实验二 杀菌剂生物活性测定

杀菌剂生物活性测定-生长速率法

一、实验原理

将不同浓度的药液与融化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以病菌生长速度的快慢来判定药剂毒力的大小。

病菌生长速率可用两种方法表示：①一定时间内菌落直径的大小；②菌落达到一定直径所需的时间。

二、实验目的

通过本试验要基本掌握杀菌剂室内（离体）活性的生物测定操作技术，掌握杀菌剂毒力回归曲线的制作及LC50的求解。

三、实验材料

1．供试药剂：70%甲基托布津 2．供试病原菌：苹果炭疽病菌

3．马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA）

配方：马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂粉10g（或琼脂条18g）；自来水10 00 mL；pH自然偏酸（5-6）

制作方法：选择质量较好的马铃薯，削皮，去芽眼，切成薄片，称取200g，加自来水1000mL，煮沸后改小火煮30min（直至马铃薯片呈半透明状），然后用4层沾湿纱布过滤，滤液用水补足至1000mL。再加入琼脂10g，用玻棒搅拌使其溶解（可适当加热）后加入葡萄糖20g，搅匀，再补足水1000 mL，最后分装于试管（用于接斜面）或三角瓶（250mL三角瓶盛约150mL培养基），用无菌封口膜封好灭菌备用。采用湿热灭菌法，121℃下保持30min。

4、实验器材：φ90cm的培养皿（72个），PDA培养基，1mL移液管（10个），酒精灯，10mL具塞刻度试管（10个），接种针（4个），超净工作台（2台）。

四、方法与步骤

1．菌种准备

实验室准备有菌源，在生测前一个星期请自行转接。对菌种的要求：病原菌应容易培养，菌丝生长快速、整齐，产生孢子缓慢；菌丝最好在培养基平面上呈平伏放射状生长（有利于结果的测量）。

在φ90cm的培养皿中，倒入约10-15mL PDA。从培养皿或者斜面培养基上取一块病菌，放在培养皿中间，于26℃下培养（3-7d）备用。

2．药液准备

将供试药剂70%甲基托布津用无菌水分别稀释成800、400、200、100、50、25mg/L 六个浓度的药液。800mg/L药液的配制：称取1g药剂，用无菌水溶解后，定容至875mL。称取20mg药剂，用无菌水溶解并定容至17.56mL。

3．打制菌饼