缓冲液pH值影响凝血酶时间测定的分析

合集下载

pH对酶活性的影响

缓冲液pH
5.0 5.8 6.2 6.6 6.8 7.0 7.4 8.0
2、由8个锥形瓶中，各取缓冲液 3ml，分别注入8支带有编号的试管中，随后于每个试管中，添加 0.5% 淀粉溶液 2 ml 和稀释 200 倍的唾液 2 ml 。 ( 增加 1 个和 5号内容相同的试管，作为检验淀粉的水解程度 )向各试管加入稀释唾液的时间间隔各为 1 分钟。将各试管内容物混匀，并依次置于 37℃恒温容物呈现的颜色，可以看出 pH对唾液淀粉酶活性的影响。指出其最适pH值。注意事项掌握第5号试管的水解程度是本实验成败的关键。
五、思考题
1.pH对酶活性有何影响？ 2.如何测定一个酶的最适pH?
二、实验用品
1、材料新鲜并稀释200倍的唾液 2、试剂（ 1 ） 0.5% 淀粉溶液 : 称取 0.5g 淀粉溶于 0.3%NaCl 溶液中。（2）0.2M磷酸氢二钠溶液（3）0.1M柠檬酸溶液（ 4 ）碘化钾 —碘液 : 将KI 20g 及碘 10g ，溶于100ml 蒸馏水中，使用前，稀释10倍。 3、仪器设备试管及试管架、 2ml和 5 ml吸量管、恒温水浴锅、滴定管、50 ml锥形瓶
三、方法和步骤
1、取8个50毫升锥形瓶，编号。按下表中的比例，用吸量管加入0.2M磷酸氢二钠溶液和0.1M柠檬酸溶液，制备 pH 5.0～8.0 的8种缓冲溶液。
表1.pH 5.0～8.0 的8种缓冲溶液的制备
锥形瓶号
1 2 3 4 5 6 7 8 0.2M磷酸氢二钠/ml 5.15 6.05 6.61 7.28 7.72 8.24 9.08 9.72 0.1M柠檬酸/ml 4.85 3.95 3.39 2.72 2.28 1.76 0.92 0.28

酶活性实验中pH值对酶活的影响研究

在实验中，可以通过调整pH值来研究酶的稳定性，以了解酶在不同环境下的活性表现。
实验验证
实验目的：探究不同pH值对酶稳定性的影响
实验材料：酶溶液、缓冲液、pH试纸等
实验步骤：设置不同pH值的缓冲液，将酶溶液分别加入各缓冲液中，观察并记录酶活性变化情况
实验结果：通过数据分析和图表展示不同pH值对酶稳定性的影响
结论
pH值对酶活性具有显著影响，不同酶的最适 pH值不同。
在最适pH值下，酶活性最高，偏离最适pH值会导致酶活性下降。
过高或过低的 pH值会破坏酶的构象，从而降低酶活性。
实验结果表明，在一定范围内，随着pH值的增加或降低，酶活性呈现先增加后降低的趋势。
pH值对酶结构的影响
添加标题
添加标题
添加标题
酶结构：pH值改变ห้องสมุดไป่ตู้分子结构，影响催化活性
反应产物：pH值影响产物生成，进一步影响酶促反应速率
实验验证
实验目的：研究不同pH值对酶促反应速率的影响
实验原理：酶活性受pH值影响，不同pH值条件下酶促反应速率不同
实验步骤：设置不同pH值条件，观察酶促反应速率的变化实验结果：记录不同pH值条件下酶促反应速率的数据，分析变化趋势
实验验证
实验目的：研究不同pH值对酶活性的影响实验材料：酶、缓冲液、底物等实验步骤：设置不同pH值，观察酶活性变化实验结果：记录不同pH值下酶活性的数据，绘制图表
结果分析
pH值对酶的应用价值影响分析
酶活性实验中pH值对酶活的影响研究结果
实验结果与预期结果的比较
实验结果对实际应用的指导意义
实验结果：通过实验数据，分析不同pH值下酶活性的变化，进一步探讨pH 值对酶结构的影响。

影响血凝的实验报告(3篇)

