习题2核酸分子杂交技术
核酸检测考核试题和答案大全
核酸检测考核试题和答案大全1.临床实验室对检测系统进行性能核实时，需要进行精密度和准确性实验。
2.基因芯片技术的本质是核酸分子杂交技术。
3.当肺炎患者行有创机械通气时，正确的方法是使用小潮气量和低吸气压力。
4.合成RNA的原料是NTP。
5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等危险因素伤害的器材和用品。
6.参与杂交反应的已知核酸序列标记为探针。
7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接使用套管或伞型罩连接。
8.第三代测序技术的特征是单分子测序。
9.在新冠病毒核酸检测实验室中，净化实验室专用门不具备特定的特点。
10.正确的对应关系是敏感性=真阳性/真阳性+假阴性*100%。
11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约为1000bp。
12.分子信标技术的设计并不简单。
13.国内的生物安全实验室必须按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》进行管理。
14.从鼻咽拭子中提取的剩余核酸提取物不能用于丙型肝炎病毒的诊断。
15.退火温度是PCR反应特异性的关键因素，通常退火温度为Tm减5℃。
16.实验室人员培训的主要内容包括以上所有内容。
17.Taq DNA聚合酶在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸，形成3',5磷酸二酯键。
18.孔位不足时，不能将0.5mEP管放入1.5m加热孔中进行热裂解，加热时间不变。
19.脱卸三级防护装备的顺序是鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩。
20.进行核酸提取的有效性评价是临床分子生物学检验分析前的质量控制内容之一。
21.在核酸检测体系中加入内部质控的作用不仅是监测单项，还包括监测样本吸取错误所致的假阴性结果。
22.生物危害是指各种生物因子对人类健康、环境和社会造成的危害。
31.性能验证计划应包括验证项目内容、待验证性能指标、验证实施方案和结果判断标准。
32.感染病例出院的标准包括体温恢复正常3天以上、呼吸道症状明显好转以及连续2次呼吸道标本病原核酸检测阴性（采样时间间隔至少24小时）。
2020分子诊断学习题(2)
《分子诊断学》习题一、名词解释1、基因:是有功能的DNA，合成含有功能的蛋白质多肽链或RNA所必需的全部核苷酸序列是遗传的结构和功能单位。
2、假基因:或称伪基因，是基因家族在进化过程中形成的无功能残留物，在真核生物多基因家族中存在因突变而失活，不能表达出有活性的产物。
3、结构基因:指能编码蛋白质或RNA的基因。
4、基因家族:真核细胞中许多相关的基因常按功能成套组合被称为基因家族。
5、管家基因:是指所有细胞中均要稳定表达的一类基因，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的。
6、重叠基因:指两个或两个以上的基因共有一段DNA序列或者一段DNA序列成为两个或两个以上基因的组成部分。
7、基因组:细胞中一套完整单体的遗传物质的总和，指生物体全套遗传信息，包括所有的基因和基因间区域。
8、人类基因组计划:主要任务是人类的DNA测序，绘制人类基因组图谱。
9、内含子:是指真核生物基因转录区位于相邻外显子之间的序列及初级转录后加工之后保留于成熟DNA中的序列和转录区内的对应序列，属于非编码序列。
不能参与基因表达调控序列。
10、外显子:是基因(真核生物)转录区的初级转录产物，经过转录后加工之后，保留于成熟DNA中的序列和转录区内的对应序列，属于编码序列。
11、基因表达:只将来自基因的遗传信息合成功能性基因产物的过程。
12、核酸分子杂交:互补的核苷酸序列通过碱基互补配对形成稳定的杂合双链DNA或RNA分子的过程。
13、核酸探针:能识别特异碱基序列的带有标记的一段DNA或RNA分子。
14、聚合酶链反应：是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性，低温退火，及适温延伸等几步反应组成一个个周期循环进行，使得DNA得以迅速扩增，具有特异性强，灵敏度高，操作简便省时等特点。
15、巢式PCR：使用两队对引物，一对引物序列在模板的外侧，用于扩增含目的基因的大片段，另一对引物序列在模板内侧，用于扩增目的基因。
第一对引物做PCR的扩增产物，作为第二对引物退火的模板，再进行第二轮PCR，这样经过两次PCR放大，灵敏度得以提高。
核酸分子杂交试题(全打印)
核酸分子杂交试题（全打印）一.名词解释:1.核酸分子杂交2.DNA复性3.Southern杂交4.Northern杂交5.斑点印迹6.原位杂交二.单项选择题:1.在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（）。
A.DNA变性B.DNA复性C.DNA重组D.DNA杂交2.DNA变性的本质是（）的断裂。
A.盐键B.氢键C.离子键D.共价键3.一般影响核酸变性的温度可选在（）。
A.60—70℃B.70—80℃C.80—90℃D.90—100℃4.在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的DNA复性曲线所用的紫外吸收值是（）。
A.A260吸收值B.A280吸收值C.A320吸收值D.A360吸收值5.进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（B）。
A.0.1μgB.0.1—0.5μgC.0.5--1μgD.1.0—1.5μg6.杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在（）。
A.50—300bpB.20—200bpC.300—400bpD.200—5007.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）。
A.10℃B.15℃C.20℃D.25℃8.寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm值（）下进行。
A.5℃B.10℃C.15℃D.25℃9.下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm 值（B）。
A．尿素B.甲酰胺C.甲醛D.乙醇10.在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间内从凝胶中移动出来，必须将最长的DNA片段控制在大约（）。
A.1KbB.2KbC.3KbD.4Kb11.将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，称为（）。
A.原位杂交B.核酸酶保护实验C.斑点印迹D.狭缝印迹12.核酸保持在细胞或组织切片中经适当方法处理细胞或组织后，将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为（）。
核酸分子杂交技术
2、Southern印迹的常用方法
（1）毛细管虹吸印迹法
利用浓盐转移缓冲液的推动作用，将凝胶中
的DNA转移到固相支持物上。 其基本原理是： 容器中的转移缓冲液含有高浓度的NaCl和柠檬
酸钠，上层吸水纸的虹吸作用使缓冲液通过滤
纸桥、滤纸、凝胶、硝酸纤维素滤膜向上运动，
同时带动凝胶中的DNA片段垂直向上运动，凝
或硝酸纤维素膜上。
（五）Southern杂交 1、预杂交：封闭膜上能与DNA结合的位点 预杂交液为不含DNA探针的杂交液 2、杂交：液相中的DNA探针与膜上的待测DNA杂交 双链DNA探针需加热变性为单链，再杂交 3、洗膜：去除游离的放射性探针或非特异结合的 DNA
（六）杂交结果检测
1、放射自显影：适用于放射性核素标记的探针
分离小片段用高浓度胶
2、凝胶电泳：凝胶具有分子筛效应，大分子
DNA泳动慢,小分子DNA泳动快，
大小 相同的分子处于同一条带 3、分子量标准：经HindⅢ消化的λDNA，杂交 所用分子量标准可用核素标记
（三）凝胶中核酸的变性（碱变化） 凝胶置于NaOH溶液中使DNA变性断裂为较短的 单链 DNA,中性缓冲液中和凝胶中的缓冲液
2、复性过程 （1）单链分子间碰撞形成局部双链 （2）局部双链周围的碱基如不配对时，双链重新解离 （3）局部双链周围的碱基如配对，则形成中心序列 （4）形成完整的双链分子
3、复性的速率方程（服从二级反应动力学）
dC =K2C2 dt 将（1）积分 C = 1 1+K2Cot Co （1）
（2） C 1 一半单链DNA分子复性时，（2）式中的 C 为2 o 1 2
=
1 1+K2Cot
Cot1/2=
1 K2
临床分子生物学检验智慧树知到期末考试章节课后题库2024年湖南师范大学
临床分子生物学检验智慧树知到期末考试答案章节题库2024年湖南师范大学1.人类基因计划的大部分测序工作是利用YAC实现的。
（）答案:错2.线粒体病主要累及大脑和肌肉组织。
（）答案:对3.HER2可作为早期诊断乳腺癌的参考依据。
（）答案:对4.荧光原位杂交可同时检测多种靶序列。
（）答案:对5.TPMT与嘧啶类药物的疗效和毒副作用密切相关。
（）答案:错6.Northerm 杂交检测靶序列是RNA。
（）答案:对7.高通量表面增强激光解吸电离飞行时间质谱可获得“癌症指纹”信息。
（）答案:对8.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症呈X染色体连锁不完全隐性遗传。
（）答案:错9.PCR是已知突变检测的“金标准”。
（）答案:错10.结核杆菌分子生物学检测包括特异性基因检测和耐药基因检测。
（）答案:对11.电喷雾质谱技术是一种软电离技术。
（）答案:对12.核糖体蛋白是基于MALDI-TOF-MS进行细菌鉴定的主要标志物。
（）答案:对13.实时荧光定量PCR引物的最适长度为15～30nt。
（）答案:错14.肺癌的诊断主要依靠分子生物学检验。
（）答案:错15.逆转录病毒的基因组是单倍体。
（）答案:错16.染色体的形态最典型和清晰的阶段是有丝分裂间期。
（）答案:错17.PCR 技术的本质是核酸重组技术。
（）答案:错18.双脱氧链终止法测序需要加入双脱氧核苷酸。
（）答案:对19.Tm 主要与 A-T 含量有关。
（）答案:错20.产前诊断的金标准是对羊水或脐带血细胞进行染色体核型分析。
（）答案:对21.16SrRNA基因作为细菌分类鉴定的靶基因的优点有（）答案:多信息###长度适中###多拷贝22.关于沙眼衣原体的分子生物学检验，正确的是（）答案:RAPD技术不适用于血清学分型###PCR扩增靶基因序列主要有外膜蛋白基因、隐蔽性质粒DNA和16S rRNA基因序列###PCR-RFLP可用于CT分型###LCR技术适合于高危人群普查时大批量标本的检测23.SELDI-TOF-MS中蛋白质芯片系统的组成主要包括（）答案:芯片###芯片阅读器###分析软件24.CYP450基因分型检测的分子生物学方法有（）答案:实时荧光定量PCR###等位基因特异性PCR###基因芯片###PCR-RFLP25.临床分子生物学实验室检测方法的选择原则包括（）答案:根据本地区患者的承受能力选择###根据实验室的技术特点选择###根据检测目的选择###根据实验室的实验条件选择26.PML-RARa融合基因常用的检测方法有（）答案:RT-PCR###荧光原位杂交###荧光定量PCR27.原癌基因激活的机制包括（）答案:易位激活###癌基因甲基化程度降低###原癌基因扩增###点突变28.法医物证学的主要内容有（）答案:种族和种属认定###性别鉴定###个体识别###亲子鉴定29.关于DHPLC技术的描述正确的是（）答案:灵敏度和特异性高###自动化程度高###是分析异质性突变的首选方法###可实现高通量检测30.理想的质控品应满足以下要求（）答案:稳定、价廉、同一批次可大量获得###无已知的生物传染危害性###基质与待测样本一致###阳性质控品所含待测物浓度接近试验的决定性水平###靶值或预期结果已知31.乙型肝炎病毒的核酸类型是（）答案:双股DNA32.TPMT是下列哪类药物在体内代谢的关键酶（）答案:嘌呤类33.采集用于PCR检测的血清样本时，不宜选择使用的抗凝剂是（）答案:肝素34.奥美拉唑在体内代谢主要受哪种药物代谢酶的影响？（）答案:CYP2C1935.PCR的退火温度通常比引物的Tm值（）答案:低约5℃36.HLAI类抗原的特异性取决于（）答案:α重链37.可以用来分辨16SrRNA基因不能鉴别的非常接近的菌种和种内菌株的是（）答案:16S-23S rRNA基因38.单细胞基因扩增一般采用下列哪项技术增加检测的敏感性和特异性（）答案:巢式PCR39.Southern 印迹杂交中常用的核酸变性剂是（）答案:氢氧化钠40.DNA指纹的分子遗传学基础是（）答案:DNA的多态性41.新一代测序技术最显著的特点是（）答案:高通量42.微卫星异常的检测方法有（）答案:DNA测序43.PCR的引物Tm值的计算公式为（）答案:Tm= 2(A+T)+4(G+C)44.PCR循环中的延伸时间取决于（）答案:扩增产物的长度45.线粒体基因组22个tRNA可转录几种tRNA （）答案:20种46.保证结果准确可靠的先决条件是（）答案:分析前质量控制47.肿瘤的分子诊断策略有（）答案:检测肿瘤相关基因48.在PGD中诊断单基因疾病的主要手段是（）答案:单细胞PCR技术49.焦磷酸测序法突出的优势是（）答案:较长的读长50.寡核苷酸探针的最大优势是（）答案:可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列51.非整倍体筛选的诊断方法主要借助于下列哪项技术（）答案:FISH52.乙型肝炎病毒可分为多少个基因型？（）答案:853.TaqMan 探针技术要求扩增片段应为（）答案:50～150bp54.目前对肺癌遗传易感性主要集中在如下哪几个领域（）答案:DNA修复能力55.临床分子生物学检验的核心技术是（）答案:核酸扩增技术56.临床分子生物学检验标准化的前提是（）答案:标准品57.临床基因扩增检验实验室设计的原则主要包括（）答案:分区设置###控制空气流向58.质量管理体系文件具有法规性、唯一性和时效性三大特性。
