病理学第十八章 疾病的病理学诊断和研究方法

肺组织隐球菌PAS染色 显示隐球菌荚膜（200×）
肺组织黏液卡红染色 显示隐球菌荚膜呈紫红色染色（200×）
病理学（第9版）
肝组织Masson染色 汇管区胶原纤维呈蓝色（400×）
肝糖原PAS染色 肝细胞内糖原呈紫红色染色（400×）
病理学（第9版）
肝组织普鲁士蓝染色 肝细胞内含铁血黄素颗粒呈蓝色（400×）
染色体的荧光原位杂交 A.一对X染色体（绿色）；B.Y染色体（红 色）；C.间期细胞X染色体（绿色）；Y染 色体（红色）；D.一对12号染色体（绿色）
（四）ISH技术的应用
➢ 细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱、基因表达的研究 ➢ 受感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位 ➢ 癌基因、抑癌基因等在转录水平的表达及其变化的检测 ➢ 基因在染色体上的定位 ➢ 染色体数量异常和染色体易位等的检测 ➢ 分裂间期细胞遗传学的研究
（二）ISH的主要程序
（三）荧光原位杂交
可以用直接法或间接法进行FISH。直 接法FISH是以荧光素直接标记已知 DNA探针，所检测的靶序列为DNA。 间接法FISH是以非荧光标记物标记已 知DNA探针，再桥连一个荧光标记的 抗体，FISH的实验材料可以是间期细 胞、分裂中期的染色体，也可以是冷 冻或石蜡切片组织。
病理学（第9版）
（二）组织病理学观察
将肉眼确定为病变的组织取材后，以福尔马林溶液固定和石蜡包埋制成组织切片， 经不同的方法染色后用光学显微镜观察。
病理学（第9版）
（三）细胞病理学观察
采集脱落的细胞，自然分泌物、体液及排泄物中的细胞，以及通过细针穿刺所吸取 的细胞，涂片染色后进行观察和诊断。
病理学（第9版）
肝组织罗丹宁染色 肝细胞内铜颗粒沉积呈橘红色（400×）
病理学（第9版）
（二）免疫组织化学和免疫细胞化学
免疫组织化学（IHC）和免疫细胞化学（ICC）是利用抗原-抗体的特异性结合反应以检测 和定位组织或细胞中的某种化学物，由免疫学和组织化学相结合而形成。
病理学（第9版）
1. IHC染色方法和检测系统 2. IHC染色的结果判读
泌系统肿瘤的功能分类 ➢ 肿瘤预后评估以及指导临床对靶向治疗药物适用病例的筛选
第三节
电子显微镜技术
电子显微镜技术应用领域广泛： ➢ 胚胎及组织发生学的观察和研究 ➢ 临床上多种疾病亚细胞结构病变
的观察和诊断 ➢ 一些疑难肿瘤的组织来源和细胞
属性的判断 ➢ 细胞凋亡的形态学观察 ➢ 扫描电镜还可对样本进行三维形
免疫组化染色中常用的标记酶及其底物
检测系统 HRP-DAB HRP-AEC AKP- BCIP / NBT
产物颜色 棕色 红色 深蓝色
封片 中性树胶
甘油 中性树胶
HRP：辣根过氧化物酶；DAB：二甲基联苯胺；AEC：3-氨基-9-乙基咔唑； AKP（ALP）：碱性磷酸酶；BCIP / NBT：5-溴-4 氯-3吲哚磷酸盐/氯化硝基四氮唑蓝
冷冻切片的激光显微切割 左图：被切割细胞的定位；右图：切割后组织切片上留下的空隙
第五节
激光扫描共聚焦显微技术
病理学（第9版）
LSCM的主要功能
➢ 细胞、组织光学切片细胞属性的判定 ➢ 三维立体空间结构重建 ➢ 对活细胞的长时间动态观察 ➢ 细胞内酸碱度及细胞离子的定量测定 ➢ 细胞间通信、细胞骨架构成、生物膜结
2. IHC染色的结果判读
A
B
C
D
A.细胞膜阳性（E-cadherin）；B.细胞质内弥漫阳性（Hep Par-1）； C.细胞核阳性（Ki67）；D.细胞膜和细胞质内点状阳性（CD30）
病理学（第9版）
3. IHC染色技术的应用
➢ 各种蛋白质或肽类物质表达水平的检测 ➢ 细胞属性的判定 ➢ 淋巴细胞免疫表型分析 ➢ 激素受体和耐药基因蛋白表达的检测 ➢ 细胞增殖和凋亡的研究 ➢ 细胞周期和信号传导的研究 ➢ 疑难肿瘤的诊断与鉴别诊断、有些组织特异性抗原的检测辅助肿瘤组织来源的判断以及内分
乳腺细针穿刺细胞学 显示乳腺纤维腺瘤细胞学改变（HE染色，400×）
甲状腺细针穿刺细胞学 显示甲状腺乳头状癌细胞，箭头示核沟 （HE染色，400×）
病理学（第9版）
涎腺细针穿刺细胞学 显示黏液样基质及浆细胞，箭头所示（HE染色，400×）
宫颈液基细胞学 显示多量表层细胞（HE染色，400×）
病理学（第9版）
貌的细微显示和定量
肿瘤组织微血管形 态的电镜观察
肿瘤组织微血管形 态的扫描电镜观察
第四节
显微切割技术
病理学（第9版）
显微切割术 （microdissection）是从组织 切片或细胞涂片上的任一区域内 切割下几百个、几十个某一特定 的同类细胞群甚至单个细胞，再 进行后续相关的研究，如PCR、 PCR-SSCP及比较基因组杂交等。
第十八章
疾病的病理学诊断 和研究方法
作者 : xxx
单位 : xxxx
第一节 大体、组织和细胞病理学技术 第二节 组织化学与组织细胞化学技术 第三节 电子显微镜技术 第四节 显微切割技术 第五节 激光扫描共聚焦显微技术
第六节 核酸原位杂交技术 第七节 原位聚合酶链反应技术 第八节 流式细胞术 第九节 图像采集和分析技术 第十节 比较基因组杂交技术
第十一节 生物芯片技术 第十二节 第二代测序技术 第十三节 生物信息学技术 第十四节 人工智能技术
重点难点
掌握 病理学诊断和研究基本方法。
熟悉 病理学诊断和研究方法的具体应用范围和意义。
了解 病理学研究方法的基本原理。
第一节
大体、组织和细胞病理学技术
病理学（第9版）
（一）大体观察
主要运用肉眼或借助放大镜、量尺和磅秤等工具，观察被检物体的形状、大小、 重量、色泽、质地、界限、表面及切面形态。
构等的研究 ➢ 细胞膜流动性测定和光活化技术
胶质瘤干细胞的分布和培养
第六节
核Biblioteka Baidu原位杂交技术
病理学（第9版）
（一）探针的选择和标记
➢ 双链cDNA探针、单链cDNA探针、单链cRNA探针以及合成的寡核苷酸探针 ➢ 探针标记物有放射性和非放射性之分 ➢ 放射性同位素3H、35S、32P ➢ 非放射性探针标记物有荧光素、地高辛和生物素等
（四）液体活检技术
CTCs检测流程图
第二节
组织化学和免疫组织化学技术
病理学（第9版）
（一）组织化学
➢ 通过应用某些能与组织或细胞的化学成分进行特异性结合的显色试剂，显示 病变组织、细胞的特殊化学成分（如蛋白质、酶类、糖类、脂类等）
➢ 保存组织原有的形态改变，达到形态与代谢的结合
病理学（第9版）