第1篇一、实验背景血凝实验是生物化学和医学研究中的一个重要实验，主要用于检测病毒、细菌等微生物的凝血活性。

血凝现象是指某些微生物能够直接或间接地引起红细胞发生凝集的现象。

这一实验在病原体检测、疫苗研发、疾病诊断等方面具有重要意义。

然而，血凝实验的结果受到多种因素的影响，如温度、pH值、离子强度、抗原抗体比例等。

本实验旨在探讨这些因素对血凝实验结果的影响，以期为血凝实验的优化提供理论依据。

二、实验目的1. 探讨温度对血凝实验结果的影响。

2. 分析pH值对血凝实验结果的影响。

3. 研究离子强度对血凝实验结果的影响。

4. 评估抗原抗体比例对血凝实验结果的影响。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 禽流感病毒抗原- 兔抗禽流感病毒抗体- 鸡红细胞- 生理盐水- 碳酸氢钠溶液- 磷酸缓冲溶液- 离子强度调节液- pH计- 恒温水浴箱- 移液器- 血凝板2. 实验仪器：- 电子天平- 离心机- 恒温振荡器- 显微镜四、实验方法1. 温度对血凝实验的影响：将抗原抗体混合液分别在4℃、20℃、37℃、50℃下孵育30分钟，观察红细胞凝集情况。

2. pH值对血凝实验的影响：将抗原抗体混合液分别在pH 4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0下孵育30分钟，观察红细胞凝集情况。

3. 离子强度对血凝实验的影响：将抗原抗体混合液分别在离子强度0.01mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L、0.5mol/L下孵育30分钟，观察红细胞凝集情况。

4. 抗原抗体比例对血凝实验的影响：将抗原抗体混合液按照不同比例（1:1、1:2、1:4、1:8、1:16）进行稀释，观察红细胞凝集情况。

五、实验结果与分析1. 温度对血凝实验的影响：结果表明，在20℃和37℃下，红细胞凝集现象最为明显；在4℃和50℃下，红细胞凝集现象不明显。

这说明温度对血凝实验结果有显著影响，最适宜的温度为20℃～37℃。

2. pH值对血凝实验的影响：结果表明，在pH 7.0下，红细胞凝集现象最为明显；在pH 4.0和9.0下，红细胞凝集现象不明显。

实验四__PH对酶活力的影响

2．测定OD405值
0号管先加入0.3moL NaOH 2.0mL之后再加酶液，各管终极反应并冷却后侧OD405，将结果按不同PH对应记录。
• 3.数据处理
• 以反应PH为横坐标，OD405为纵坐标，绘制PH酶活力曲线，求出酸性磷酸酯的最适 PH。
五．数据处理
• 绘出PH-酶活力曲线图，记录实验结果，计算酸性磷酸酯的最适PH。
•
在保持其他反应条件恒定，而在一系列变化的PH下测定酶活力，以PH为横坐标，OD405为纵坐标作图，可得到一条PH-酶活力曲线，从中球的最适PH。
三．实训试剂与器材
1试剂（1）酸性磷酸酯酶原酶液（2）酸性磷酸酯酶酶液将原酶液用水稀释10倍左右，使PH酶活力曲线中第六管OD405在0.6~0.7 之间。（3）2.4mmol/LNPP水溶液精确称取NPP 0.8908g用水溶解并定容至1000mL。（4）0.3mol/LNaOH （5）各PH缓冲液 0.05mol/L柠檬酸溶液 0.05mol/L柠檬酸三纳溶液。
实验四 PH对酶活力的影响
—最适的PH的测定
一．实验目的
• 1．了解PHห้องสมุดไป่ตู้酶活力影响的机理；
• 2. 掌握测定最适PH的基本原理；
• 3. 掌握最适PH的测定方法。
二．原理
PH对酶活力的影响极为显著。酶表现其最高活性时所处的PH即酶的最适 PH。通常各种酶只在一定PH范围内才表现它的活性。一种酶在不同PH下所表现出来的活性不同。
• 2. 器材 • 恒温水浴槽，可见光分光光度计，试管，刻度吸管。 • 按表1-2配制，并测得数据为准
四．操作步骤与要领
• 1.酶促反应
• • (1). 取2支试管，各加入稀释好的酶液6mL,在35℃ 恒温水浴槽中保温2min (2). 取11支试管编号，0号为空白。各加入 2.4mmol/L NPP 0.2mL, 相应加入不同PH缓冲液各 1.8mL, 各管再加入预保温过的酶1mL，立即摇均计时，15min后加入0.3mol/LNaOH 2.0mL终止反应。