分子生物学检验技术试题及答案
分子生物学检验技术试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 以下哪个不是分子生物学常用的检测技术？A. PCRB. 凝胶电泳C. 免疫组化D. 核酸杂交2. 基因克隆中，常用的载体是：A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体3. 在分子生物学中，用于扩增DNA片段的技术是：A. 逆转录B. 转录C. 翻译D. PCR4. 以下哪个是真核生物的基因表达调控元件？A. 启动子B. 内含子C. 外显子D. 终止子5. 以下哪个不是DNA测序技术？A. Sanger测序B. 焦磷酸测序C. 凝胶电泳D. 单分子测序二、填空题（每空1分，共10分）6. 核酸分子杂交技术中，常用的标记物有_________、_________等。
7. 基因工程中，用于将目的基因导入受体细胞的方法有_________、_________等。
8. 基因编辑技术CRISPR-Cas9中，Cas9是一种_________。
9. 真核生物的基因表达调控中，mRNA的加工包括5'端加帽、3'端加尾和_________。
10. 蛋白质的分离和纯化技术中，常用的方法有电泳、层析和_________。
三、简答题（每题10分，共20分）11. 简述PCR技术的原理及其在分子生物学中的应用。
12. 描述核酸分子杂交技术的基本原理及其在基因检测中的应用。
四、论述题（每题15分，共30分）13. 论述基因克隆的一般步骤及其在生物技术研究中的重要性。
14. 讨论基因编辑技术CRISPR-Cas9的优势和潜在的伦理问题。
五、实验设计题（每题20分）15. 设计一个实验方案，用于检测某种疾病相关基因的突变情况。
答案：1. C2. A3. D4. A5. C6. 放射性同位素、荧光标记7. 转化、转染8. 核酸酶9. 剪接10. 沉淀11. PCR技术的原理是利用DNA聚合酶在特定温度条件下对目标DNA序列进行循环扩增。
它在分子生物学中的应用包括基因克隆、基因表达分析、遗传病诊断等。
分子生物学考试模拟题及参考答案
分子生物学考试模拟题及参考答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、HIV 核酸类型是:A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：D2、核酸分子杂交的基础是A、配体受体结合B、甲基化C、磷酸化D、抗原抗体结合E、碱基互补配对正确答案：E3、HBV 耐药性的检测在临床上主要是针对A、HBV DNA 聚合酶 S 基因的检测B、HBV DNA 聚合酶 P 基因的检测C、HBV DNA 聚合酶 C 基因的检测D、HBV DNA 聚合酶前 C 基因的检测E、HBV DNA 聚合酶 X 基因的检测正确答案：B4、理想的质控品应具备的条件不包括A、阳性质控品所含待测物浓度接近试验的决定性水平B、靶值或预期结果已知C、基质与待测样本一致D、含有未灭活的传染性病原体E、稳定、价廉、同一批次可大量获得正确答案：D5、第二代测序技术最主要技术特征是A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、针对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：C6、关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因突变正确答案：E7、可抑制 RNA 酶活性防止其对 RNA 样品降解的是( )A、Tris-HClB、EDTAC、酚试剂D、氯仿E、DEPC正确答案：E8、以 SDA 技术检测结核杆菌时扩增靶点是A、SDAB、IS6110 和 18SrRNAC、IS6110 和 5SrRNAD、IS6110 和 16SrRNAE、IS6110 和 15SrRNA正确答案：D9、最常用的 DNA 探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3’-末端标记D、5’-末端标记E、PCR 法正确答案：A10、关于 G-C 之间氢键的描述下列正确的是A、G-C 之间有 3 个氢键B、G-C 之间有 2 个氢键C、G-C 之间有 1 个氢键D、G-C 之间有 4 个氢键E、G-C 之间有 5 个氢键正确答案：A11、PCR 反应的基本过程不包括A、预变性B、退火C、淬火D、变性E、延伸正确答案：C12、关于 mtDNA 复制特点的描述正确的是A、线粒体密码子与核基因密码子相同B、mtDNA 以 D-环复制为主要模式,与核 DNA 复制同步C、mtDNA 两条链的复制是同步的D、mtDNA 为自主性复制,不受核内基因控制E、参与 mtDNA 复制所需的酶、调控因子等由核 DNA 编码正确答案：E13、Alu家族属于A、可变数目串联重复序列B、短串联重复序列C、长散在核原件D、短散在核原件E、DNA 转座子正确答案：D14、纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8,可使比值降低的是( ):A、蛋白质B、牛血清白蛋白C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案：A15、关于肿瘤分子诊断的说法正确的是A、肿瘤分子诊断的核心是基于细胞水平的分子诊断技术B、肿瘤分子诊断就是利用分子生物学原理和技术建立的肿瘤诊断方法C、肿瘤的分子诊断中根据目的、对象、类型的不同要采取相似的诊断策略与方法D、肿瘤分子诊断的研究成果仅用于临床肿瘤的诊断E、肿瘤分子诊断的含义主要表现在虽然检测对象众多,但大多数标志物是特异性的肿瘤标志物正确答案：B16、利用 DNA 芯片检测基因的表达情况,杂交条件应选( )A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A17、关于 RNA 探针的描述下列不正确的是A、可用于随机引物标记B、特异性高C、灵敏度高D、可用非同位素标记法标记E、不易降解正确答案：E18、SDS 是一种阴离子表面活性剂,其可断开蛋白质分子内和分子间的( )A、氢键B、离子键C、二硫键D、酯键E、疏水键正确答案：A19、单细胞基因扩增一般采用下列何种技术增加检测的敏感性和特异性A、巢式 PCRB、多重 PCRC、PCR-RFLPD、等位基因特异性 PCRE、PCR-SSCP正确答案：A20、在对病原体检测中,一次性获得信息量最大的技术是( )A、ELISAB、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、原位杂交技术E、基因芯片技术正确答案：E21、采用了所谓酶联级联测序技术的测序方法是A、焦磷酸测序B、双脱氧终止法测序C、寡连测序D、化学降解法测序E、边合成边测序正确答案：A22、引起镰状细胞贫血的珠蛋白基因突变类型是A、错义突变B、终止密码突变C、整码突变D、移码突变E、无义突变正确答案：A23、产前诊断临床应用尚不广泛,原因不包括A、诊断的准确性受到多种制约B、需要生殖医学与遗传学技术的结合C、诊断技术不成熟D、已明确母亲为携带者的婴儿E、单个细胞的遗传诊断困难正确答案：C24、下列属于单基因遗传病的是A、糖尿病B、冠心病C、原发性高血压D、珠蛋白生成障碍性贫血E、精神与神经疾病正确答案：D25、FMR-1 基因上 CGG 重复序列异常扩增导致A、镰状细胞贫血B、脆性 X 综合征C、地中海贫血D、血友病 AE、血友病 B正确答案：B26、被称为细菌“分子化石”的是A、16SrRNAB、IS6110 插入序列C、rfbEO157D、fliCH7E、rpoB正确答案：A27、质粒的主要成分是A、多糖B、蛋白质C、氨基酸衍生物D、DNA 分子E、脂类正确答案：D28、HIV 最易发生变异的部位是A、内膜蛋白B、核衣壳蛋白C、包膜蛋白D、刺突蛋白E、逆转录酶正确答案：D29、DNA 自动化测序技术中,不正确的荧光标记方法A、用荧光染料标记引物5’端B、用荧光染料标记引物3’-OHC、用荧光染料标记终止物D、使用一种或四种不同荧光染料标记E、使荧光染料标记的核苷酸渗入到新合成的 DNA 链中正确答案：B30、以下不是 APC 基因失活方式的是A、移位B、缺失C、插入D、无义突变E、错位拼接正确答案：A31、关于 PCR 反应引物的描述,不正确的是A、引物的长度在 20~30bpB、引物自身或引物之间不应存在互补序列,防止产生二聚体和发夹结构C、引物中 G+C 的含量占 45%~55%D、引物的3’端可以带有生物素、荧光或酶切位点等作为标记E、两条引物的 Tm 值应该尽量相近正确答案：D32、目前的 DNA 自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约A、50bpB、100bpC、500bpD、1000bpE、2000bp正确答案：D33、目前测序读长最大的测序反应:A、连接测序B、双脱氧终止法C、焦磷酸测序D、边合成边测序E、化学裂解法正确答案：B34、K-ras 基因最常见的激活方式是A、染色体重排B、插入突变C、缺失突变D、点突变E、基因扩增正确答案：D35、利用 DNA 芯片检测基因突变,杂交条件应:A、短时间内、低盐、高温条件下的高严紧性杂交B、长时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交C、短时间内、高盐、高温条件下的低严紧性杂交D、短时间内、低盐、低温条件下的高严紧性杂交E、短时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交正确答案：A36、母亲血浆中的胎儿 DNAA、占母亲血浆总 DNA 的 50%以上B、可用于检测胎儿从母亲遗传而来的线粒体 DNA 突变C、确定 RhD 阳性孕妇所怀胎儿的 RhD 情况D、确定胎儿是否从母亲遗传了 X 连锁的基因突变E、血友病 A 的产前诊断正确答案：C37、最能直接反映生命现象的是:A、蛋白质组B、基因组C、mRNA 水平D、糖类E、脂类正确答案：A38、重复序列通常只有 1~6bp,重复 10~60 次并呈高度多态性的 DNA 序列称为A、微卫星 DNAB、小卫星 DNAC、cDNAD、高度重复顺序 DNAE、单拷贝顺序 DNA正确答案：B39、为封闭非特异性杂交位点,可在预杂交液中加入A、ssDNAB、1×SSCC、10×SSCD、5×TBECE、50×TAE正确答案：A40、探针基因芯片技术的本质就是A、基因重组技术B、聚合酶链反应技术C、蛋白质分子杂交技术D、核酸分子杂交技术E、酶切技术正确答案：D41、引起亨廷顿舞蹈病的突变形式是:A、错义突变B、无义突变C、RNA 剪接突变D、插入缺失突变E、动态突变正确答案：E42、珠蛋白基因的碱基由 G 突变为 C 时,造成的突变称为A、密码子缺失或插入B、单个碱基置换C、融合基因D、移码突变E、片段缺失正确答案：B43、双链 DNA 的 Tm 值主要与下列哪项有关( )A、A-T 含量B、G-T 含量C、A-G 含量D、T-G 含量E、C-G 含量正确答案：E44、下列不是片段性突变引起原因的是A、基因重排B、碱基插入C、碱基缺失D、碱基扩增E、转录异常正确答案：E45、5’-末端的 DNA 探针标记主要依靠的酶是A、T4 多聚核苷酸激酶B、末端转移酶C、AKPD、DNA polⅠE、DNA pol正确答案：A46、下列不属于 SNP 检测技术特点的是( )A、密度低B、易实现分析的自动化C、密度高D、遗传稳定性E、富有代表性正确答案：A47、关于核酸探针的描述下列不正确的是A、可以是 DNAB、可以是 