验方案来检测该细菌肥料的质量？在实 验过程中为减少实验误差提高数据的可靠性， 应该注意那些操作步骤？
从题目我们可以看出该题目的要求 是 检测单位质量细菌肥料中的活菌数 ； 减少实验误差 因此， 必须考虑以下几个问题：
4பைடு நூலகம்
......
1、该细菌肥料中的不同微生物 有哪几种？
通过查找资料我们了解到细菌肥料，一般 有瘤菌剂 、固氮菌剂 、磷细菌剂 、抗生菌剂 和 复合菌 等分 成。由此，我们推断该细菌肥料中剂大概 有 细菌 、 真菌 和 放线菌 。
5
......
2、如何分离纯培养 这些微生物？
选择性培养基培养； 用平板分离法分离。
6
......
3、怎样 减少实验误差？
解决方法：
采用平板培养计数法要求操作熟练、准确，否则难以 得到正确结果。
要求样品成分混匀，保证每个活细胞都能分别形成菌 落；尽可能选用选择性培养基，保证计数菌落围有效 菌落。
2
......
我们的思路
一、题目分析 二、实验设计 三、解题总结
3
......
一、题目分析
某细菌肥料是由相关的不同微生物 组成的一个菌群并 通过混合培养得到的一种产品。活菌数 的多少是质量好 坏的一个重要标志之一，请设计一个实验方案来检测 该细菌肥料的质量？在实验过程中为减少实验误差提 高数据的可靠性，应该注意那些操作步骤？
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......
3、实验过程
（一）样品的处理和稀释 （二）培养基的配置及倒平板 （三）涂布 （四）培养 （五）计数和报告
12
......
（一）样品的处理和稀释
1.以无菌操作取检样10g，放于盛有90ml灭菌蒸馏水 的灭菌三角瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充 分研磨、摇床震荡制成1：10的均匀稀释液。
19
......
（四）培养
待琼脂凝固后，将含高氏I号培养基和马丁 氏琼脂培养基的平板倒置与28℃温室中培养35d，牛肉膏蛋白胨平板倒置与37℃温室中培 养1-2d。
20
......
【注意3】
1、无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的 概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得 残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器 具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应 用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
（二）培养基的配置及倒平板
1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用) 2、高氏I号培养基（培养放线菌用） 3、马丁氏琼脂培养基（分离真菌用）
16
......
倒36个培养皿
操作图
17
......
【注意2：倒平板误差】
1. 倒平板时倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不 等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太 薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将 底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。
2、操作应当在超净工作台或经过消毒处理的 无菌室进行。
21
......
（五）计数和报告
操作方法：
培养到时间后，取出培养皿，计算平板内
菌落数目。计数时可用肉眼观察，必要时用放 大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总 数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计 算出每克样品中的菌落数。
计算方法：
2.用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有 9ml灭菌蒸馏水稀释液的试管内，振摇试管混合均匀， 制成1：100的稀释液。
3.另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增 稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
13
......
操作示意图：
14
......
【注意1：样品稀释误差】
平板菌落计数法 ，是种统计物品含菌数的有效方法。方法 如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单 个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个 单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原 样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种 量即可换算出样品中的含菌数。
2.为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后， 应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转， 检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超 过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。
18
......
（三）涂布
操作方法：
选择个 103 \ 104 \ 105 \ 106 4个稀释度，以吸取该 稀释度的吸管移取1ml 稀释液放在无菌的已经 凝固的培养基平板上， 然后用无菌的玻璃涂棒 把稀释液均匀地涂布在 培养基表面上，每个稀 释度做3个平皿。
7
......
思考之后
鉴于，以上几点我们综合考虑，最终决定采 用 稀释涂布平板法 分离纯化微生物并测定样品 中活菌数。
8
......
二、实验设计
1、实验目的 2、实验原理 3、实验过程
9
......
1、实验目的
活菌数 检测单位质量样品细菌肥料中的
。
10
......
