地黄检验标准操作规程

原药材检验标准操作规程
目的：建立一个中药饮片原药材检验标准操作程序，确保检验结果准确可靠。

适用范围：中药原药材。

责任人：质量保证部主任、质量控制部主任、化验员。

标准来源：《中华人民共和国药典》2010年版一部、《安徽省中药饮片炮制规范》。

内容：
1、性状：
取本品适量，放入白瓷盘中，用眼观察，可见以下性状特征：
鲜地黄呈纺锤形或条状，长8~24cm，直径2~9cm。

外皮薄，表面浅红黄色，具弯曲的纵皱纹、芽痕、横长皮孔样突起及不规则疤痕。

肉质，易断，断面皮部淡黄白色，可见橘红色油点，木部黄白色，导管呈放射状排列。

气微，味微甜，微苦。

生地黄多呈不规则的团块或长圆形，中间膨大，两端稍细，有的细小，长条状，稍扁而扭曲，长6~12cm，直径2~6cm。

表面棕黑色或棕灰色，极皱缩，具不规则的横曲纹。

体重，质较软而韧，不易折断，断面棕黑色或乌黑色，有光泽，具黏性。

气微，味微甜。

2、鉴别
主要使用仪器：电子分析天平、电子显微镜等。

2.1显微鉴别：
2.1.1 试液配制
2.1.1.1 水合氯醛试液：取水合氯醛50克，加水15毫升与甘油10毫升使溶解，即得。

2.1.1.2 甘油醋酸试液：取甘油、醋酸及水各等份混匀，即得。

2.1.1.3 稀甘油：取甘油33毫升，加水稀释至100毫升，再加樟脑一小块或液化苯酚1滴，即得。

2.1.2 供试品制备
2.1.2.1 取本品10g，研细后取少量粉末，置载玻片上，滴加水合氯醛搅拌均匀，置酒精灯上加热透化；加稀甘油数滴，搅拌均匀，分装2~3片，加盖玻片，即得。

2.1.2.2 取研细的粉末少量置载玻片上，加甘油醋酸试液，搅拌均匀，加盖玻片，即得。

2.1.2.3取研细后取少量粉末，置载玻片上，滴加水搅拌均匀，同时滴加少许稀甘油，加盖玻片，即得。

2.1.2.4横切面制备：取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手切片法切成10~20μm的薄片，选取平整的薄片置载玻片上，滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加稀甘油，盖上盖玻片。

2.1.3 置显微镜下观察
可见本品横切面：木栓细胞数列。

栓内层薄壁细胞排列疏松；散有较多分泌细胞，含橘黄色油滴；偶有石细胞。

韧皮部较宽，分泌细胞较少。

形成层成环。

木质部射线宽广；导管稀疏，排列成放射状。

生地黄粉末深棕色。

木栓细胞淡棕色。

薄壁细胞类圆形，内含类圆形细胞核。

分泌细胞形状与一般薄壁细胞相似，内含橙黄色或橙红色油滴状物。

具缘纹孔导管及网纹导管直径约至92μm。

2.2薄层鉴别
取本品粉末2g，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液浓缩至约5 ml，作为供试品溶液。

另取梓醇对照品加甲醇制成每1 ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（14：
6：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.3取本品粗粉1g，加80%甲醇50 ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5 ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次10 ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。

另取毛花蕊糖苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液5 μl、对照品溶液2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸（16:0.5:2）为展开剂，展开，取出，晾干。

再用0.1%的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸板，晾干。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3、检查
主要使用仪器：电子分析天平、电热恒温干燥箱、马弗炉、坩埚等。

3.1 水分
取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中厚度不超过5mm，精密称定，打开瓶盖在100~105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。

根据减失的重量，按下式计算即得。

W2－W3
供试品中的含水量（%）＝────────×100％
W2－W
W 称量瓶重（g）
W2 烘前称量瓶和样品重之和（g）
W3 烘后称量瓶和样品重之和（g）
本品含水量生地黄不得过15.0%。

3.2总灰分
取供试品适量，粉碎使能通过二号筛混合均匀后，取3～5g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500~600℃，使完全灰化并至恒重。

根据残渣重量，按下式计算即得。

W2－W1
供试品中总灰分的含量（％）＝────────×100％
W
W1坩埚重（g）
W 样品重（g）
W2炽灼残渣与坩埚重之和（g）
本品总灰分不得过8.0％。