RNAC、可用放射性标记D、可用非放射性标记E、必须是单链核酸正确答案：E48、基因多态性连锁分析中,第一、二、三代遗传标记分别是A、RFLP、SSCP、STRB、RFLP、SNP、STRC、RFLP、STR、SNPD、VNTR、SSCP、SNPE、VNTR、STR、RFLP正确答案：C49、结核分支杆菌的基因组特征是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：B50、要制订一个能够简洁准确的 DNA 测序方案,首先应考虑A、DNA 片段大小B、测序方法C、实验条件D、测序目的E、测序时间正确答案：E51、由于突变使编码密码子形成终止密码,此突变为:A、终止密码突变B、错义突变C、移码突变D、同义突变E、无义突变正确答案：E52、关于荧光原位杂交技术叙述不正确的是( )A、可以用于基因定位B、可以用于遗传病的产前诊断C、用放射性核素标记探针D、用荧光素标记探针E、无需经过核酸的提取正确答案：C53、以下不属于 DNA 分析检测技术的是A、基因芯片B、ASO 杂交C、Northern blotD、RFLP 分析E、PCR正确答案：C54、荧光定量 PCR 检测核酸量的时间段在A、非指数期B、PCR 反应的最初阶段C、PCR 反应最后的时间阶段D、指数期的起始阶段E、指数期的终末阶段正确答案：D55、线粒体糖尿病属于A、2 型糖尿病B、妊娠期糖尿病C、型糖尿病D、特殊类型糖尿病E、新发现的第 5 种糖尿病正确答案：D56、单基因遗传病诊断最重要的前提是A、了解相关基因的染色体定位B、了解患者的家族史C、了解相关基因的基因克隆和功能分析等知识D、进行个体的基因分型E、疾病表型于基因关系已阐明正确答案：B57、DNA 双螺旋之间氢键断裂,双螺旋解开,DNA 分子成为单链,这一过程称A、变性B、复性C、复杂性D、杂交E、探针正确答案：A58、关于带正电荷尼龙膜的描述下列不正确的是A、可结合 DNAB、可结合 RNAC、对盐浓度要求不高D、核酸可通过 UV 交联共价结合E、本底较低正确答案：E59、下述序列中,在双链状态下属于完全回文结构的序列是A、AGTCCTGAB、AGTCAGTCC、AGTCGACTD、GACTCTGAE、ACTCGACT正确答案：C60、规范化的临床基因扩增检验实验室工作区域不包括A、产物分析区B、标本制备区C、试剂储存和准备区D、隔离区E、扩增区正确答案：D61、PCR 反应过程中,退火温度通常比引物的 Tm 值A、低5℃B、低15℃C、高5℃D、高15℃E、相等正确答案：A62、不是自动 DNA 测序仪主要系统之一的是A、测序反应系统B、电泳系统C、荧光检测系统D、探针荧光标记系统E、电脑分析系统正确答案：D63、转录依赖扩增系统与其他 PCR 技术的区别是A、模板是 RNAB、模板是 DNAC、引物是 RNAD、模板和产物都是 RNAE、需要热循环正确答案：D64、PCR 反应体系的描述错误的是A、模板B、一条引物C、dNTPD、DNA 聚合酶E、缓冲液正确答案：B65、核酸探针不可用什么标记A、生物素标记B、抗体标记C、地高辛标记D、荧光标记E、放射性核素标记正确答案：B66、一位男性血友病患者,他亲属中不可能是血友病的是A、外甥或外孙B、姨表兄弟C、叔、伯、姑D、外祖父或舅父E、同胞兄弟正确答案：C67、线粒体基因组编码几种 rRNAA、22 种B、20 种C、18 种D、3 种E、2 种正确答案：E68、以下关于原癌基因说法不正确的是A、普遍存在于人类或其他动物细胞基因组中的一类基因B、在生物进化过程中不稳定C、在控制细胞生长和分化中起重要作用D、容易在多种因素作用下激活成活性形式的癌基因E、活性形式的癌基因才引起细胞癌变正确答案：B69、关于点样法进行 DNA 芯片制备不正确的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针的 DNA 芯片制备技术B、通过高速点样机直接点样C、多用于大片段 DNA 探针的芯片制备D、成本低E、速度快正确答案：A70、关于 mtDNA 的描述正确的是A、结构基因编码 mtDNA 复制所需的酶、调控蛋白、NADH 氧化还原酶、ATP 酶等B、重链有编码功能,轻链无编码功能C、含 22 个结构基因D、含 tRNA 基因,可转录 22 种 tRNA,以满足线粒体内蛋白质翻译的需要E、含 rRNA 基因,编码 2 种 rRNA,即 12SrRNA 和 18SrRNA正确答案：D71、原核生物基因组特点不应包括:A、重复序列B、断裂基因C、插入序列D、转录产物为多顺反子E、操纵子结构正确答案：B72、开展耳聋基因诊断有重要临床意义,但不包括A、可作为听力筛查的一个有效辅助手段B、可以预测耳聋疾病的病情和预后C、可以了解患者发生耳聋的分子病因D、可以预测下一代出现耳聋的概率E、可作为有效治疗耳聋的手段之一正确答案：E73、关于非放射性探针标记,下列描述不正确的是A、可长时间使用B、目前应用的非放射性标志物都是抗原C、对人体危害小D、酶促显色检测最常使用的酶是碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶E、灵敏度不如放射性探针正确答案：B74、唯一一个在结肠上皮增殖过程中起看门作用的基因是A、MCC 基因B、DCC 基因C、APC 基因D、p53 基因E、HNPCC 基因正确答案：C75、用于基因定位的技术是:A、荧光定量 PCR 技术B、PCR-RFLP 技术C、PCR 微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA 表达芯片技术正确答案：D76、影响 DNA 分离纯化效果的是A、材料新鲜,低温保存B、加核酸酶抑制剂C、剧烈震荡D、除净蛋白质E、除净多糖正确答案：C77、PCR-SSCP 描述中错误的是A、检测核酸点突变的技术B、需制备成单链 DNAC、根据空间构象由 DNA 的碱基组成决定的原理D、不需电泳E、敏感性与待分离 DNA 的长度有关正确答案：D78、最早发现与 mtDNA 突变有关的疾病是A、肿瘤B、Leber 遗传性视神经病C、糖尿病D、耳聋E、MELAS 综合征正确答案：B79、DCC 基因突变的主要方式不包括A、等位基因杂合性缺失B、5’端纯合性缺失C、3’端纯合性缺失D、DCC 基因过甲基化E、外显子的点突变正确答案：C80、HBV DNA 中最小的一个开放阅读框是A、P 基因区B、S 基因区C、X 基因区D、前 S 基因区E、C 基因区正确答案：C81、基因诊断间接方法不包括A、基于 SNP 的单倍型分析B、Southern blotC、基于 STR 的微卫星分析D、PCR-RFLPE、RFLP 连锁分析正确答案：B82、双脱氧终止法测定核酸序列时,使用 ddNTP 的作用是:A、作为 DNA 合成的正常底物B、形成特异性终止链C、标记合成的 DNA 链D、使电泳时 DNA 易于检测E、使新合成的 DNA 链不易形成二级结构正确答案：B83、下列叙述不正确的是A、F 质粒的主要特征是带有耐药性基因B、R 质粒又称抗药性质粒C、Col 质粒可产生大肠杆菌素D、F 质粒是一种游离基因E、F 和 ColE1 质粒可以在同一菌株内稳定共存正确答案：A84、关于梅毒螺旋体的实验室检测,下列描述正确的是A、诊断梅毒的传统方法是体外培养B、分子生物学方法是耐药基因分析和流行学研究的首选方法C、镜检法简便,特异性高,但不能用于皮肤黏膜损害的早期诊断D、分子生物学方法不能早期诊断梅毒感染E、血清学检查普遍用于梅毒的筛查、疗效观察和流行病学检查,对早期梅毒诊断敏感正确答案：B85、转录依赖扩增系统的描述错误的是A、以 RNA 为模板B、首先由靶 RNA 合成 DNA 拷贝C、再由 DNA 转录生成大量 RNA 拷贝D、产物为 DNAE、为等温扩增正确答案：D86、次氯酸钠去除临床分子生物学实验室污染源的原理是A、诱导同一 DNA 链上相邻的两个嘧啶之间形成嘧啶二聚体B、氧化损伤核酸C、水解核酸D、与扩增产物的嘧啶碱基形成单加成环丁烷衍生物E、与胞嘧啶形成羟氨基胞嘧啶正确答案：B87、首个被证实和克隆的乳腺癌易感基因是A、BRCA1B、BRCA2C、c-erbB-2/HER2D、ATME、p53正确答案：A88、一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值多少度A、10~15℃B、30~40℃C、40~50℃D、5~10℃E、15~25℃正确答案：E89、有下列哪项指征者应进行产前诊断A、夫妇之一有致畸因素接触史的B、习惯性流产的孕妇C、夫妇之一有染色体畸变的D、35 岁以上高龄的E、以上都是正确答案：E90、关于真菌,以下描述正确的是A、真菌种类繁多,其中大多数对人类有害B、浅部真菌感染对治疗有顽固性,对机体的影响相对较小C、近年真菌病的发病率有明显下降趋势D、病原性真菌根据其入侵组织部位深浅的不同分为浅部真菌和内部真菌E、真菌感染对人体的危害不大正确答案：B91、基因芯片技术的主要步骤不包括( )A、酶切分析B、芯片的设计与制备C、杂交反应D、信号检测E、样品制备正确答案：A92、在如下情况时,可考虑通过基因连锁分析进行分子生物学检验A、基因结构变化未知B、基因点突变C、基因插入D、基因缺失E、基因表达异常正确答案：A93、线粒体基因突变不包括A、mtDNA 拷贝数的变异B、碱基突变C、插入D、缺失E、重复序列增多或减少正确答案：E94、引起急性移植排斥反应最重要的抗原是A、ABO 血型抗原B、HLA 抗原C、超抗原D、异嗜性抗原E、Rh 血型抗原正确答案：B95、人类可遗传的变异中最简单、最常见的一种是( )A、RFLPB、VNTRC、STRD、SNPE、CNV正确答案：D96、大多数质粒在自然状态下是( )A、线性双链 DNAB、线性单链 DNAC、线性单链 RNAD、环状双链 DNAE、环状单链 DNA正确答案：D97、单核苷酸多态性检测芯片探针的设计不正确的是( )A、一般采用等长移位设计法B、包括与靶序列完全匹配的野生型探针C、三种不同的单碱基变化的核苷酸探针D、靶序列与探针完全匹配的杂交点显示较弱的荧光信号E、可以对某一段核酸序列所有可能的 SNPs 位点进行扫描正确答案：D98、杂交时的温度与错配率有关,错配率每增加 1%,则 Tm 值下降A、3~3.5℃B、0.5℃C、4~4.5℃D、2~2.5℃E、1~1.5℃正确答案：E99、电脑显示和打印出的 DNA 碱基序列图谱中不出现的颜色:A、紫B、蓝C、绿D、黄E、红正确答案：A100、常见基因芯片合成的两大类方法是( )A、原位合成和在片合成B、分子印章多次压印合成和在片合成C、原位合成和直接点样D、光引导原位合成和喷墨合成E、离片合成和直接点样正确答案：C。
核酸分子杂交和PCR技术
核酸的分子杂交技术一、核酸分子杂交用标记的已知DNA或RNA片段（探针）来检测样品中未知核酸序列，通过核苷酸间碱基互补的原那么发生异源性结合，再经显影或显色的方式，将结合核酸序列的位置或大小显示出来。
待测的核酸序列，能够是克隆的基因片段，也能够是未克隆化的基因组DNA和组织细胞的RNA。
二、核酸分子杂交的分类液相杂交核算分子杂交印记杂交固相杂交原位杂交1.固相杂交：将需要杂交的一条核酸链先固定在固体支持物上，另一条核酸链游离在液体中。
2.液相杂交：参与反映的两条核酸链都游离在液体中。
经常使用固相杂交类型：Southern印迹杂交、Northern印迹杂、菌落原位杂交、斑点杂交、狭缝杂交、组织原位杂交、夹心杂交等。
三、核酸分子杂交的大体原理一、变性：在某些理化因素的作用下，核酸双链分子碱基对的氢键断裂，疏水作用被破坏，双链螺旋或发夹结构被拆开，有规那么的空间结构被破坏，形成单链分子，称为核酸的变性。
﹡引发核酸变性的因素：热、酸、碱、化学试剂（如：尿素、甲酰胺、甲醛等）。
﹡加热变性是最经常使用的方式，一样加热80-100℃数分钟即可使核酸分子氢键断裂，双链分开。
﹡变性的核酸分子失去了生物活性，同时理化性质也随之改变，其紫外吸收值（A260）也随之升高。
可用紫外吸收的转变来跟踪DNA的变性进程。
以A260吸收值对应温度作图，取得DNA的变性曲线或熔解曲线。
增色效应：DNA变性后对260nm紫外光收增加的现象。
DNA热变性现象双螺旋结构即发生解体，两条链分开形成无规那么线团。
同时，一系列物化性质发生改变：260nm处紫外吸收值升高，粘度降低，浮力密度升高。
由于二级结构的丧失，也失去了部份或全数生物活性。
增色效应和减色效应当DNA分子加热变性后，其260nm的紫外吸收会急剧增加的现象称为增色效应。
变性DNA复性后，在260nm处的吸收值减少的现象称为减色效应。
A260值达到最大值1/2时的温度称为解链温度或熔解温度（melting temperature,Tm)，现在50%的DNA分子发生了变性。
分子生物学练习题库+答案