2、实验原理
利用选择培养基 ，分离培养样品中的不同微生物。不同的 培养基，由于营养成分不同，因此具有选择性，适合改培养基的 微生物就可以生长；反之，则不能生长，根据不同的选择培养基， 我们可以分离出样品中的不同微生物。
2、在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁 流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部 粘附的检液溶于其内。
3、为减少稀释误差，最好采用取10mL稀释液， 注入90mL缓冲液中。
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每克样品中的菌落数（个）=同稀释度的
各平板平均菌落数（个）×稀释倍数
22
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结果统计
将计数结果填入下表
23
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【注意4：计数误差】
1. 到达规定培养时间，应立即计数。 2．计数时应选取菌落数在30~300之间的平板 3．不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比。 4．当平板上有链状菌落生长时，要仔细观察
08级微生物学实验考试试题解答PPT
PPT制作人： 36号 龚鹏
解说人 ： 35号 张青 36号 龚鹏 37号 曾泽文
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问题：
某细菌肥料是由相关的不同 微生物 组成的一个 菌群并通过混合培养得到的一种产品。活菌数 的 多少是质量好坏的一个重要标志之一，请设计 一个实验方案来检测该细菌肥料的质量？在实 验过程中为减少实验误差提高数据的可靠性， 应该注意那些操作步骤？
从题目我们可以看出该题目的要求 是 检测单位质量细菌肥料中的活菌数 ； 减少实验误差 因此， 必须考虑以下几个问题：
4பைடு நூலகம்
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1、该细菌肥料中的不同微生物 有哪几种？
通过查找资料我们了解到细菌肥料，一般 有瘤菌剂 、固氮菌剂 、磷细菌剂 、抗生菌剂 和 复合菌 等分 成。由此，我们推断该细菌肥料中剂大概 有 细菌 、 真菌 和 放线菌 。
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2、如何分离纯培养 这些微生物？
选择性培养基培养； 用平板分离法分离。
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3、怎样 减少实验误差？
解决方法：
采用平板培养计数法要求操作熟练、准确，否则难以 得到正确结果。
要求样品成分混匀，保证每个活细胞都能分别形成菌 落；尽可能选用选择性培养基，保证计数菌落围有效 菌落。
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我们的思路
一、题目分析 二、实验设计 三、解题总结
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一、题目分析
某细菌肥料是由相关的不同微生物 组成的一个菌群并 通过混合培养得到的一种产品。活菌数 的多少是质量好 坏的一个重要标志之一，请设计一个实验方案来检测 该细菌肥料的质量？在实验过程中为减少实验误差提 高数据的可靠性，应该注意那些操作步骤？
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3、实验过程
（一）样品的处理和稀释 （二）培养基的配置及倒平板 （三）涂布 （四）培养 （五）计数和报告
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（一）样品的处理和稀释
1.以无菌操作取检样10g，放于盛有90ml灭菌蒸馏水 的灭菌三角瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充 分研磨、摇床震荡制成1：10的均匀稀释液。
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（四）培养
待琼脂凝固后，将含高氏I号培养基和马丁 氏琼脂培养基的平板倒置与28℃温室中培养35d，牛肉膏蛋白胨平板倒置与37℃温室中培 养1-2d。
20
......
【注意3】
1、无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的 概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得 残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器 具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应 用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
（二）培养基的配置及倒平板
1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用) 2、高氏I号培养基（培养放线菌用） 3、马丁氏琼脂培养基（分离真菌用）
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倒36个培养皿
操作图
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【注意2：倒平板误差】
1. 倒平板时倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不 等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太 薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将 底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。
2、操作应当在超净工作台或经过消毒处理的 无菌室进行。
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（五）计数和报告
操作方法：
培养到时间后，取出培养皿，计算平板内
菌落数目。计数时可用肉眼观察，必要时用放 大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总 数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计 算出每克样品中的菌落数。
计算方法：
2.用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有 9ml灭菌蒸馏水稀释液的试管内，振摇试管混合均匀， 制成1：100的稀释液。
3.另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增 稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
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操作示意图：
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【注意1：样品稀释误差】
平板菌落计数法 ，是种统计物品含菌数的有效方法。方法 如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单 个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个 单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原 样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种 量即可换算出样品中的含菌数。
2.为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后， 应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转， 检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超 过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。
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（三）涂布
操作方法：
选择个 103 \ 104 \ 105 \ 106 4个稀释度，以吸取该 稀释度的吸管移取1ml 稀释液放在无菌的已经 凝固的培养基平板上， 然后用无菌的玻璃涂棒 把稀释液均匀地涂布在 培养基表面上，每个稀 释度做3个平皿。
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思考之后
鉴于，以上几点我们综合考虑，最终决定采 用 稀释涂布平板法 分离纯化微生物并测定样品 中活菌数。
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二、实验设计
1、实验目的 2、实验原理 3、实验过程
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1、实验目的
活菌数 检测单位质量样品细菌肥料中的
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2、实验原理
利用选择培养基 ，分离培养样品中的不同微生物。不同的 培养基，由于营养成分不同，因此具有选择性，适合改培养基的 微生物就可以生长；反之，则不能生长，根据不同的选择培养基， 我们可以分离出样品中的不同微生物。