酸碱度变化对实验室检测凝血4项指标结果的影响

部分凝血活酶时间（ＰＴ）凝血酶时间（）纤维蛋白原（Ｉ）量，进行比较分析，察各检测指标的变化。ＡＴ、ＴＴ、ＦＢ含并观
结果实验组的ＰＡＴＴ、明显高于对照组，随着酸碱强度的增高，响越明显，ｔ验分析差异具有统Ｔ、ＰＴＴ且影经检
计学意义（＜Ｏ０）而ＦＢ实验组比对照纽减低，异有统计学意义（尸．５；Ｉ差Ｐ＜Ｏ０）．５。结论酸碱度的变化对买验室检测ＰＡＴＴ及ＦＢ存在影响，临床分析时，得引起注意。Ｔ、ＰＴ、ＴＩ在值【键词】酸碱度；酸中毒；碱中毒；凝血功能；影响因素关
ｄｘｅｎｏｌｔｉｇ．ｅｈｏｓＰｒｔｏｍｂｎｔｍｅ（ｅｓｉｂｌｏｄｃｏｔｎＭｔｄｏｈｒｉｉＰＴ），ｃｉｔｄｐａｔａｔｒｍｂｏａｔｎｉｅ（ＡＰＴＴ），ｈｒｍｂｉａｔｖａｅｒｉｌｈｏｐｌｓｉｔｍｔｏｎｔｍｅ（ｉＴＴ）ａｄｆｂｉｏｇｎ（Ｂ）ｗｅｅｍｅｓｅｎｂｏｏｌｓｗｈｉｈｗｅｅｐｕｎｏｄｉｆｒｎｔｃｎｃｎｔａｔｏｃｄｏｌｎ．ｒｎｅＦＩｒａｕｒｄｉｌｄｐａｍｃｒｔｉｔｆｅｅｏｅｒｉｎａｉｒａ—
ｇｒｐａｄａｉｌｌｇｒｕｐ（ｏｕｎｃｄｏｒａｋａｉｏＰ％０．０５）ａｖｒｎｄｅｓｏ．ｎｄｅｅｙｉｘｗａｂｖｉｕｓｙｉｃｅｅｌｎｇｗｉｈｈｅｉｒａｉｇｏｅ — ｏｌｎｒａｓｄａｏｔｔｎｃｅｓｎｃｎｃｎ

血液凝固酶实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 了解血液凝固酶的作用及其在凝血过程中的重要性。

2. 掌握血液凝固酶的检测方法及原理。

3. 探讨影响血液凝固酶活性的因素。

二、实验原理血液凝固酶是一种丝氨酸蛋白酶，其主要作用是将纤维蛋白原转化为纤维蛋白，从而形成血凝块。

血液凝固酶的活性对凝血过程至关重要。

本实验通过检测血液凝固酶活性，了解其在凝血过程中的作用。

三、实验材料1. 家兔血液2. 血液凝固酶试剂盒3. 酶标仪4. 恒温水浴箱5. 移液器6. 试管7. 计时器四、实验方法1. 取家兔血液，按照试剂盒说明书进行分离，得到富血小板血浆（PRP）。

2. 将PRP加入含有凝血酶底物（纤维蛋白原）的试管中，加入一定量的凝血酶工作液。

3. 将试管放入37℃恒温水浴箱中，计时，观察血凝块形成时间。

4. 重复实验，分别测定不同条件下血液凝固酶活性。

五、实验步骤1. 标准曲线制备：将已知浓度的凝血酶工作液按照试剂盒说明书进行稀释，分别加入含有纤维蛋白原的试管中，按照上述方法测定血凝块形成时间，以凝血酶浓度为横坐标，血凝块形成时间为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血液凝固酶活性测定：按照试剂盒说明书进行操作，测定PRP中血液凝固酶活性。

3. 影响因素实验：分别改变温度、pH值、离子强度等条件，观察血液凝固酶活性的变化。

六、实验结果1. 标准曲线制备：标准曲线线性良好，相关系数R²>0.99。

2. 血液凝固酶活性测定：PRP中血液凝固酶活性为（XX±XX）min。

3. 影响因素实验：在37℃、pH值为7.4、离子强度为0.15mol/L条件下，血液凝固酶活性最高。

当温度低于30℃或高于40℃、pH值低于6.0或高于8.0、离子强度低于0.1mol/L或高于0.2mol/L时，血液凝固酶活性显著降低。

七、实验讨论1. 血液凝固酶在凝血过程中发挥着重要作用，其活性对凝血过程至关重要。

2. 本实验通过测定血液凝固酶活性，了解其在凝血过程中的作用，为临床诊断和治疗血栓性疾病提供依据。

影响凝血时间实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 了解凝血时间的基本概念和测定方法。

2. 探讨影响凝血时间的因素，如血液凝固因子、温度、表面粗糙度等。

3. 分析不同因素对凝血时间的影响程度。

二、实验原理凝血时间是指血液从流出血管到出现纤维蛋白细丝所需的时间，用以检查凝血过程的快慢。

本实验通过观察不同条件下血液凝固时间的变化，分析影响凝血时间的因素。

三、实验材料1. 实验动物：兔子2. 实验器材：采血针、75%酒精棉球、眼科弯头镊子、秒表、毛细玻管、针头、棉球、烧杯、冰块、温度计3. 实验试剂：生理盐水、肝素钠溶液四、实验方法1. 准备实验动物：取一只兔子，称重，用采血针对其耳缘静脉进行采血。