分子生物学练习题库+答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、α互补筛选法属于：A、原位杂交筛选B、抗药性标志筛选C、免疫化学筛选D、酶联免疫筛选E、标志补救筛选正确答案：E2、原核生物染色体基因组是A、线性双链DNA分子B、环状双链DNA分子C、线性单链DNA分子D、线性单链RNA分子E、环状单链DNA分子正确答案：B3、进行蛋白质溶液凝胶过滤脱盐时,宜选用的葡萄糖凝胶是A、G-75B、G-100C、G-150D、G-25E、G-200正确答案：D4、关于DNA双螺旋结构模型的叙述中，除了哪一项外其余都是正确的A、两股核苷酸链呈反向平行B、两股链间有严格的碱基配对关系C、为右手螺旋，每个螺距含10对碱基D、极性磷酸二酯键位于双螺旋内侧E、螺旋直径为2nm正确答案：D5、已知序列的情况下，获得目的DNA最常用的是A、筛选cDNA文库B、化学合成法C、DNA合成仪合成D、聚合酶链式反应E、基因组DNA文库分离正确答案：D6、分子生物学领域中，分子克隆主要是指A、DNA的大量复制B、DNA的大量剪切C、RNA的大量剪切D、RNA的大量复制E、蛋白质分子的大量复制正确答案：A7、Southem杂交通常是指A、DNA与RNA杂交B、DNA与DNA杂交C、RNA与RNA杂交D、蛋白质与蛋白质杂交E、DNA与蛋白质杂交正确答案：B8、下述哪一条对质粒的描述是错的？A、从细菌体内分离出的质粒DNA在体外呈现超螺旋，开环和线性三种状态的混合物B、质粒DNA往往是闭环状态C、质粒小则转化效率较高D、质粒对宿主细胞的转化效率高于噬菌体E、大片段DNA与质粒重组较困难正确答案：D9、tRNA的结构特点不包括A、含甲基化核苷酸B、5’-末端具有特殊的帽子结构C、有局部的双链结构D、三叶草型的二级结构E、倒L型三级结构正确答案：B10、下列哪种不是癌基因产物A、生长因子类似物B、酪氨酸蛋白激酶C、转录调控中的反式作用因子D、细胞骨架蛋白E、RNA聚合酶正确答案：E11、Taq-DNA聚合酶可以不要模板在dsDNA的末端加上A、dCTPB、dGTPC、dATPD、dTTPE、dNTP正确答案：C12、确切地讲，cDNA文库包括含:A、一个物种的全部基因信息B、一个物种的全部mRNA信息C、一个生物体组织或细胞的全部基因信息D、一个生物体组织或细胞的全部mRNA信息E、一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息正确答案：E13、有关真核基因组的说法错误的是A、基因组DNA以染色体的形式储存在细胞核内B、结构基因大多为断裂基因C、真核基因的转录产物为单顺反子D、基因组的编码序列所占比例远低于非编码序列E、真核生物基因组不包括线粒体基因组正确答案：E14、下述哪项不是重组DNA的连接方式A、平端与平端的连接B、黏性末端与黏性末端的连接C、黏性末端与平端的连接D、人工接头连接E、同聚物加尾连接正确答案：C15、关tRNA分子的恰当解释是A、tRNA的功能主要在于结合蛋白质合成所需要的各种辅助因子B、tRNA分子多数由80个左右的氨基酸组成C、tRNA的D、反密码环中的反密码子的作用是结合DNA中相互补的碱基E、以上都不正确正确答案：C16、以质粒为载体,将外源基因导入受体菌的过程称为A、转位B、感染C、转染D、转化E、转导正确答案：D17、有关PCR的描述，不正确的为A、引物决定扩增的特异性B、是一种酶促反应C、以DNA或RNA作为模板D、扩增的序列是氨基酸残基E、是在体外进行的核酸复制过程正确答案：D18、菌落杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、用于基因定位分析C、不仅可以检置DNA样品中是否存在某特定的基因,还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息D、阳性菌落的筛选E、检测目标是正确答案：D19、分子杂交实验不能用于：A、单链DNA与RNA分子之间的杂交B、双链DNA与RNC、分子之间的杂交D、单链RNA分子之间的杂交E、单链DNA分子之间的杂交F、抗原与抗体分子之间的杂交正确答案：B20、右手DNA双螺旋模型是何年提出的A、1950年B、1953年C、1958年D、1955年E、1919年正确答案：B21、适用于DNA序列中单个碱基突变的检测方法是A、多重PCRB、巢式PCRC、锚定PCRD、LCRE、原位PCR正确答案：D22、核酸分子杂交的原理是：A、核苷酸分子间形成磷酯键配对B、抗原抗体结合C、碱基互补配对D、氨基酸残基配对E、配体受体结合正确答案：C23、有关核酸的变性与复性的恰当叙述为A、热变性后相同的DNA经缓慢冷却后可复性B、不同的DNA分子变性后，在合适温度下都可复性C、复性的最佳温度为25摄氏度D、热变性的DNA迅速降温过程也称作退火E、以上都不正确正确答案：A24、原核生物的基因主要存在于A、质粒B、类核C、线粒体D、核糖体E、转座因子正确答案：B25、PCR技术的发明人是A、穆利斯B、史蒂文·沙夫C、兰德尔·才木D、沃森E、施莱登正确答案：A26、DNA和RNA共有的成分是A、D-2-脱氧核糖B、D-核糖C、鸟嘌呤D、尿嘧啶E、胸腺嘧啶正确答案：C27、关于癌基因论述正确的是A、癌基因只存在于病毒中B、甲基化程度增高导致原癌基因被激活C、细胞癌基因是细胞的正常基因D、细胞癌基因来源于病毒癌基因E、有癌基因的细胞一定发生癌变正确答案：C28、下列哪一种概念不属于印迹技术：A、DNA杂交B、RNA杂交C、WesternD、斑点杂交E、氨基酸层析正确答案：E29、核酸中含量相对恒定的元素是A、氮B、氧D、碳E、磷正确答案：E30、下列有关DNA变性的叙述，不正确的是A、两条多核苷酸链间氢键断裂B、分子中磷酸二酯键断裂C、DNA中含GC碱基对多则Tm值高D、两条多核苷酸链分离E、A正确答案：B31、质粒DNA提取中,沉淀DNA的是A、70%乙醇B、无水乙醇C、酚-氯仿D、SDSE、异丙醇正确答案：B32、RNA和DNA彻底水解后的产物A、核糖相同，部分碱基不同B、碱基相同，核糖不同C、碱基不同，核糖不同D、碱基不同，核糖相同E、部分碱基不同，核糖不同正确答案：E33、核酸的基本组成单位是A、戊糖和磷酸B、戊糖和碱基C、核苷酸D、戊糖、碱基和磷酸E、以上均不正确正确答案：C34、用于蛋白质检测的标本长期保存于A、-20℃C、8℃D、温室E、-70℃正确答案：E35、蛋白质水平的检测，主要采用A、原位杂交法B、Southern印迹法C、Northern印迹法D、斑点杂交法E、Western印迹法正确答案：E36、关于 PCR 的基本成分叙述错误的是：A、特异性引物B、耐热性DNA聚合酶C、ddNTPD、含有MgE、模板正确答案：C37、构成核酸的基本单位是A、核苷酸B、多核苷酸C、磷酸戊糖D、核苷E、环核苷酸正确答案：A38、DNA的二级结构是A、β-折叠B、α-螺旋C、双螺旋结构D、三叶草结构E、锌指结构正确答案：C39、不属于乳糖操纵子结构的是A、启动子B、操纵原件C、通透酶相关基因D、外显子区域E、LacZ正确答案：D40、下列有关mRNA的叙述，正确的是A、为线状单链结构，5’端有多聚腺苷酸帽子结构B、可作为蛋白质合成的模板C、链的局部不可形成双链结构D、3’末端特殊结构与mRNA的稳定无关E、三个相连核苷酸组成一个反密码子正确答案：B41、核酸的最大紫外光吸收值一般在哪一波长附近A、280nmB、260nmC、220nmD、240nmE、200正确答案：B42、组织DNA提取中,苯酚-氯仿抽提离心分三层,DNA位于A、上层B、中间层C、下层D、中间层和下层E、上下均有正确答案：A43、基因芯片显色和分析测定方法主要为A、32P法B、荧光法C、放射法D、生物素法E、地高辛法正确答案：B44、多重PCR反应体系中引物数量为A、不加引物B、半对引物C、一对引物D、两对引物E、两对以上引物正确答案：E45、下列有关加热导致DNA变性的叙述，不正确的是A、黏度降低B、紫外光吸收值降低C、50％链结构被解开时的温度称为DNA的TmD、热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性E、变性后的DNA紫外吸收增强正确答案：B46、重组DNA技术中实现目的的基因与载体DNA拼接的酶是A、限制性核酸内切酶B、RNA聚合酶C、DNA连接酶D、RNA连接酶E、DNA聚合酶正确答案：C47、从细菌体内分离出的质粒DNA，在体外的状态是A、多聚体B、超螺旋C、开环D、线性E、单链正确答案：B48、下列几种DNA分子的碱基组成比例各不相同，哪一种DNA的解链温度最低A、DNA中A+T含量占15％B、DNA中C+C含量占25％C、DNA中C+C含量占40％D、DNA中A+T含量占60％E、DNA中C+C含量占70％正确答案：B49、DNA携带生物遗传信息意味着A、病毒的侵染是靠蛋白质转移至宿主细胞来实现的B、不论哪一物种碱基组成均应相同C、同一生物不同组织的DNA，其碱基组成相同D、DNA碱基组成随机体年龄及营养状况而改变E、同一物种碱基组成不同正确答案：C50、分离纯化核酸的原则是A、保持二级结构完整并保证纯度B、保持空间结构完整C、保持一级结构完整并保证纯度D、保证纯度与浓度E、保证一定浓度正确答案：C51、核酸变性后可发生A、增色效应B、减色效应C、沉淀D、最大吸收峰波长发生转移E、失去对紫外线的吸收能力正确答案：A52、世界上首次用已经分化成熟的体细胞核通过克隆技术培育的动物是A、克隆绵羊B、克隆奶牛C、克隆猴D、克隆鼠E、克隆猪正确答案：A53、目前,临床实验室最常用的PCR技术是A、定性PCRB、实时荧光定量PCRC、反转录PCRD、多重PCRE、数字PCR正确答案：B54、有关DNA的变性是A、DNA分子中糖苷键的断裂B、DNA分子中磷酸二酯键的断裂C、DNA分子中碱基的水解D、DNA分子由正超螺旋转变成负超螺旋E、DNA分子中碱基间氢键的断裂正确答案：E55、α-互补筛选法属于A、抗生素抗性筛选B、免疫化学筛选C、分子杂交筛选D、标志补救筛选E、酶联免疫筛选正确答案：D56、克隆的基因组DNA不宜在以下哪种系统中表达A、E.coli表达体系B、酵母表达体系C、COS细胞表达体系D、昆虫表达体系E、哺乳动物细胞表达体系正确答案：A57、具有里程碑意义的.、标志着现代分子生物学开端的是A、遗传规律B、发现DNA聚合酶C、PCR技术D、基因编辑技术E、DNA双螺旋结构正确答案：E58、重组体中切出插入片段，最常用的方法是A、用DNA酶将其切出B、用多种限制性内切酶将其切出C、用核酶将其切出D、用重组时所用的限制性内切酶将其切出E、用DNA聚合酶I将其切出正确答案：D59、DNA序列测定中，待测DNA克隆到质粒载体后，通过下列哪种方法处理重组载体，使测序引物便于结合模板DNA？A、碱变性B、加热C、紫外线照射D、酸变性E、乙醇处理正确答案：A60、以等位基因特异的寡核行微探针余交法给诊断某常染色体隐性道遗传病时,若能与突变研及正常探针结合,则该样本为A、不能确定B、正常人C、纯合体患者D、携带者E、杂合体患者正确答案：E61、对于tRNA的叙述哪一项是不正确的A、tRNA分子中含有稀有碱基B、tRNA=级结构呈三叶草形C、tRNA的=级结构有=氢尿嘧啶环D、反密码环是有CCA三个碱基组成反密码子E、以上均不正确正确答案：D62、下列关于DNA碱基组成的的叙述正确的是A、DNA分子中A与T的含量不同B、同一个体成年期与少儿期碱基组成不同C、同一个体在不同营养状态下碱基组成不同D、同一个体不同组织碱基组成不同E、不同生物来源的DNA碱基组成不同正确答案：E63、在分子生物学领域,重组DNA又称A、酶工程B、蛋白质工程C、细胞工程D、基因工程E、DNA工程正确答案：D64、基因工程中，将目的基因与载体DNA拼接的酶是A、DNA聚合酶IB、DNA聚合酶ⅢC、限制性内切核酸酶D、DNA连接酶E、反转录酶正确答案：D65、M13噬菌体适用于A、构建基因组文库B、构建CDNA文库C、克隆较小DNA片段D、克隆待测序的E、以上都对正确答案：D66、tRNA分子上3’端CCA-OH的功能为A、辨认mRNA上的密码子B、提供-OH基与氨基酸结合C、被剪接的组分D、形成局部双链E、识别并结合核蛋白体正确答案：B67、外显子的特点通常是A、不编码蛋白质B、不被转录也不被翻译C、调节基因表达D、只被转录但不翻译E、编码蛋白质正确答案：E68、下面哪一种技术不能用于鉴别核酸分子序列：A、斑点印迹B、原位杂交C、Southern印迹杂交D、WesternE、Northern印迹杂交正确答案：D69、用于检测HPV的分子生物学检测方法中,哪个具有高特异、高敏感、高通量、操作期便快速的特点A、核酸杂交技术B、飞行时间质谱技术C、荧光定量PCRD、基因芯片技术E、流式荧光技术正确答案：C70、已知一段设计好的引物的序列为GTGGATCCATGGCTCCTCTGAAGATTC，其Tm值为A、80B、78C、82D、84E、55正确答案：C71、哪种方法要求宿主细胞必须是感受态细胞A、CaClB、病毒感染法C、脂质体转染法D、显微注射法E、磷酸钙共沉淀法正确答案：A72、核酸的紫外吸收特性来自A、脱氧核糖B、磷酸二酯键C、磷酸基团D、嘌呤嘧啶碱基E、核糖正确答案：D73、DNA 