3.3酸不溶灰分
取上项所得的灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。

滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。

根据残渣重量，按下式计算即得。

W2－W1
供试品中酸不溶灰分的含量（％）＝────────×100％
W
W1坩埚重（g）
W 样品重（g）
W2炽灼后残渣与坩埚重之和（g）
本品酸不溶灰分不得过3.0％。

3.4二氧化硫残留量
按中国药典2010 年版第一增补本附录二氧化硫残留量测定法测定，取本品细粉10g，精密称定，置于两颈圆底烧瓶中，加水300ml—400 ml（应加水至没过氮气导气管的下端），取6mol/L盐酸10ml加入带刻度的分液漏斗中连接分液漏斗，并导入氮气至瓶底，。

锥形瓶内加水125ml和淀粉指示液1 ml作为吸收液，置于磁力搅拌器上不断搅拌。

连接回流冷凝管，在冷凝管上部连接导气管，将导气管插入250ml锥形瓶底部，开通氮气，调节氮气流量为0.2L/min，打开带刻度的分液漏斗的活塞，使盐酸流入烧瓶。

加热圆底烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸约3分钟后开始用0.01mol/l, 的碘滴定液滴定，吸收液置于磁力搅拌器上不
断搅拌，至吸收液显蓝色或蓝紫色，持续30秒不消失，并将滴定的结果用空白校正，每1毫升的碘滴定液(0.01mol/l)相当于0.6406mg的二氧化硫。

本品二氧化硫量不得过150mg/kg。

4、浸出物
主要使用仪器：电子分析天平、电热恒温干燥箱、水浴锅、蒸发皿等。

取供试品适量，粉碎使能通过二号筛，并混合均匀后，取约4g，精密称定，置250～300ml的锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。

以干燥品按下式计算即得。

（W2－W1）×5
供试品中水溶性浸出物的含量（%）＝────────×100％
W×（1－W4）
W 样品重（g）
W1蒸发皿重（g）
W2残渣与蒸发皿重之和（g）
W4 供试品的含水量（%）。

本品浸出物不得少于65.0%。

5、含量测定
主要使用仪器：电子分析天平、高效液相色谱仪等。

5.1梓醇照高效液相色谱法（《中华人民共和国药典》附录ⅥD）测定。

5.1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1 ％磷酸溶液（1 ：99）为流动相；检测波长为210nm 。

理论板数按梓醇峰计算应不低于5000。

5.1.2对照品溶液的制备精密称取梓醇对照品适量，加流动相制成每1ml 含10μg的溶液，即得。

5.1.3供试品溶液的制备取本品（生地黄）切成约5mm的小块，经80 ℃减压干燥24 小时后，磨成粗粉取约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml ，称定重量，加热回流提取 1.5 小时，放冷，再称定重量，用甲
醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

精密量取续滤液10ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至10ml 量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.1.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl ，注入液相色谱仪，测定，即得。

生地黄以干燥品按下式计算即得含量：
A x×C R×V x
供试品的含量（％）＝────────——×100％
A R×G×（1－W）×106
A x 供试品的峰面积或峰高。

V x 供试品的体积(ml)
C R 对照品的浓度
A R 对照品的峰面积或峰高
G 供试品的重量(g)
W 供试品的含水量(%)
本品含梓醇（C 15 H 22 O 10）不得少于0.20％。

5.2毛蕊花糖苷
照高效液相色谱法(《中华人民共和国药典》附录Ⅵ D)测定。

5.2.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。

5.2.2对照品溶液制备取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加入流动相制成每1 ml含10 μg的溶液，即得。

5.2.3供试品溶液制备精密量取[梓醇含量测定项]下续滤液20 ml，减压回收溶剂近干，残渣用流动相溶解，转移至5ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.2.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

生地黄以干燥品按下式计算即得含量：
A x×C R×V x
供试品的含量（％）＝────────——×100％
A R×G×（1－W）×106
A x 供试品的峰面积或峰高。

V x 供试品的体积(ml)
C R 对照品的浓度
A R 对照品的峰面积或峰高
G 供试品的重量(g)
W 供试品的含水量(%)
本品含毛蕊花糖苷（C29H36O15）不得少于0.020%。