2. 将采出的血液分别注入毛细玻管中，每个玻管注入等量的血液。

3. 设置实验组：将毛细玻管分为三组，分别代表不同的实验条件。

A组：室温（25℃）条件下，将玻管放置在室温环境中。

B组：低温（5℃）条件下，将玻管放入装有冰块的烧杯中。

C组：高温（37℃）条件下，将玻管放入37℃水浴中。

4. 记录每组玻管血液凝固时间，即血液从流出玻管到出现纤维蛋白细丝所需的时间。

5. 将实验动物分为两组，分别注入生理盐水和肝素钠溶液。

6. 重复步骤2-5，观察药物对凝血时间的影响。

1. 室温条件下，血液凝固时间为（平均值±标准差）2.5±0.5分钟。

2. 低温条件下，血液凝固时间为（平均值±标准差）3.0±0.6分钟。

3. 高温条件下，血液凝固时间为（平均值±标准差）1.8±0.4分钟。

4. 注射生理盐水后，血液凝固时间为（平均值±标准差）2.6±0.5分钟。

5. 注射肝素钠溶液后，血液凝固时间为（平均值±标准差）5.2±0.8分钟。

六、实验分析1. 温度对凝血时间的影响：低温条件下，血液凝固时间延长；高温条件下，血液凝固时间缩短。

这是因为温度会影响血液凝固因子和酶的活性，从而影响血液凝固过程。

ph对酶的影响实验报告

ph对酶的影响实验报告pH对酶的影响实验报告引言：酶是生物体内一类催化剂，能够加速化学反应的进行。

而酶的活性受到许多因素的影响，其中pH是一个重要的因素。

本实验旨在探究不同pH值对酶活性的影响，并通过实验结果分析酶在不同环境条件下的适应性和稳定性。

材料与方法：1. 实验材料：酶溶液、底物溶液、不同pH值的缓冲液、试管、试管架、移液管、计时器等。

2. 实验步骤：a. 准备不同pH值的缓冲液，包括酸性、中性和碱性缓冲液。

b. 将试管标记为不同的pH值，并向每个试管中加入相应的缓冲液。

c. 向每个试管中加入相同体积的酶溶液。

d. 在实验开始前，将试管预先放置在恒温水浴中，使温度保持恒定。

e. 在试管中加入相同体积的底物溶液。

f. 开始计时器，并观察反应的进行。

g. 当反应时间达到一定时长后，停止反应，并记录下反应时间。

h. 重复以上步骤，以获得可靠的实验数据。

结果与讨论：通过本实验我们观察到，不同pH值对酶活性有着显著的影响。

在酸性环境中，酶的活性明显降低，反应速率较慢。

而在中性和碱性环境中，酶的活性较高，反应速率较快。

这一现象可以通过酶的结构和功能来解释。

酶通常是由氨基酸组成的蛋白质，而酶的活性部位对于pH值的敏感性较高。

在酸性环境中，氢离子的浓度增加，会与酶分子中的氨基酸残基发生反应，引起酶的构象改变，从而降低酶的活性。

而在碱性环境中，氢离子浓度较低，酶的活性得到保持或提高。

此外，本实验还观察到了酶的最适pH值。

最适pH值是指酶在特定pH值下表现出最高活性的情况。

我们可以通过实验数据绘制出酶活性与pH值的曲线，从曲线中找到最适pH值的位置。

在实际应用中，了解酶的最适pH值对于酶催化反应的优化至关重要。

例如，某些工业生产中需要酶的参与，通过调整反应环境的pH值，可以提高酶的活性，从而提高反应的效率。

结论：本实验通过观察不同pH值对酶活性的影响，发现酶在酸性环境中活性较低，而在中性和碱性环境中活性较高。

凝血酶时间(TT)测定标准操作规程

凝血酶时间（TT）测定标准操作规程1.检验原理：待测血浆加入适量的凝血酶，使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，在光学浊度仪器上测定凝固所需的时间，即为待测血浆的TT。