链末端合成终止法不需要：A、ddNTPB、dNTPC、逆转录酶D、DNA聚合酶E、模板正确答案：C74、目前常用的基因表达体系细胞包括A、大肠埃希菌B、哺乳动物细胞C、昆虫细胞D、酵母细胞E、以上都是正确答案：E75、下列有关核酸分子杂交的叙述，不正确的是A、杂交可发生在碱基序列部分互补的核酸分子之间B、杂交可发生在碱基序列完全互补的核酸分子之间C、具有双螺旋结构的核酸分子之间才能杂交D、不同来源的DNA分子之间可以杂交E、以上都不正确正确答案：C76、一个DNA分子中，若A所占的摩尔比为17.2％，则C的摩尔比应为A、67.2％B、32.8％C、65.6％D、17.2％E、50.3%正确答案：B77、核酸变性后，可产生的效应是A、溶液黏度增加B、溶液黏度减小C、增色效应D、最大吸收波长发生转移E、失去对紫外线的吸收能力正确答案：C78、对于镰刀型红细胞贫血的基因诊断不可以采用A、PCR-RFLPB、DNA测序C、核酸分子杂交D、等位基因特性性PCRE、Western正确答案：E79、离子交换层有效分离蛋白质的依据是A、蛋白质的pIB、配体的特异性亲和力C、蛋白的分子大小D、蛋白的溶解度E、蛋白所带电荷正确答案：E80、EB溴化乙锭作为核酸电泳指示剂的原理是A、EB是一种可视物质B、EB是核酸传性染料C、EB特异性结合核酸分子D、EB在紫外光下放射荧光E、插入核酸分子之间并在紫外光下产生荧光正确答案：E81、DNA受热变性时，出现的现象是A、多聚核苷酸链水解成单核苷酸B、在260nm波长处的吸光度增高C、碱基对以共价键连接D、溶液黏度增加E、最大光吸收峰波长发生转移正确答案：B82、属于核糖核酸二级结构的描述是A、核苷酸在核酸长链上的排列顺序B、tRNA的三叶草结构C、DNA双螺旋结构D、DNA的超螺旋结构E、DNA的核小体结构正确答案：B83、真核生物染色质DNA的三级结构是A、结构域B、超螺旋C、锌指结构D、核小体E、模体正确答案：D84、提出右手DNA双螺旋模型的科学家是A、Watson和CrickB、PaulingC、SmithD、Sanger，Maxam和GilbertE、Cech正确答案：A85、斑点/夹缝杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、用于基因定位分析C、不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，哈可以获取基因片段的大小及酶切位点分布的信息D、阳性菌落的筛选E、蛋白水平的检测正确答案：A86、重组DNA、技术常用的限制性核酸内切酶为A、I类酶B、II类酶C、III类酶D、IV类酶E、V类酶正确答案：B87、长期保存核酸样品的适宜温度是A、-50℃B、-20℃C、室温D、0~4℃E、-80℃正确答案：E88、催化聚合酶链反应的酶是：A、DNA连接酶B、反转录酶C、末端转移酶D、DNA聚合酶IE、Taq正确答案：E89、同一种哺乳细胞中，下列哪种情况是正确的A、在过剩的DNA存在下，所有RNA都能与DNA杂交B、在过剩的RNA存在下，所有DNA片段能与RNA杂交C、RNA与DNA有相同核苷酸组成D、RNA与DNA有相同的碱基比例E、以上都不正确正确答案：A90、下列几种DNA分子的碱基组成比例各不相同，哪一种DNA的解链温度（Tm）最低A、DNA中A+T含量占15％B、DNA中G+C含量占25％C、DNA中G+C含量占40％D、DNA中A+T含量占60％E、DNA中G+C含量占70％正确答案：B91、PCR技术的本质是A、核酸杂交技术B、核酸重组技C、核酸扩增技术D、核酸变性技术E、核酸连接技术正确答案：C92、下列说法错误的是A、用于RNA检测的样本短期可保存在-20℃B、用于PCR检测的样本可用肝素作为抗凝剂C、如使用血清标本进行检测应尽快分离血清D、外周血单个核细胞可从抗凝全血制备E、用于核酸提取的痰液标本应加入1mol/L正确答案：B93、以下哪种PCR技术，广泛应用于组织胚胎学和肿瘤学的研究?A、原位PCRB、差异显示PCRC、反向PCRD、不对称PCRE、RT-PCR正确答案：A94、基因工程操作中转导是指A、重组质粒导入宿主细胞B、把DNA重组体导入真核细胞C、DNA重组体导入原核细胞D、把外源DNA导入宿主细胞E、以噬菌体或病毒为载体构建的重组DNA导入宿主细胞正确答案：E95、寡核苷酸探针的最大优势是A、可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列B、易合成C、杂交分子稳定D、易标记E、易分解正确答案：A96、重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是：A、DNA聚合酶B、RNA聚合酶C、DNA连接酶D、RNA连接酶E、限制性核酸内切酶正确答案：C97、寡核苷酸探针一般A、长度50bp-100bpB、虽然不用太长，但越长越好C、就是一段人工合成的寡核苷酸序列D、长度＜15bpE、长度在18bp左右正确答案：E98、一些标记物可与某种物质反应产生化学发光现象，通过化学发光可以像核素一样直接使X线胶片上的乳胶颗粒感光。
基因诊断与基因治疗习题及答案
第十八章基因诊断与基因治疗一、填空题1. 基因突变可导致____的改变，从而引起____。
2. 基因变异包括____和____。
3. 内源性基因变异包括____、____、____和____等。
4. 外源性基因变异是指____疾病。
5. 基因诊断常用技术方法有____、____、____和____。
6. 核酸分子杂交技术是依据____、____和____原理设计的技术方法。
7. 常用固相核酸杂交方法有____、____、____、____、____和____等。
8. PCR是____的缩写，译为____。
9. PCR过程由____、____和____步骤组成。
10. 生物芯片技术包括____、____、____、____、____和____。
11. 基因测序是将有关基因进行____，测出____，从中找出____所在。
12. 基因治疗在概念上分为____和____。
目前普遍接受的是____。
13. 基因治疗的总体策略主要有____、____、____、____、____、____和____等。
14. 基因治疗的基本程序包括____、____、____、和____。
15. 获得治疗性基因的方法包括____、____、____、和____。
16. 常被用于基因治疗的基因转移载体有____、____和____。
17. 基因治疗中的靶细胞也称为____细胞，靶细胞有____和____两大类。
18. 基因转移方法概括地讲有____、____和____等。
二、名词解释19. 基因诊断20. 基因治疗21. 核酸分子杂交22. Southern blotting23. 生物芯片24. 免疫基因治疗25. 基因矫正26. 基因置换27. 基因增补28. 基因失活29. 自杀基因30. 夹心杂交31. 引物32. Northern blotting33. PCR三、问答题34. 简述基因诊断的特点。
35. 简述分子杂交程序。
核酸分子杂交技术
热变性
解链曲线:如果在连续加热DNA DNA的过程中以温 解链曲线:如果在连续加热DNA的过程中以温
度对A260值作图,所得的曲线称为解链曲线 度对A260值作图,所得的曲线称为解链曲线. 值作图
目录
Tm:变性是在一个相当窄的温度范围内完成,在这 :变性是在一个相当窄的温度范围内完成, 一范围内,双链DNA变性一半所需要的温度称为DNA的 一范围内,双链DNA变性一半所需要的温度称为DNA的 DNA变性一半所需要的温度称为DNA 解链温度,又称熔解温度(melting temperature, Tm). 解链温度,又称熔解温度 . 其大小与G+C含量成正比. 含量成正比. 其大小与 含量成正比
Tm=(G+C)%×0.41+69.3 ( ) ×
DNA的复性 三,DNA的复性
DNA复性(renaturation)的定义 DNA复性(renaturation)的定义 复性(renaturation) 在适当条件下,变性DNA的两条互补链可 在适当条件下,变性DNA的两条互补链可 DNA 恢复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性. 恢复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性. 复性 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性, 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性, DNA经缓慢冷却后即可复性 这一过程称为退火(annealing) 这一过程称为退火(annealing) . 退火 减色效应 DNA复性时,其溶液OD260降低. DNA复性时,其溶液OD260降低. 复性时 OD260降低
DNA指纹(DNA finger-print)分析的基 指纹( 指纹 分析的基 本流程如下: 本流程如下: DNA的提纯与纯化→限制性内切酶消化→ DNA的提纯与纯化→限制性内切酶消化→电 的提纯与纯化 泳分离→分子杂交→ 泳分离→分子杂交→指纹图的显示
核酸分子杂交技术
第二节 核酸分子杂交的类型
二、Southern印迹杂交
DNA变性 中和 Southern印迹 预杂交 杂交 洗膜 检测
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第二节 核酸分子杂交的类型
二、Southern印迹杂交
毛细管转移示意图
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第二节 核酸分子杂交的类型
二、Southern印迹杂交
电转移示意图
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第二节 核酸分子杂交的类型
第二节 核酸分子杂交的类型
一、反向点杂交
二、Southern印迹杂交
三、Northern印迹杂交 四、原位杂交 其它命名如：斑点杂交
菌落杂交 微板酶联杂交
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第二节 核酸分子杂交的类型
杂交分类
按照杂交的反应条件分为固相和液相杂交两类：
固相杂交 ➢ 探针 ➢ 被测DNA（RNA） ➢ 在固体支持物上杂交 ➢ 容易洗膜
碱性磷酸酶
罗丹明和FITC
地高辛
NT、PCR、RP 600W可见光照 365紫外线照 化学合成法或直接法
化学合成法或直接法
合成法
RP、NT
酶标亲和素或酶标 抗生物素抗体显色 抗生物素抗体显色 直接底物显色或用酶 抗体+底物显色 直接底物显色或用酶
抗体+底物显色 荧光显微镜观察或酶 标抗体+底物显色 酶标抗体+底物3显0 色
Northern印迹 杂交流程图
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第二节 核酸分子杂交的类型
三、Northern印迹杂交
与Southern印迹杂交比较：
– RNA提取过程中需特别注意RNA酶的污染 – 所用的器材最好与Southern印迹实验的分开使用 – RNA变性的方法：不能用碱变性，因为碱会水解
RNA 2’-OH – 变性剂的作用：防止RNA分子形成发夹式的二级
核酸分子杂交(DNADNA or DNARNA)
优点：简单、快速、可同时检测多个样品
液相杂交
指待测核酸和探针都存在于杂交液中，碱基互补 的单链核酸分子在液体中配对形成杂交分子的过程。
（一）RNA酶保护分析法
1、RNA酶保护分析法原理
RNaseA和RNaseT1专一水解杂交体系中的单 链RNA，不水解探针RNA与待测RNA互补形成 的双链RNA，使杂交分子得到保护，称RNA酶 保护分析法。
核酸分子杂交的基本原理
DNA变性
• 方法
热变性：90~100℃ 酸碱变性：常采用碱变性 化学试剂变性：尿素、甲酰胺、甲醛等
• 特点：粘度增加、密度增加、增色效应、溶 解温度(melting temperature,Tm)
DNA复性或杂交(hybridization)
• DNA/DNA,DNA/RNA,RNA/RNA等
2、凝胶过滤柱层析法：利用凝胶的分子筛作用， 将大分子DNA和小分子dNTP、磷酸根离子及寡 核苷酸（<80bp)等物质分离，常用凝胶基质是 Sephadex G-50
3、微柱离心法：其原理与上述凝胶过滤柱层析法 相同，不同的是上述采用洗脱的方式纯化探针， 而此法则是利用离心的方式来纯化探针
Biotin
Avidin
(2)探针标记物 理想标记物应具备的特性：
• 高度灵敏性 • 不影响碱基配对的特异性 • 不影响探针分子的主要理化性质 • 对酶促反应活性无影响或影响不大 • 检测方法具有高度灵敏性和高度特异性
BCIP/NBT
紫蓝色沉淀
碱性磷酸酶
抗Dig抗体 Dig
(3)探针标记方法
影响杂交的因素
核酸分子的浓度和长度
• 浓度大，复性快；分子量大，复性慢
习题2核酸分子杂交技术
