抗旱水稻种子转基因成分检测技术研究

抗旱水稻种子转基因成分检测技术研究

邓汉超1，2 刘玉琛3 邓国标3，4 刘 晋1，2 陈惠芳1，2 杨启鹏1，2 周向阳1，2（1深圳市农业科技促进中心，深圳 518040；2农业部农作物种子质量监督检验测试中心（深圳），广东深圳 518040；

3深圳市作物分子育种研究院，深圳 518107；4广东省龙门县卫生和计划生育局，惠州 516800）

摘要：利用组织研磨仪快速处理水稻种子样品，采用高通量的磁珠纯化系统提取样本DNA，提取的核酸通过紫外吸收检测其纯度，应用普通PCR检测方法和实时荧光PCR方法对水稻内源基因SPS、靶基因ATAF1进行检测。结果表明，普通PCR方法和实时荧光PCR方法均表现快速、准确、特异性高的特点。

关键词：普通PCR；实时荧光PCR；转基因

转基因作物的大量种植和推广同时对转基因生物的检测技术提出要求，发达国家的转基因及相关检测技术远远超过发展中的国家。美国、加拿大等国已有近百种转基因食品上市，并且他们的目标是把大量的转基因食品出口到发展中国家[1-3]。在这些正式获批进行生产和贸易的产品之外，更有数目众多的品种处于试验阶段或未经正常手续进入市场，我国已经加入WTO，正在面临着转基因产品贸易和安全监测的挑战。同时随着商品化转基因生物的种类不断增加，转基因生物本身的安全性以及它们对人类健康和生态环境的潜在威胁成为国际社会和广大民众广泛关注的热点问题之一[4-6]；包括我国在内的越来越多的国家制定并实施了转基因食品的强制标识制度。因此，转基因产品的科学管理和应用需要得到转基因产品及其成分检测技术的支持。追踪转基因生物研发动态，研发相适应的检测技术，制定相应的检测标准，是转基因生物安全监管的重要措施。本文以转抗旱基因ATAF1水稻种子为材料，初步建立外源基因的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料 本实验室获得的转ATAF1基因水稻70株，种子保存于本实验室种子低温低湿储藏库中备用。

主要仪器和试剂：MP组织研磨仪（24样）、Themo磁珠核酸自动提取纯化仪（96样）、Omega核

基金项目：转基因新品种培育重大专项（2009ZX08001-023B）；深圳市技术创新项目（CXZZ20120614165508810）

通信作者：刘晋酸提取试剂盒、Premix Ex Taq酶、Neno1000紫外分光光度计、BIO-RAD iCycler PCR扩增仪、ABI7500实时荧光PCR扩增仪、RAININ edp3 plus排枪（12通道）等。

1.2 方法

1.2.1 样品处理 水稻种子取5粒，置于2mL离心管中，放入1粒陶瓷珠，加入500μL Buffer SLX

Minus裂解液（Omega 核酸提取试剂盒）或500μL 2% CTAB 裂解液，浸泡数小时后采用MP组织研磨仪设置震荡速度4.0 M/s、震荡时间30s，震荡粉碎5 6次，备用。

1.2.2DNA的提取 磁珠自动提取法：粉碎样品在65℃水浴1h，其间上下颠倒2 3次。12000r/min离心10min。取上清200μL于深孔96平板、800μL Buffer PHB于深孔96平板、800深孔96平板、100深孔96平板、一个Tip按照表1依次加入Omega 核酸提取试剂盒中的试剂。启动Themo磁珠核酸自动提取纯化系统，根据系统提示依次放入上述试剂板。当DNA提取完毕，取出5号板，将DNA保存在-20℃下备用。

表1 磁珠核酸自动提取纯化系统物品

板类型板序号内容物试剂量

A1磁珠/Lysis Buffer3/样品20μL/500μL/200μL A2Buffer PHB800μL

A3SPM Buffer800μL

A4SPM Buffer800μL

B5Elution Buffer100μL

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