2.试剂主要组成成分R1:TT试剂：牛凝血酶、稳定剂；R2：TT复溶液：缓冲液。

3.样本要求3.1.采集静脉血，立即按9份血：1份抗凝剂比例与0.109mol/L枸橼酸钠充分混合均匀。

室温3000rpm离心12分钟，上层淡黄色液体为待检的乏血小板血浆。

3.2血浆室温放置，宜在2小时内检测。

3.3血浆若不能及时检测，用塑料吸管分离，-20℃可保存2周。

测定前37℃快速融化，轻微混匀后立即检测。

4.检验方法：全自动血凝分析仪测定（详见雷杜RAC-1830标准操作规程）5.参考区间：11—17秒6.检验结果的解释：报告TT秒数（S），检验结果与各实验室的参考值范围相关。

7.检验方法的局限性7.1凝血过程中从因子激活到纤维蛋白激活到纤维蛋白形成的一系列反应。

因此，检验结果可能受到治疗药物（干扰物）、检验操作、检验系统等因素的影响，应考虑这些因素。

7.2试剂被污染，或者样品杯、吸管等被凝血试剂污染，会导致凝血异常，需严格控制。

8产品性能指标8.1重复性：用质控血浆重复测试所得结果的变异系数（CV），应不超过5.0%。

8.2瓶间差：用质控血浆测试，瓶间差应不超过6.0%。

9临床意义凝血酶时间延长包括以下几种情况：（1）低（无）纤维蛋白原血症，纤维蛋白原浓度通常为0.9g/L或更低。

（2）血中存在肝素或类似肝素的抗凝物质，如SLE、肝病、肾病等。

（3）在纤溶状态下，纤维蛋白原的功能降低。

（4）存在异常纤维蛋白原。

（5）如果患者和正常质控血浆混合液的凝血酶时间值更接近于患者的血浆凝血酶时间值，并且如果该患者在抽血测定前6h内并没有摄入肝素，则该患者血浆中很可能存在异常纤维蛋白原或纤维蛋白降解产物。

异常纤维蛋白血症和巨球蛋白血症，有造成凝血酶时间缩短的可能。

实验报告生物体内pH值的变化对酶活性影响的动力学分析

实验报告生物体内pH值的变化对酶活性影响的动力学分析实验报告：生物体内pH值的变化对酶活性影响的动力学分析摘要：本实验旨在研究生物体内pH值的变化对酶活性的影响，并进行动力学分析。

为了达到这一目的，我们选择了酪蛋白酶作为模型酶，通过改变溶液的pH值，观察酪蛋白酶的活性变化，并利用Michaelis-Menten动力学方程对数据进行分析。

实验结果显示，酪蛋白酶的活性受到pH值的显著影响，其最适pH值为7.5。

同时，我们还发现随着pH值的升高或降低，酪蛋白酶的反应速率均有所降低。

这些研究结果对于深入了解生物体内酶活性的调控机制具有重要意义。

引言：酶是生物体内一类具有催化作用的蛋白质，其活性受到多个因素的调控，其中包括温度、pH值等。

本实验着重研究生物体内pH值变化对酶活性的影响。

pH值可影响酶的空间构象、电荷状态以及催化底物的效率，从而对其活性产生显著影响。

通过对酪蛋白酶的活性随pH值变化的监测，可以更好地理解生物体内酶活性的调控机制。

材料与方法：1. 实验材料：- 酪蛋白酶溶液- pH缓冲液（不同pH值）- 酪氨酸底物溶液- 乙醇- 总蛋白定量试剂盒- 分光光度计2. 实验步骤：1) 酪蛋白酶活性测定：- 准备一系列pH缓冲液溶液，范围从4到10。

- 将相同质量的酪蛋白酶溶液和酪氨酸底物分别加入不同的pH缓冲液中，浓度保持一致。

- 定时温控恒温槽中进行酪蛋白酶的反应，时间为30分钟。

- 反应结束后，用乙醇停止反应，并通过紫外分光光度计检测反应产物的浓度。

2) 总蛋白定量：- 采用总蛋白定量试剂盒测量酪蛋白酶的蛋白质浓度。

3) 数据处理与分析：- 根据测定的酪蛋白酶活性和总蛋白质浓度计算酶的特异活性。

- 利用Michaelis-Menten动力学方程对数据进行拟合分析，计算最大反应速率（Vmax）和米氏常数（Km）。

结果与讨论：实验结果显示，酪蛋白酶的活性随着pH值的变化而变化。

在pH7.5时，其活性最高，而在酸性和碱性环境下，酶的活性明显降低。

探究pH值对酶活性的影响实验的认识

探究pH值对酶活性的影响实验的认识（2012年大纲卷高考试题）某同学为了探究pH对人唾液淀粉酶活性的影响，设计了如下实验步骤：①在A、B、C、D、E 5支试管中分别加入pH5.0、6.0、7.0、8.0、9.0的适宜浓度缓冲液5ml，再分别加入质量分数为1%的淀粉液1ml。

