SRB法检测细胞存活率或抑制率详细步骤SOP15

Standard Operation Protocol（SOP）

●技术方法名称:

SRB法检测细胞存活率或抑制率详细步骤

●基本原理:

SRB是一种蛋白质结合染料，可与生物大分于中的碱性氨基酸结合，其颜色的变化与活细胞中的蛋白成正比。

●溶液的配制:

SRB溶液：以1%乙酸稀释SRB粉，至浓度为0.4%。

洗脱液：乙酸用单蒸水配制至1%浓度。

Tris base液：Tris base用单蒸水配制至10 mmol浓度，调pH值为10.5。

●操作步骤:

1数种药物分别配成20X溶液.

2取培养瓶中细胞，调整细胞密度至105-107个/L，180 μL/孔接种至96孔板。

3预培养24 h后，每孔加药物20 μL (终浓度为配制浓度的1/10)，每种药物设3个复孔，每孔总液量为200 μL。4在培养箱内培养48 h，吸去培养液，用PBS小心洗涤一次（勿冲洗，因细胞未固定）。

5每孔加冰冷500 g/L三氯乙酸（即贴壁细胞所用浓度为5 0%，若为悬浮细胞用80%浓度三氯乙酸））50 μL，4℃

固定60 min 。

广东药学院药科学院新药筛选与药效评价中心

6去离子水洗4～5 次，风干。

7 每孔加4 g/L SRB溶液 100 μL作用室温染色30 min,10 mL/L乙酸（1%）轻洗5次,风干。

9每孔加10 mmol Tris base（pH=10.5） 100 μL 摇动混匀，在平板振荡器上振荡5 min。

10在酶联免疫检测仪测定A值，用空白对照调零，所用波长为490 nm.

11将所获细胞生长抑制率定义为药物对细胞的体外抑制率.抑制率（%）=（无药细胞对照孔A值平均值- 用药孔A值平均值）/无药细胞对照孔A值平均值×100%.