.第二章核酸杂交技术（一）名词解释1．原位杂交2．核酸分子杂交技术3．探针4．反向点杂交5．缺口平移标记法6．随机引物标记法7．末端标记法8．Southern blot杂交9．荧光原位杂交10．菌落杂交（二）选择题【A型题】1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（）A G－C含量B A－T含量C A－G含量D A－C含量E T－G含量2．液相杂交是下列哪一种（）A Southem印迹杂交B Northem印迹杂交C Dot印迹杂交D Slot印迹杂交E RPA实验3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（）A 菌落杂交B Southern杂交C Northern杂交D 液相杂交E 原位杂交4．Southern杂交通常是指（）A DNA和RNA杂交B DNA和DNA杂交C RNA和RNA杂交D 蛋白质和蛋白质杂交E DNA和蛋白质杂交5．最容易降解的核酸探针是( )A cDNA探针B dsDNA探针C ssDNA探针D gDNA探针E: RNA6．探针基因芯片技术的本质就是（）A 核酸分子杂交技术B 蛋白质分子杂交技术C 聚合酶链反应技术D 基因重组技术E 酶切技术7．DNA探针的长度通常为( )A 1000 ～ 2000个碱基B 500 ～ 1000个碱基C 400 ～ 500个碱基D 100 ～ 400个碱基E. <100个碱基8．寡核苷酸探针的最大的优势是（）A 杂化分子稳定B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列C 易标记D 易合成E 易分解9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( ) A 甲醛B 乙醛C 氢氧化钠D 碳酸钠E 盐酸10．盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（）A 脆性大B 本底低C 共价键结合D 非共价键结合E 高结合力11．最常用的DNA探针标记方法是( )A 随机引物B 切口平移C 3′ -末端标记D 5′ -末端标记E PCR法12．为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（）A 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干燥过B 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过C 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过D 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过E 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过13．5′一末端的DNA探针标记主要依靠的酶是( )A T4多聚核苷酸激酶B 末端转移酶C AKPD DNA polⅡE DNA pol14．血友病是一种（）A 染色体病B X连锁遗传病C 先天性代谢缺陷病D 先天畸形E 常染色体隠性遗传病15．预杂交中最常用的封闭剂是( )A Denhavdt's溶液B 5×TBEC 1×TBED 1×TAEE 1×TPE16．检测目标是RNA的技术是（）A Southern杂交B Western杂交C Northern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤17．检测靶序列是DNA的技术是（）A Southern杂交B Western杂交C Northern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤18．DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA 分子成为单链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针19．具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针20．一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针21．点/狭缝杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测22．放射自显影时反射光产生的潜影在低温下较稳定，最适温度是( )A -70℃B -30℃C -20℃D -10℃E 4℃23．Southern印迹杂交可以用于（）A 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B 检测的目标是RNAC 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测24．寡核苷酸探针的Tm简单计算公式为( )A Tm=4(G+C)+2(A+T)B Tm=2(G+C)+4(A+T)C Tm=6(G+C)+4(A+T)D Tm=2(G+C)+6(A+T)E Tm=6(G+C)+2(A+T)25．Northern印迹杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C 检测的目标是RNAD 用于基因定位分析E 阳性菌落的筛选2626．荧光原位杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 检测的目标是RNAC 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测27．以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为（）A 正常人B 杂合体患者C 纯合体患者D 携带者E 不能确定28．在pH为下述何种范围时，Tm值变化不明显( )A pH为3～5B pH为4～5C pH为5～6D pH为5～9E pH为8～1129．一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（）A 2-10bpB 17-50bpC 60-100bpD 100-200bpE 200-300bp30．变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是( )A 甲酰胺B 氢氧化钠C 浓盐酸D 稀盐酸E 甲醇31．下列有关cDNA探针的描述不正确的为（）A 利用mRNA通过RT-PCR在体外反转录可制备大量的cDNA探针B cDNA探针不包含内含子C cDNA探针不包含大量的高度重复序列D 由于cDNA探针自身所携带的poly（dT），有可能产生非特异性杂交的问题E cDNA探针合成方便，成为探针的重要来源32．一般来说核酸杂交的温度低于其Tm值的多少度进行( )A 15～25℃B 10～15℃C 5～10℃D 30～40℃E 40～50℃33．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其Tm 值( )A 30～40℃B 20～30℃C 15～30℃D 10～15℃E 5℃34．一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应常在多少℃下进行( )A 90B 80C 75D 68E 5835．在含50%甲酰胺时，杂交反应在多少℃进行( )A 70B 65C 55D 42E 3536．杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加1%，则Tm值下降( )A 0.5℃B 1～1.5℃C 2～2.5℃D 3～3. S℃E 4～4.5℃37．RNA/RNA的杂交体的Tm值一般应增加( )A 1～5℃B 5～10℃C 10～15℃D 15～20℃E 20～25℃38．杂交的时间一般为Cot1/2的( )A l倍B 1～3倍C 3 ～5倍D 5～8倍E 10倍以上39．为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入( )A ssDNAB 1×SSCC 10×SSCD 5×TBECE 50×TAE40．随机引物法标记探针常用的A、G、C、T聚合体的数目是( )A 4个B 6个C 8个D 10个E 12个【X型题】41．下列哪些是影响DNA复性的因素( )A DNA浓度B DNA的分子量C 温度D 碱基组成E DNA的来源42． DNA探针的优点有（）A 制备方法简单B DNA探针易降解C DNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择D 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽E 单链，不存在竞争性的自身复性43．以下哪些方法可以用于探针的全程标记（）A DNA加尾法B DNA切口平移标记法C 随机引物标记法D 末端标记E 尾端标记44．关于DNA变性的描述正确的是( )A 二级结构破B 一级结构破坏C 黏度降低D 生物活性丧失E 浮力密度增加45．以下哪些因素可以使DNA变性（）A 增加溶液的浓度B 加热C 改变溶液的pH值D 有机溶剂E 冷藏46．预杂交中，下列能起封闭作用的是( )A ssDNAB BSAC 小牛胸腺DNAD 脱脂奶粉E DTT47．变性的DNA会发生哪些理化性质的变化（）A 粘度下降B 沉降速度增加C 浮力下降D 紫外光吸收增加E 紫外光吸收减少48.下列物质适于非放射性探针标记的是( )A AKPB ACPC 生物素D 地高辛E 荧光素49．关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是( )A 特异性高B 可依赖氨基酸序列推测其序列C 分子量小D 可用于相似基因顺序差异性分析E 可用末端转移酶进行5′端标记50．通过哪些措施可以提高杂交反应的速度（）A 采用大片段探针B 少量的反应体积C 高反应温度D 不断的振摇E 大量的反应体积51．关于切口平移法下述正确的是( )A 可标记线性DNAB 可标记松散螺旋DNAC 可标记超螺旋DNAD 可标记存在缺口的双链DNAE 可标记随机引物52．以下哪些方法可以用于从凝胶上转移DNA（）A 毛细转移B 真空转移C 负压转移D 电泳转移E 冷冻转移53．关于随机引物法标记探针下述正确的是( )A 可标记单链DNAB 可标记双链RNAC 可标记单链RNAD 比活性高达108cpm／µg DNA以上E 常经过SephadexG-50纯化才可使用54．可以采用哪些方法来标记探针（）A 杂交标记法B 切口平移标记法C 5’-末端的标记D 3’-末端的标记E 化学法延长标记55．整个杂交反应主要以下哪些步骤组成（）A 预杂交B 杂交C 洗脱D 固定E 转移56．放射自显影可以被分为（）A 直接放射自显影B 氧化显影C 封闭显影D 间接放射自显影E 固定显影57．关于电转移下列描述正确的是( )A 快速、高效B 需要特殊设备C 缓冲液用TAE或TBED 可产生高温E 常用NC膜作为支持介质58．预杂交的主要目的是（）A 平衡滤膜B 封闭非特异性杂交的位置C 提高杂交信号的检测效率D 便于从滤膜上除去探针E 清除用于杂交反应检测的显色物质59.关于非放射性探针标记，下列描述正确的是( )A 对人体危害小B 需要特殊设备C 可长时间使用D 灵敏度不如放射性探针E 重新杂交新探比较容易60．对于改变DNA片段长度的突变，可以由于缺失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致限制性片段长度改变。
核酸分子杂交的原理和实验方法
核酸分子杂交的原理和实验方法原理所谓DNA探针，实质上是一段已知的基因片段，应用这一基因片段即可与待测样品杂交。
如果靶基因和探针的核苷酸序列相同，就可按碱基配对原则进行核酸分子杂交，从而达到检查样品基因的目的。
在随机引物法标记反应液中，有随机合成的六聚体核昔酸(hexanucleotide)作为引物，dATP、dCTP、dGTP、dTTP和D1G-11-dUTP作为合成底物，以单链DNA作为模板，在Klenow酶的作用下，合成掺入地高辛的DNA链。
以地高辛标记的探针与靶基因DNA链杂交后，再通过免疫反应来进行检测。
一般通过酶标抗地高辛抗体来检测，就可以肯定杂交反应的存在。
免疫检测采用过氧化物酶系统，DAB显色。
敏感性很高。
可用于膜上杂交和原位杂交。
操作程序(1) 随机引物标记操作程序如下：①用灭菌去离子蒸馏水稀释1μg DNA至总体积16μl。
②DNA热变性：把DNA瓶置于沸水中，水浴10分钟。
然后，迅速地插入碎冰中3分钟以上。
③加4μl DIG Random Labeling Mix(高效),混匀后再离心2000/r.p.m×5分钟。
④置37℃反应至少120分钟。
时间越长，产量越高。
延长反应时间至20小时可明显增加地高辛标记DNA的产量。
应根据需要控制反应时间。
⑤加入2μ1 10mM EDTA以中止反应，对于原位杂交和膜上杂交反应来说，标记反应可告结束，上述反应液置-20℃保存至少一年以上。
且可反复使用。
可根据下表估计标记产量：DNA模板量标记一小时标记二十小时10ng 45ng 600ng30ng 130ng 1050ng100ng 270ng 1500ng300ng 450ng 2000ng1000ng 850ng 2300ng3000ng 1350ng 2650ng(2)核酸探针膜上杂交原理和操作（一）杂交总原则脱氧核苷酸通过磷酸二酯键缩合成长链构成DNA的一级结构。
两条碱基互补的多核苷酸链按碱基配对原则形成双螺旋，构成DNA的二级结构。