②各试管中分别加入适当浓度的唾液稀释液1ml，摇匀。

③将5支试管放入70℃恒温水浴中，保温时间相同且合适。

④取出各试管，分别加入斐林试剂2ml，摇匀。

⑤观察各试管溶液的颜色，通过颜色深浅判断唾液淀粉酶作用的最适pH。

上述实验步骤中有2处错误，请更正并说明更正的理由（不考虑试剂的浓度和加入量、pH梯度以及实验重复次数），以便实验能得到正确的预期结果。

（1）。

（2）。

【答案】（1）③中70℃应该为37℃。

因为人唾液淀粉酶作用的最适温度为37℃（2）在观察各试管中溶液的颜色之前应将各试管放在沸水浴中一段时间。

因为在高温条件下斐林试剂（或本尼迪特试剂）与还原糖反应显色。

分析：很多资料认为这个试题有一个严重错误，就是不能用人唾液淀粉酶探究pH对活性的影响，应该用过氧化氢酶。

其实本人认为是可以用淀粉酶，但必须是唾液淀粉酶，不能用α-淀粉酶。

检测的试剂也有要求，就是用斐林试剂（或本尼迪特试剂）,不能用碘液。

探究pH值对酶活性的影响实验，浙科版和苏教版都是用过氧化氢酶探究pH对酶活性的影响，人教版在课本第84页用括号注明：建议用淀粉酶探究温度对酶活性的影响，用过氧化氢酶探究pH对酶活性的影响。

错误方案1:以唾液淀粉酶为实验材料，选择pH值为2的5%HCl、pH值为7的蒸馏水、pH值为14的5%NaOH作为实验的pH研究范围，用碘液检验淀粉是否存在，证明酶的活性。

以期望得出唾液淀粉酶的“最适pH”和唾液淀粉酶的活性随pH的变化而变化的规律。

分析：此实验用碘液检验淀粉是否存在，证明酶的活性是不可以的。

因为在碱性条件下，碘分子可与NaOH发生反应，生成NaI和NaIO，I2 + 2NaOH＝NaI + NaIO +H2O。

凝血酶工艺优化及稳定性的实验研究

凝血酶工艺优化及稳定性的实验研究发表时间：2012-04-16T14:14:27.483Z 来源：《中外健康文摘》2012年第6期供稿作者：赵丽蓉[导读] 热稳定性将猪凝血酶溶液分别置于不同温度下，保温不同的时间，分别测定凝血酶的活力。

赵丽蓉（黑龙江省乌苏里江制药有限公司宝清分公司 156600）【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）6-0132-02【摘要】目的进行凝血酶工艺优化和稳定性的实验研究。

方法选用Ca2+和凝血活酶联合激活系统激活、DEAE Sphadex A-50吸附法等技术提取出粗凝血酶，采用离子交换层析法，从粗凝血酶中纯化得到凝血酶纯品，对两者纯化效果进行比较。

结果优化后的工艺比原生产工艺有明显提高。

结论优化工艺应把生产凝血酶时温度控制在25℃，pH=７，从猪血浆的吸附到凝血酶半成品，应在４ｈ内完成，这样才能获得较高纯度的凝血酶。

【关键词】凝血酶猪血浆工艺优化血浆中凝血酶是近年来开发的一种新型止血剂。

生产工艺多以新鲜猪血为原料，采用离心、Ca2+单一因子激活系统激活等电点沉淀法或724树脂吸附法等技术提取出粗凝血酶，采用亲和层析法，从粗凝血酶中纯化得到凝血酶纯品。

但这种生产工艺提取收率低，工艺复杂，产品纯度不高等。

故有必要进行凝血酶工艺优化。

1 实验方法1.1 猪血浆的制备取新鲜猪血加入3.8%的柠檬酸钠作为抗凝剂，在7000r/min下４℃离心20min，收集上清液，即得猪血浆，备用。

凝血酶原的制备：比较3条制备路线。

等电点沉淀法：猪血浆0.5kg，以９倍的去离子水稀释，用2mol/L醋酸调pH5.1，4℃静止过夜，收集沉淀，该沉淀用缓冲液溶解，去除沉淀，即获得凝血酶原粗样品液。

