实验五过氧化物酶酶活性的测定(精)
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实验五
过氧化物酶活性的
测定
——愈创木酚比色法
一、实验目的
熟悉测定过氧化物酶活性的常用方法及其测 定原理。
二、实验原理
RH2+ H2O2→2H2O + R 在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能 使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质 在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计 测量 470 nm 处的吸光度变化速率来测定过 氧化物酶活性。
三、实验材料
wenku.baidu.com
菠菜、油菜
四、仪器用品与试剂
分光光度计，研钵，移液管，吸管。 愈创木酚，30％过氧化氢，磷酸缓冲液，反 应混合液。
五、实验步骤
1、称取植物材料各0.5 g ，剪碎，放入研钵中，加入5ml磷酸缓冲液研磨 成匀浆，以 4000 rpm 离心 15 min ，上清液即为粗酶液。
2、取1ml酶液，用磷酸缓冲液定容至25ml。
3、取稀释液1mL，加入反应混合液3 mL，立即于470 nm 处测定吸光度 （OD）值，每隔1min读数一次。
试管号 1 2 3 反应混合物 3ml 3ml 3ml 磷酸缓冲液 1ml —— —— 酶液 —— 1ml（菠菜） 1ml（油菜） 1min —— 2min —— 3min —— 4min ——
六、实验结果
ΔA470×VT 过氧化物酶活性= W× t 式中： ΔA470 ——反应时间内OD变化值。 VT ——提取酶液总体积（mL）。 W ——植物鲜重（g）。 t ——反应时间（min）。
七、思考题
说明植物过氧化物酶在植物代谢中的意义。
过氧化物酶活性的
测定
——愈创木酚比色法
一、实验目的
熟悉测定过氧化物酶活性的常用方法及其测 定原理。
二、实验原理
RH2+ H2O2→2H2O + R 在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能 使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质 在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计 测量 470 nm 处的吸光度变化速率来测定过 氧化物酶活性。
三、实验材料
wenku.baidu.com
菠菜、油菜
四、仪器用品与试剂
分光光度计，研钵，移液管，吸管。 愈创木酚，30％过氧化氢，磷酸缓冲液，反 应混合液。
五、实验步骤
1、称取植物材料各0.5 g ，剪碎，放入研钵中，加入5ml磷酸缓冲液研磨 成匀浆，以 4000 rpm 离心 15 min ，上清液即为粗酶液。
2、取1ml酶液，用磷酸缓冲液定容至25ml。
3、取稀释液1mL，加入反应混合液3 mL，立即于470 nm 处测定吸光度 （OD）值，每隔1min读数一次。
试管号 1 2 3 反应混合物 3ml 3ml 3ml 磷酸缓冲液 1ml —— —— 酶液 —— 1ml（菠菜） 1ml（油菜） 1min —— 2min —— 3min —— 4min ——
六、实验结果
ΔA470×VT 过氧化物酶活性= W× t 式中： ΔA470 ——反应时间内OD变化值。 VT ——提取酶液总体积（mL）。 W ——植物鲜重（g）。 t ——反应时间（min）。
七、思考题
说明植物过氧化物酶在植物代谢中的意义。