分子生物习题02
一、填空题：（每空1分，共20分）1. 主要的DNA修复方式：切除修复、重复修复和SOS修复（诱导修复）。
2. 真核生物转录水平的调控主要是通过顺式作用元件（启动子）、反式作用因子（转录因子）和RNA聚合酶的相互作用来完成。
3. 反义RNA是指能与mRNA互补配对的RNA分子。
4. 基因突变主要是DNA一级结构的改变，其分子机制可以是替换、插入或缺失（倒位）等。
5.Southern blot可用于检测DNA，Northern blot可用于检测RNA, Western blot可用于检测蛋白质。
6.人类基因组计划要完成的图谱有遗传图谱、物理图谱、序列图谱和转录图谱。
7.基因组学是指阐明整个基因组（遗传物质）的结构、结构与功能的关系以及基因之间相互作用的科学。
8.在基因治疗中常用的抑制基因表达的方法是反义RNA、RNAi（基因敲除）、核酶或者三链DNA技术。
9.基因诊断的主要技术有核酸分子杂交、PCR扩增（RT-PCR）、DNA序列测定、DNA 芯片技术。
10.目前肿瘤基因诊断的主要策略有：检测肿瘤染色体异位及融合基因，检测癌基因和抑癌基因，检测肿瘤相关病毒，检测肿瘤标志物或mRNA等。
11..分子生物学是从分子水平研究生命现象、生命的本质、生命活动及其规律的科学。
12.真核生物的结构基因转录为单顺反子mRNA，并需要转录后加工。
13.原核生物转座因子可以分为以下三类：插入序列、转座子、Mu噬菌体。
14.切除修复是细胞内最普遍的修复机制，其过程包括：识别、切除、合成、连接。
15. 根据切除部位的大小，切除修复可分为两类，其中核苷酸片段切除修复是细胞内更为普遍的修复方式。
16. 色氨酸操纵子受R基因编码的阻遏蛋白调控外，还受L基因编码的衰减子调控。
17. 在特定环境信号刺激下，有些基因的表达表现为关闭或下降，这种表达方式称为阻遏表达。
18. RT-PCR是一种以mRNA为模板的体外扩增cDNA的技术。
分子生物学技术复习题2
一、单项选择题1. 下列哪项属于多基因遗传病（）A. 脆性X综合征B. Duchenne肌营养不良C. 血友病D.α-地中海贫血E. 原发性高血压2. 下列叙述错误的是（）A. 原核生物基因组具有操纵子结构B. 原核生物结构基因是断裂基因C. 原核生物基因组中含有插入序列 C. 原核生物基因组中含有重复序列E. 原核生物结构基因的转录产物为多顺反子3. 下列哪项不能被列入可以动基因的范畴（）A. 插入序列B. 质粒C. 染色体DNAD. 转座子E. 可转座噬菌体4. 操纵子不存在于（）A. 细菌基因组中B. 病毒基因组中C. 真核生物基因组中D. 大肠杆菌基因组中E. 原核生物基因组中5. 构成完整的病毒颗粒是（）A. 糖蛋白B. 结构蛋白C. 蛋白质与核酸D. 蛋白质E. 核酸6. 质粒的主要成分是（）A. 多糖B. 蛋白质C. 氨基酸衍生物D. DNA分子E. 脂类7. 基因组是（）A. 一个二倍体细胞中的染色体数B. 遗传单位C. 重复序列D. 生物体的一个特定细胞内所有基因的分子的总量E. 一个生物体内所有分子的总量8. 下列说法正确的是（）A. 质粒的主要成分是RNAB. 质粒的复制依赖于宿主细胞C. 宿主细胞离开了质粒就不能生存D. 质粒的存在对宿主细胞没有任何影响E. 不同种类的质粒不能共存于同一菌株中9. 人类体细胞中含有（）条染色体A. 44B. 45C. 23D. 47E. 4610. 波长260nm的紫外线下，A值等于1OD的光密度大约相当于多少的双链DNA ( )A. 38ug/mlB. 33ug/mlC. 50ug/mlD. 20ug/mlE. 40ug/ml11. 下面哪个方法不能用于mRNA的分离（）A. olig(dt)-纤维素柱层析法B.（异）硫氰酸胍-酚氯仿法C. Poly(U)-凝胶层析法D. 磁珠分离法E. 碱裂解法12. SDS的作用是（）A. 螯合剂，可以一直DNA酶的活性，同时降低细胞膜的稳定性B. 高效水解RNAC. 引起细胞膜的降解并能乳化脂质和蛋白质，并使它们沉淀D. 增加溶液黏度，维持渗透压，防止受机械力作用而降解E. 沉淀DNA13. 有关核酸的鉴定描述错误的是（）A. 荧光光度法可以鉴定核算样品的纯度B. 紫外分光光度法可以鉴定核算样品的浓度C. 纯DNA样品的A260/A280为2.0D. 琼脂糖凝胶电泳发可以判定核酸样品的完整性E. 蛋白质与在核酸提取过程中加入的酚均使比值下降14. 酚抽提法裂解缓冲液不包括哪些成分（）A. EDTAB. SDSC. RNAD. 蛋白酶KE. 醋酸钾15. RNA中数量最多的是（）A. mRNAB. rRNAC. tRNAD. hnRNAE. snRNA16. 纯DNA的A260/A280比值为1.8，可使比值升高的是（）A. 蛋白质B. 酚C. Mg离子D. 氯仿E. RNA17. 下列不属于分离纯化质粒DNA的方法（）A. 碱裂解法B. 异硫氰酸胍-酚氯仿一步法C. 煮沸裂解法D. SDS裂解法E. 牙签少量制备法18. 限制性内切酶切割后产生的DNA双链末端带（）A. 5’磷酸基和3’羟基B. 3’磷酸基和5’羟基C. 5’磷酸基和3’磷酸基D. 3’羟基和5’羟基E. 以上都不是19. 能识别并切割双链DNA分子特异序列的酶称（）A. 限制性核酸内切酶B. 限制性核酸外切酶C. 核酸酶D. 核酶E. DNase20. 识别和切割靶序列不同，而产生相同的黏性末端的酶是（）A. 同裂酶B. 同工异源酶C. 同尾酶D. 同工异构酶E. 甲基化酶21. 在DNA重组技术中，催化重组DNA分子形成的酶（）A. DNA聚合酶IB. Klenow片段C. 连接酶D. 末端转移酶E. 内切酶22. 克隆质粒载体不应具备的特性（）A. 复制子B. 筛选标记C. 多克隆位点D. 较高的拷贝数E. 分子量相对较大23. 关于感受态细胞性质的描述，下列说法错误的是（）A. 具有可诱导性B. 具有可转移性C. 细菌生长的任何时期都可以出现D. 不同细菌出现感受态的比例是不同的E. 细菌处于对数生长期24. 质粒扩增时加入氯霉素的目的是（）A. 利用抗药性标记进行筛选B. 抑制大肠杆菌蛋白质合成，提高质粒拷贝数C. 抑制杂菌污染D. 抑制阴性克隆E. 以上都不是25. 下述双链DNA中不属于会问结构的是（）A. GTTAACB. ATCGATC. CCAATTGGD. GATTAGE. TTCCGGAA26. DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（）A. G-C含量B. A-T含量C. A-G含量D. A-C含量E. T-G含量27. 检测靶序列是DNA的技术是（）A. Southern杂交B. Northern杂交C. Werthern杂交D. Eastern杂交E. 杂交淋巴瘤28.具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（）A.变性B. 复性C. 复杂性D. 杂交E. 探针29.标记的参与杂交反应的核酸分子，称（）A.变性B. 复性C. 复杂性D. 杂交E. 探针30.Southern杂交通常是指（）A.DNA和RNA的杂交B. DNA和DNA的杂交C. RNA和RNA的杂交D. 蛋白质和蛋白质的杂交E. DNA和蛋白质的杂交31.以mRNA为模板合成cDNA的酶是（）A.DNA连接酶B. TaqDNA聚合酶C. 末端转移酶D. RNA酶E. 逆转录酶32.下列是PCR反应体系中必须存在的成分，除外（）A.引物B. 模板C. dNTPD. Mg2+E. DMSO33.下列因子不影响聚合酶链反应忠实性的是（）A. 退火温度B. 反应PH值C. 牛血清白蛋白D. Mg2+E. TaqDNA聚合酶34.聚合酶链反应是一种（）A.体外特异转录RNA的过程B. 体外翻译蛋白质的过程C. 体外特异转录DNA的过程D. 体外特异复制DNA的过程E. 体外特异转录复制RNA的过程35.基因芯片技术的临床应用不包括（）A.疾病的诊断B. 药物的筛选C. 指导个体用药D. 基因突变的检测E. 由于蛋白质翻译后的修饰的改变而引起的疾病三、名词解释1.质粒2.基因组3.核酸分子杂交技术4.增色效应5.聚合酶链反应6.基因芯片7.核酸探针8.DNA重组9.原位杂交10.Southern杂交11.限制性内切酶。
核酸分子杂交技术
相关技术
特点
用途
（1）灵敏度高、特异性强； （2）用于 DNADNA和RNARNA的定性、定量检测。
（1）检测特异 DNADNA序列的拷贝数、特定DNADNA区域的限制性内切酶图谱，判定基因的缺失、插入、重排 现象；
（2）特异基因克隆的筛选； （3）核酸序列的初略分析； （4）PCR技术的分子基础。
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核酸分子杂交技术
生物学的基本技术
目录
01 基本原理02 相关来自术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应 用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。
基本原理
具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补还原成双链。 杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组 DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性 互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。
山东大学分子生物学章节习题及参考答案01核酸的结构与功能
分子生物学章节习题第一章核酸的结构与功能一、选择题1．不参与构成DNA的物质是A．dAMPB．dTMPC．dUMPD．dGMPE．dCMP2．核酸分子一级结构的连接方式是A．2′，3′-磷酸二酯键B．3′，5′-磷酸二酯键C．2′,5′-磷酸二酯键D．糖苷键E．氢键3．含有较多稀有碱基的核酸是A．rRNAB．mRNAC．tRNAD．核仁DNAE．线粒体DNA4．已知某双链DNA的一条链中A=30% G=24%，其互补链的碱基组成，正确的是A．T和C 46%B．A和T 46%C．A和G 54%D．T和G 46%E．T和C 54%5．作为第二信使的核苷酸是A．cAMPB．cCMPC．cUMPD．cTMPE．AMP6．核酸分子中储存、传递遗传信息的关键部分是A．戊糖构象B．碱基的旋转角C．碱基序列D．戊糖磷酸骨架E．磷酸二酯键7．用寡聚dT从总RNA中分离mRNA，是利用mRNA分子的哪一种特点A．5′端的帽子结构B．沉降系数小于25SC．分子量小D．3′端多聚AE．分子中有发夹样结构8．构成核小体的基本成分是A．RNA和组蛋白B．RNA和酸性蛋白C．DNA和组蛋白D．DNA和酸性蛋白E．rRNA和组蛋白9．参与hnRNA的剪切和转运的RNA是A．SnRNAB．mRNAC．HnRNAD．tRNAE．rRNA10．不是核酸与蛋白质复合物的是A．核糖体B．病毒C．端粒酶D．核酶E．端粒11．连接两个核小体核心颗粒的组蛋白是A．H1B．H2AC．H2BD．H3E．H412. NAD＋、FAD、CoA三种辅酶在组成上的共同点是A．均含有泛酸B．均含有尼克酸C．都是腺苷酸的衍生物D．分子中都含有半胱氨酸E．都含有磷酸核糖焦磷酸的核糖基13. 下列碱基对中，氢键数目正确的是A．A=T G=CB．A=T G≡CC．A≡T G≡CD．A≡T G=CE．A≡U G≡C14. 关于核酸电泳的叙述，错误的是A．泳动速度与分子大小有关B．泳动速度与分子构象有关C．聚丙烯酰胺电泳的分辨率最高D．分子泳动的方向与净电荷有关E．不能分离核酸或寡核苷酸混合物15. 核酸在260nm处有最大光吸收的原因是A．嘌呤环有共轭双键B．嘌呤和嘧啶环均有共轭双键C．核酸中具有磷酸二酯键D．核苷酸中具有N－糖苷键E．戊糖的呋喃型环状结构16. 关于RNA的叙述，正确的是A．电泳时泳向负极B．通常以双链形式存在C．主要有mRNA、tRNA、rRNA三种D．tRNA含量最多E．链内双螺旋以A-T、G-C互补17.维持DNA双螺旋横向稳定的力是A．碱基堆积力B．碱基对之间的氢键C．双螺旋内的疏水作用D．磷酸二酯键E．二硫键18. DNA的二级结构是A．α－螺旋B．β－片层C．β－转角D．超螺旋E．双螺旋19. 合成DNA的原料是A．NTPB．NDPC．dNTPD．dNMPE．dNDP20. 可与单链DNA 5'-GCGTA-3'杂交的RNA是A．5'-CGCAU-3'B．5'-CGCUU-3'C．5'-UACGC-3'D．5'-AUCGC-3'E．5'-UAGGC-3'二、名词解释1. DNA的变性与复性(denaturation and renaturation of DNA)2．核酸分子杂交(hybridization of nucleic acids)3．增色效应与减色效应(hyperchromic effect and hypochromic effect)4．Tm三、问答题1．简述Watson-Crick DNA双螺旋结构模型的要点。