724树脂吸附法：猪血浆0.5kg，将处理好的724树脂适量加入，搅拌45min，静止30min。

抽滤得到吸附剂，然后用1.5mol的氯化钠溶液300mL常温浸泡60min，收集滤液。

ph对酶促反应的影响实验结果分析

ph对酶促反应的影响实验结果分析
近几十年来，人们对PH值对酶促反应的影响开始关注。

实验结果表明，当酸
碱剂的PH值不同时，会发生质的变化。

而且，随着酸碱剂pH值的变化，酶促反应的速度也有所变化。

这说明，不同的酸碱剂pH值对决定酶促反应的速度具有重要
的影响，因此，研究利用不同PH值对酶促反应的影响，对于研究酶机制有很重要
的意义。

首先，在实验研究中，我们可以研究不同PH值下酶促反应的速率。

实验结果
可以得出，一般来说，酶促反应的活性会受到PH值的环境影响。

一般而言，受PH
值影响容易较大的酶可以有效地发挥其酶促活性。

其次，随着PH值的升高，酶的
活性会有所增强，但当PH值升至极端高位时，酶的活性也会受到一定的影响。

在
实验中，也可以使用不同酸碱度的酶族实现酶促反应，了解不同pH值下不同酶族
的影响及其优势和劣势。

此外，不同pH值还可以调节酶机制选择特定的反应物，从而使酶促反应变得
更加有效率。

同时，pH还可以影响底物的接受能力，高pH可以提高酶的活性，低pH可以降低酶的活性，不同pH值也可以控制酶族催化反应动力学，进一步提高CH 值对酶促反应的影响。

总之，实验表明，PH值对酶促反应的影响非常重要。

它可以影响酶的活性，
改变反应分子的活性，调节底物的活性，改变反应动力学，从而有效提高反应效率，促进酶促反应。

OVB对FBG结果的影响

开瓶后的缓冲液放置时间对纤维蛋白原测定的影响摘要：目的：找出开瓶后缓冲液在仪器内放置的有效时间。

方法：模拟在CA-1500全自动血凝仪上缓冲液的环境条件，将缓冲液敞开放置不同时间，用Von clauss法分别测量10份纤维蛋白原（FIB）高值血浆；用PH计测各瓶缓冲液的PH值。

结果：1、随时间的延长，缓冲液PH值呈下降趋势；2、与刚开瓶的缓冲液所测得的FIB结果比较，放置24h 时结果差异显著（0.01<P<0.05）；放置36h及更长时间的缓冲液所测得的FIB结果有非常显著的统计学差异（P<0.01）。

结论：随缓冲液放置时间的延长，FIB检测结果下降明显，开瓶后的缓冲液超过24h应该及时更换。

[关键词]纤维蛋白原；缓冲液；冯.克劳斯法；PH值冯.克劳斯（Von clauss）法是美国国家临床检验标准委员会（NCCL）推荐的FIB常规测定方法，我国卫生部临检中心亦于1999年公布该法为FIB常规测定方法，在我国有了较广泛的应用。

在进行室内质控的过程中，发现未及时更换的试剂使FIB的检测结果有较明显的下降趋势，经实验证实其中缓冲液对结果的影响比较大，现报道如下：1 材料与方法1.1 仪器日本Sysmex公司CA-1500全自动血凝仪；KL-009（Ⅰ）型PH计。

1.2 试剂凝血酶试剂Thrombin Reagent；缓冲液试剂Owren’s Veromal Buffer，PH值7.35±0.1；清洗液Clean Ⅰ；均购自德灵公司的原装进口试剂。

1.3 方法（1）、标本来源取常规检测的FIB较高血浆10份，标本均用109mmol/L枸橼酸钠（含0.2ml）抗凝真空采血管取1.8ml静脉血，3000rpm/min离心10min，4小时内测定完成。

（2）、模拟在CA-1500全自动血凝仪上缓冲液的环境条件（室温24～28℃），把同一批号的缓冲液7瓶打开瓶盖在室温分别放置0h、6h、12h、24h、36h、48h、60h，用新配制的凝血酶试剂和以上放置了不同时间的缓冲液分别对10份血浆测定FIB；（3）、用PH计测试每一瓶缓冲液的PH值；（4）、以0h测得的FIB结果对其它6瓶缓冲液的结果进行配对t检验统计处理。

对酶活性的影响实验报告

对酶活性的影响实验报告一、实验目的探究不同因素（如温度、pH 值、底物浓度、酶浓度等）对酶活性的影响，深入理解酶的作用机制和特性。

二、实验原理酶是一种具有生物催化作用的蛋白质或 RNA，其活性受到多种环境因素的影响。

在适宜的条件下，酶能够高效地催化化学反应；而当条件发生改变时，酶的活性可能会受到抑制或增强。

通过测定在不同条件下酶催化反应的速率，可以评估酶活性的变化。

三、实验材料与设备1、实验材料过氧化氢酶（从肝脏中提取）过氧化氢溶液（3%）磷酸盐缓冲液（pH 50、pH 70、pH 90）淀粉溶液唾液淀粉酶碘液2、实验设备恒温水浴锅移液器比色皿分光光度计计时器四、实验步骤1、温度对酶活性的影响取 5 支洁净的试管，分别标记为 1、2、3、4、5。

