抗菌药物与抗生素类的分析

A
B
TLC法 HPLC法 IR法
与丙二酸反应
C
D
E
鉴别试验
（一） 与丙二酸的反应
叔胺化合物
[示例] 诺氟沙星乳膏的鉴别：
取含量测定项下的供试品溶液5ml，置水浴上 蒸干，残渣中加丙二酸约50mg与酸酐1ml，在 水浴中加热10分钟，溶液显红棕色。
精密称取本品适量（约相当于诺氟沙星4mg ），置分液漏斗中，加 氯仿15ml，振 摇后，用氯化钠饱和的0.1 ％氢氧化钠溶液25、20、20和10ml分次提取，提取液置 100ml 量瓶中，加0.1 ％氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液 ，精 密量取续滤液10ml，加0.4 ％氢氧化钠溶液制成每1ml 中含5μg的溶液，照分光光 度法（附录Ⅳ A），在273nm 的波长处测定吸收度；另精密称取诺氟沙星对照品
CO2H
R4
N
R5 R1
结构与性质
（三）旋光性
O
F
CO2H
﹡ N
N
N
O
氧氟沙星
O
F
CO2H
﹡ N
N
N
O
左氧氟沙星
结构与性质
（四）与金属离子络合
➢与钙、镁、铁、锌等离子形成螯合物 ➢不宜与牛奶等食物或药品同服 ➢长期服用会引起缺铁、缺钙等
三、鉴别试验
与丙二酸 呈色反应
UV法
与叔丙胺二基酸反团应
棕红-红紫-蓝
1
溶解性
R2 O
2
酸碱两性
R3 X
CO2H
R4
N
3
紫外吸收
R5 R1
4
旋光性
5
分解反应
6 与金属离子反应
结构与性质
（一）两性与溶解性 羧基 弱酸性 氮原子 弱碱性
R2 O R3 X
CO2H
R4
N
R5 R1
1、与酸、碱均能成盐 2、酸性或碱性溶液中溶解度↑
结构与性质
（二）紫外吸收
R2 O R3 X
鉴别试验
（二） 紫外可见分光光度法
[示例] 左氧氟沙星的UV鉴别： 取供试品适量，加0.1mol/L 盐酸溶液
溶解并稀释制成每1ml中约含5μg 的溶液， 在226nm与294nm的波长处有最大吸收， 在263nm的波长处有最小吸收。
注意鉴别的专属性
鉴别试验 (三)TLC法
• ChP2010对氧氟沙星、诺氟沙星和氟罗沙星用 TLC法鉴别。
N
R5 R1
6-氟-4-喹诺酮-3-羧酸
化学合成抗菌药，由于抗菌谱广、抗菌作用强， 使用安全，易于制造,得到迅速发展。
代表药物
第一代药物：
第二代药物：N C2H5
萘啶酸
NNN
HN
C2H5
哌嗪基
吡哌酸
代表药物
第三代药物：
O
F
CO2H
O
F
CO2H
N
N
HN
C2H5
诺氟沙星
鉴别试验 (四)HPLC法
• ChP2010规定：喹诺酮类药物含量测定项 下的供试品主峰应与相应对照品主峰的保 留时间一致。ChP2010收载的喹诺酮类药 物均采用高效液相色谱法进行鉴别。
鉴别试验 (五)IR法
• 盐酸环丙沙星的鉴别：供试品的红外光吸 收图谱应与对照的图谱一致。
四、特殊杂质检查 左氧氟沙星光学杂质(右氧氟沙星) 环丙沙星中有关物质的HPLC检查
F
N
N
HN
环丙沙星
O CO2H
N
N*
N
O
氧氟沙星
代表药物
第四代药物： O
O
F
CO2H
F
CO2H
N
N
N
N
HN
O
N
O
左氧氟沙星
加替沙星
NH2 O
F
CO2H
H N
H
F
O CO2H
N
N
HN
F
H
N
N
H
O
司帕沙星
莫西沙星
结构与性质
R2 O R3 X
CO2H
R4
N
R5 R1
二、喹诺酮类药物的理化性质
一般为类白色或淡黄色结晶
（三）高效液相色谱法
[示例] 盐酸洛美沙星含量的戊烷磺酸钠离子 对HPLC 测定