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.第二章核酸杂交技术（一）名词解释1．原位杂交2．核酸分子杂交技术3．探针4．反向点杂交5．缺口平移标记法6．随机引物标记法7．末端标记法8．Southern blot杂交9．荧光原位杂交10．菌落杂交（二）选择题【A型题】1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（）A G－C含量B A－T含量C A－G含量D A－C含量E T－G含量2．液相杂交是下列哪一种（）A Southem印迹杂交B Northem印迹杂交C Dot印迹杂交D Slot印迹杂交E RPA实验3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（）A 菌落杂交B Southern杂交C Northern杂交D 液相杂交E 原位杂交4．Southern杂交通常是指（）A DNA和RNA杂交B DNA和DNA杂交C RNA和RNA杂交D 蛋白质和蛋白质杂交E DNA和蛋白质杂交5．最容易降解的核酸探针是( )A cDNA探针B dsDNA探针C ssDNA探针D gDNA探针E: RNA6．探针基因芯片技术的本质就是（）A 核酸分子杂交技术B 蛋白质分子杂交技术.C 聚合酶链反应技术D 基因重组技术E 酶切技术7．DNA探针的长度通常为( )A 1000 ～2000个碱基B 500 ～1000个碱基C 400 ～500个碱基D 100 ～400个碱基E. <100个碱基8．寡核苷酸探针的最大的优势是（）A 杂化分子稳定B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列C 易标记D 易合成E 易分解9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( )A 甲醛B 乙醛C 氢氧化钠D 碳酸钠E 盐酸10．盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（）A 脆性大B 本底低C 共价键结合D 非共价键结合E 高结合力11．最常用的DNA探针标记方法是( )A 随机引物B 切口平移C 3′-末端标记D 5′-末端标记E PCR法12．为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（）A 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干燥过B 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过C 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过D 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过E 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过13．5′一末端的DNA探针标记主要依靠的酶是( )A T4多聚核苷酸激酶B 末端转移酶C AKP.D DNA polⅡE DNA pol14．血友病是一种（）A 染色体病B X连锁遗传病C 先天性代谢缺陷病D 先天畸形E 常染色体隠性遗传病15．预杂交中最常用的封闭剂是( )A Denhavdt's溶液B 5×TBEC 1×TBED 1×TAEE 1×TPE16．检测目标是RNA的技术是（）A Southern杂交B Western杂交C Northern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤17．检测靶序列是DNA的技术是（）A Southern杂交B Western杂交C Northern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤18．DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA 分子成为单链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针19．具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针20．一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针21．点/狭缝杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测22．放射自显影时反射光产生的潜影在低温下较稳定，最适温度是( )A -70℃B -30℃C -20℃D -10℃E 4℃23．Southern印迹杂交可以用于（）A 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B 检测的目标是RNAC 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测24．寡核苷酸探针的Tm简单计算公式为( )A Tm=4(G+C)+2(A+T)B Tm=2(G+C)+4(A+T)C Tm=6(G+C)+4(A+T)D Tm=2(G+C)+6(A+T)E Tm=6(G+C)+2(A+T)25．Northern印迹杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C 检测的目标是RNAD 用于基因定位分析E 阳性菌落的筛选2626．荧光原位杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 检测的目标是RNAC 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测27．以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为（）A 正常人B 杂合体患者C 纯合体患者D 携带者E 不能确定28．在pH为下述何种范围时，Tm值变化不明显( )A pH为3～5B pH为4～5C pH为5～6D pH为5～9E pH为8～1129．一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（）A 2-10bpB 17-50bpC 60-100bpD 100-200bpE 200-300bp30．变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是( )A 甲酰胺B 氢氧化钠C 浓盐酸D 稀盐酸E 甲醇31．下列有关cDNA探针的描述不正确的为（）A 利用mRNA通过RT-PCR在体外反转录可制备大量的cDNA探针B cDNA探针不包含内含子C cDNA探针不包含大量的高度重复序列D 由于cDNA探针自身所携带的poly（dT），有可能产生非特异性杂交的问题E cDNA探针合成方便，成为探针的重要来源32．一般来说核酸杂交的温度低于其Tm值的多少度进行( )A 15～25℃B 10～15℃C 5～10℃D 30～40℃E 40～50℃33．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其Tm值( )A 30～40℃B 20～30℃C 15～30℃D 10～15℃E 5℃34．一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应常在多少℃下进行( )A 90B 80C 75D 68E 5835．在含50%甲酰胺时，杂交反应在多少℃进行( )A 70B 65C 55D 42E 3536．杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加1%，则Tm值下降( )A 0.5℃B 1～1.5℃C 2～2.5℃D 3～3. S℃E 4～4.5℃37．RNA/RNA的杂交体的Tm值一般应增加( )A 1～5℃B 5～10℃C 10～15℃D 15～20℃E 20～25℃38．杂交的时间一般为Cot1/2的( )A l倍B 1～3倍C 3 ～5倍D 5～8倍E 10倍以上39．为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入( )A ssDNAB 1×SSCC 10×SSCD 5×TBECE 50×TAE40．随机引物法标记探针常用的A、G、C、T聚合体的数目是( )A 4个B 6个C 8个D 10个E 12个【X型题】41．下列哪些是影响DNA复性的因素( )A DNA浓度B DNA的分子量C 温度D 碱基组成E DNA的来源42．DNA探针的优点有（）A 制备方法简单B DNA探针易降解C DNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择D 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽E 单链，不存在竞争性的自身复性43．以下哪些方法可以用于探针的全程标记（）.A DNA加尾法B DNA切口平移标记法C 随机引物标记法D 末端标记E 尾端标记44．关于DNA变性的描述正确的是( )A 二级结构破B 一级结构破坏C 黏度降低D 生物活性丧失E 浮力密度增加45．以下哪些因素可以使DNA变性（）A 增加溶液的浓度B 加热C 改变溶液的pH值D 有机溶剂E 冷藏46．预杂交中，下列能起封闭作用的是( )A ssDNAB BSAC 小牛胸腺DNAD 脱脂奶粉E DTT47．变性的DNA会发生哪些理化性质的变化（）A 粘度下降B 沉降速度增加C 浮力下降D 紫外光吸收增加E 紫外光吸收减少48.下列物质适于非放射性探针标记的是( )A AKPB ACPC 生物素D 地高辛E 荧光素49．关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是( )A 特异性高B 可依赖氨基酸序列推测其序列C 分子量小D 可用于相似基因顺序差异性分析E 可用末端转移酶进行5′端标记50．通过哪些措施可以提高杂交反应的速度（）A 采用大片段探针B 少量的反应体积C 高反应温度D 不断的振摇E 大量的反应体积51．关于切口平移法下述正确的是( )A 可标记线性DNAB 可标记松散螺旋DNAC 可标记超螺旋DNAD 可标记存在缺口的双链DNAE 可标记随机引物52．以下哪些方法可以用于从凝胶上转移DNA（）A 毛细转移B 真空转移C 负压转移D 电泳转移E 冷冻转移53．关于随机引物法标记探针下述正确的是( )A 可标记单链DNAB 可标记双链RNAC 可标记单链RNAD 比活性高达108cpm／µg DNA以上E 常经过SephadexG-50纯化才可使用54．可以采用哪些方法来标记探针（）A 杂交标记法B 切口平移标记法C 5’-末端的标记D 3’-末端的标记E 化学法延长标记55．整个杂交反应主要以下哪些步骤组成（）A 预杂交B 杂交C 洗脱D 固定E 转移56．放射自显影可以被分为（）A 直接放射自显影B 氧化显影C 封闭显影D 间接放射自显影E 固定显影57．关于电转移下列描述正确的是( )A 快速、高效B 需要特殊设备C 缓冲液用TAE或TBED 可产生高温E 常用NC膜作为支持介质58．预杂交的主要目的是（）A 平衡滤膜B 封闭非特异性杂交的位置C 提高杂交信号的检测效率D 便于从滤膜上除去探针E 清除用于杂交反应检测的显色物质59.关于非放射性探针标记，下列描述正确的是( )A 对人体危害小B 需要特殊设备C 可长时间使用D 灵敏度不如放射性探针E 重新杂交新探比较容易60．对于改变DNA片段长度的突变，可以由于缺失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致限制性片段长度改变。
可以通过哪些方法检测（）A PCR扩增B RAPDC Southerm印迹杂交D Northern印迹杂交E 以上都不是61．重组DNA的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测DNA的杂交方法有哪些（）A 菌落印迹杂交B Northern印迹杂交C Western印迹杂交D 原位杂交E 斑点杂交62．关于RNA探针的描述下列正确的是( )A 可用于随机引物标记B 特异性高C 灵敏度高D 可用非同位素标记法标记E 不易降解63．下列哪些可以作为核酸探针使用（）A microRNAB 单链DNAC 寡核苷酸D mRNAE 双链RNA64．关于核酸探针的描述下列正确的是( )A 可以是DNAB 可以是RNAC 可用放射性标记D 可用非放射性标记E 必须是单链核酸（三）问答题1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围3．试述Northern blot杂交的操作步骤？4．什么是肽核酸？并简述其应用？5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用。