向每支试管中加入 2 mL 3%的过氧化氢溶液。

将 1 号试管置于 0℃的冰水中，2 号试管置于室温（约 25℃），3号试管置于37℃的恒温水浴锅中，4 号试管置于50℃的恒温水浴锅中，5 号试管置于 70℃的恒温水浴锅中，保温 5 分钟。

向各试管中迅速加入 1 滴过氧化氢酶溶液，立即开始计时，并观察产生气泡的情况。

每隔 30 秒记录一次各试管中产生气泡的数量，共记录 3 分钟。

2、 pH 值对酶活性的影响取 3 支洁净的试管，分别标记为 6、7、8。

向每支试管中加入 2 mL 3%的过氧化氢溶液。

向 6 号试管中加入 2 mL pH 50 的磷酸盐缓冲液，向 7 号试管中加入 2 mL pH 70 的磷酸盐缓冲液，向 8 号试管中加入 2 mL pH 90 的磷酸盐缓冲液。

向各试管中迅速加入 1 滴过氧化氢酶溶液，立即开始计时，并观察产生气泡的情况。

每隔 30 秒记录一次各试管中产生气泡的数量，共记录 3 分钟。

3、底物浓度对酶活性的影响取 5 支洁净的试管，分别标记为 9、10、11、12、13。

向 9 号试管中加入 1 mL 3%的过氧化氢溶液和 1 mL 蒸馏水，向 10 号试管中加入 15 mL 3%的过氧化氢溶液和 05 mL 蒸馏水，向 11 号试管中加入 2 mL 3%的过氧化氢溶液，向 12 号试管中加入 25 mL 3%的过氧化氢溶液和 05 mL 蒸馏水，向 13 号试管中加入 3 mL 3%的过氧化氢溶液。

不同pH值对酶活性的影响实验

不同pH值对酶活性的影响实验实验目的：本实验旨在研究不同pH值对酶活性的影响，深入探究酶催化作用在不同酸碱条件下的特性变化，为了解酶在不同环境条件下的催化效果提供科学依据。

实验器材：1. 酶溶液：选取一种常用酶溶液，如淀粉酶溶液。

2. 缓冲液：准备一系列不同pH值的缓冲液，如pH 4, 5, 6, 7, 8, 9的磷酸盐缓冲液。

3. 淀粉溶液：准备适量的淀粉溶液。

4. 加热设备：如电热板或炉子。

5. 容器：用于混合反应物的试管或烧杯。

6. 显色剂：如碘液或苏丹红溶液。

7. 其他常规实验器材：试管夹、移液器、计时器等。

实验步骤：1. 在一个试管或烧杯中取适量的酶溶液。

2. 添加相同体积的淀粉溶液，使其充分混合。

3. 在实验过程中，先将加热设备预热至适宜温度（通常为酶的最适温度）。

4. 使用移液器向试管中加入预先调好pH值的缓冲液，确保每个试管的缓冲液体积相同。

5. 在每个试管中加入相同体积的混合溶液（酶溶液和淀粉溶液），立即启动计时器计时。

6. 在设定的反应时间结束后，立即将试管放入预热的加热设备中加热一段时间（如1分钟），停止酶的活动。

7. 取出试管，添加适量的显色剂，观察溶液颜色的变化。

颜色的变深表示淀粉的降解程度。

8. 重复以上步骤，进行其他pH值的实验。

实验结果：根据实验观察和颜色变化的深浅，记录每个pH值下的淀粉降解程度。

以颜色的深浅为指标，可以定量分析不同pH值下酶活性的高低。

实验数据处理及分析：将颜色的变化程度与每个pH值对应，得到实验数据。

可以绘制曲线或制作柱状图来表示不同pH值下的酶催化作用效果。

结论：通过本实验可以得出不同pH值对酶活性的影响。

在一定范围内，酶的活性受pH值的变化而变化。

通常情况下，酶会在最适pH值的条件下发挥最佳催化效果，而在偏离最适pH值的条件下，酶的催化效果将逐渐降低。

本实验结果可用于生物化学、食品工程等领域的研究，对于更深入了解酶的特性和催化机制具有重要意义。