诺氟沙星乳膏含量的UV测定
含量测定
•
对照品溶液的制备 精密称取在105℃干燥至恒重的诺
氟沙星对照品适量,加氢氧化钠液（0.02mol/L）制备成每
1ml中含4μg的废液。
• 供试品溶液的制备精密称取适量（约相当于诺氟沙星 4mg）置分液漏斗中，加氯仿15ml，振摇使膏体溶解后， 用氢氧化钠液（0.02mol/L）25、20、20与10m（分次提 取（每次提取时加饱和氯化钠溶液1ml）收集提取液置 100ml量瓶中，用氢氧化钠液（0.02mol/L）稀释至刻度， 滤过，弃去初滤液，精精密量取续滤液10ml，置100ml量 瓶中，用氢氧化钠液（0.02mol/L）稀释至刻度，摇匀， 即得。 测定法 取对照品溶液与供试品溶液，照分光光度
专属性不强
含量测定
（一）非水溶液滴定法
注意事项 ： 1、严格控制醋酐加入量，并用水分测定法调 节至滴定液含水量为0.01%~0.2%。否则结果 明显偏低。 2、亦可在二甲基甲酰胺溶液中，以麝香草酚 蓝为指示剂用甲醇钠标准溶液滴定。
含量测定
（二）紫外分光光度法
[示例] 诺氟沙星乳膏含量的UV测定 ：
特殊杂质检查
[示例] 左氧氟沙星光学杂质(右氧氟沙星) 的HPLC检查：
配合交换手性流动相法（HPLC）
色谱条件
C18柱 硫酸铜-D-苯丙氨 酸-甲醇(82:18)
294nm
40℃
1.0mg/ml •供试品溶液 10μg/ml •对照品溶液
0.2mg/ml •氧氟沙星对照品
各20μl •进样
特殊杂质检查
氟罗沙星
【示例】取供试品与氟罗沙星对照品适量，加三氯甲
烷-甲醇(4:1)制成每1ml含1mg的溶液，分别作为供 试品溶液与对照品溶液；另取氟罗沙星对品与氧氟沙 星对照品适量，加三氯甲烷-甲醇(4:1)制成每1ml含氟 罗沙星1mg和氧氟沙星1mg的混合溶液，作为系统适 用性试验溶液。
吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅 胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓 氨溶液(5:6:2)为展开剂，展开，取出，晾 干，置紫外灯(254nm)下检视，系统适用 性试验应显示两个清晰分离的斑点，供试 品溶液所显主斑点的位置和荧光应与对照 品溶液主斑点的位置和荧光相同。
[示例] 环丙沙星中有关物质的HPLC检查：
五、含量测定
非水
溶液 • ChP2010吡哌酸的含 滴定 量采用非水溶液滴定法
紫 外
• ChP2010诺氟沙星
法
乳膏含量 测定采用UV
HPLC法
•盐酸洛美沙星 •左氧氟沙星
含量测定
（一）非水溶液滴定法
[示例] 吡哌酸含量的非水溶液滴定测定 ： 取供试品约0.2g，精密称定，加冰醋酸20ml 溶解后，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定 液(0.1mol/L)滴定至溶液显纯蓝色，并将滴定 的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液 (0.1mol/L)相当于30.33mg的C14H17N5O3 。
抗菌药物与抗生素类 药物的分析
教学内容
1 抗菌药物喹诺酮类 2 -内酰胺类 3 氨基糖苷类 4 四环素类
学习要求
掌握
各类药物结构、性质、质量分析特点
熟悉
有关物质的来源与检查方法
了解
体内样品分析与临床检测
第一节 喹诺酮类抗菌药物的分析
一、结构通式
R2 O
(F) R3
65
COOH
43
78
12
R4