订书肽的合成与应用_高帅_郭叶_李海燕_方葛敏

ＰＲＯＧＲＥＳＳＩＮＣＨＥＭＩＳＴＲＹＤＯＩ：１０ ７５３６／ＰＣ１３０７７１ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｒｏｇｃｈｅｍ．ａｃ．ｃｎ㊀㊀ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４，２６（１）：１００ １０９订书肽的合成与应用高㊀帅１，２㊀郭㊀叶２㊀李海燕２㊀方葛敏１，２∗（１．中国科学院合肥物质研究院强磁场科学中心合肥２３００３１；２．清华大学化学系㊀北京１０００８４）摘㊀要㊀许多重要的生物过程的调节都通过蛋白⁃蛋白相互作用来实现的㊂一般，蛋白⁃蛋白作用的界面太大而不能被小分子药物选择性靶向，因此小分子药物很难高效特异性地阻断该类型的相互作用㊂此外，由于蛋白质药物很难透过细胞膜，它们也不能直接靶向细胞内的相互作用㊂由于当前药物分子的限制，发展下一代既能进入细胞膜又能特异性靶向蛋白⁃蛋白相互作用的分子成为新的研究热点㊂为了克服上述药物分子的缺点，Ｖｅｒｄｉｎｅ等发展了一种全碳支架的具有α⁃螺旋结构的新型多肽，这种多肽被称作订书肽（ｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ）㊂相比于天然多肽，订书肽有更高的酶解稳定性并且可以进入细胞膜，从而提高了它的药理性能㊂本文将从订书肽的化学合成㊁生物物理性能的表征和其在癌症和ＨＩＶ治疗㊁信号通路的调节和肿瘤激活蛋白的抑制方面的生物应用详细介绍订书肽的最新进展㊂关键词㊀订书肽㊀蛋白⁃蛋白相互作用㊀多肽药物中图分类号：Ｏ６２９ ７㊀文献标识码：Ａ㊀文章编号：１００５⁃２８１Ｘ（２０１４）０１⁃０１００⁃１０收稿：２０１３年７月，收修改稿：２０１３年９月，网络出版：２０１３年１２月２５日㊀∗∗Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ㊀ｅ⁃ｍａｉｌ：ｆｇｍｓｘｙ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍＣｈｅｍｉｃａｌＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＳｔａｐｌｅｄＰｅｐｔｉｄｅｓＧａｏＳｈｕａｉ１，２㊀ＧｕｏＹｅ２㊀ＬｉＨａｉｙａｎ２㊀ＦａｎｇＧｅｍｉｎ１，２∗（１．ＨｉｇｈＭａｇｎｅｔｉｃＦｉｅｌｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｆｅｉ２３００３１，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＴｓｉｎｇｈｕａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｖａｒｉｅｔｙｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓｄｅｐｅｎｄｓｏｎｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎ⁃ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ，ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎ⁃ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｕｒｆａｃｅｉｓｔｏｏｌａｒｇｅｔｏｂｅｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｔａｒｇｅｔｅｄｂｙｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｄｒｕｇｓ．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｄｒｕｇｃａｎｄｉｄａｔｅｓｃａｎｎｏｔｂｅｕｓｅｄｄｉｒｅｃｔｌｙｆｏｒｔｈｉｓｐｕｒｐｏｓｅｂｅｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｉｒｌｏｗｃｅｌｌｕｌａｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ．Ｄｕｅｔｏｔｈｅｓｅｐｒｏｂｌｅｍｓ，ｉｔｉｓｉｍｐｅｒａｔｉｖｅｔｏｄｅｖｅｌｏｐｔｈｅｎｅｘｔ⁃ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｒｓｅｎａｌｓｔｈａｔｃｏｍｂｉｎｅｔｈｅｍｅｍｂｒａｎｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｓｍａｌｌｏｒｇａｎｉｃｍｏｌｅｃｕｌｅｓｗｉｔｈｔｈｅｂｒｏａｄｔａｒｇｅｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｐｒｏｔｅｉｎ⁃ｂａｓｅｄｄｒｕｇｓ．Ｔｏｏｖｅｒｃｏｍｅｔｈｉｓｃｈａｌｌｅｎｇｅ，ｅｔａｌ．ｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｏｖｅｌｋｉｎｄｏｆｐｅｐｔｉｄｅｓｔｈａｔｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎａｔｅｄａｓｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ⁃ｓｔａｐｌｅｄα⁃ｈｅｌｉｃａｌｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｔｈｅｓｙｎｔｈｅｔｉｃｍｉｎｉ⁃ｐｒｏｔｅｉｎｃａｎｓｔｒｏｎｇｌｙｃｏｎｆｉｎｅｉｔｓｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｔｏα⁃ｈｅｌｉｘｂｙｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇａｎａｌｌ⁃ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｃｈｅｍｉｃａｌｂｒａｃｅ．Ｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｒｕｎｓｔａｐｌｅｄｃｏｕｎｔｅｒｐａｒｔ，ｉｓｇｒｅａｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｅｎｈａｎｃｉｎｇｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｃｅｌｌｕｌａｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｗｅｗｉｌｌｒｅｖｉｅｗｔｈｅｒｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｏｆｔｈｅｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎｒｅｓｐｅｃｔｏｆｔｈｅｉｒｃｈｅｍｉｃａｌｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｍｉｎｔｈｅｃａｎｃｅｒ⁃，ａｎｄＨＩＶ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙａｎｄｔｈｅｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒ⁃ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ；ｐｒｏｔｅｉｎ⁃ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ；ｐｅｐｔｉｄｅｄｒｕｇｓＣｏｎｔｅｎｔｓ１㊀Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ２㊀Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ２ １㊀Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓｉｔｅｓｏｆα⁃ｍｅｔｈｙｌ，α⁃ａｌｋｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅ２ ２㊀Ｃｈｅｍｉｃａｌｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ网络出版时间：2014-01-02 16:28网络出版地址：/kcms/doi/10.7536/PC130771.html化学进展，２０１４，２６（１）：１００ １０９㊃１０１㊀㊃２ ３㊀Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｎｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ２ ４㊀Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｌｏｎｇ⁃ｃｈａｉｎｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ３㊀Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ３ １㊀Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ３ ２㊀Ｈｉｇｈｂｉｎｄｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙｔｏｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｓ３ ３㊀Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅｓ３ ４㊀Ｈｉｇｈｃｅｌｌｕｌａｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ３ ５㊀Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｔｓｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ４㊀Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ４ １㊀Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｃａｎｃｅｒ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ４ ２㊀ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎＨＩＶ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ４ ３㊀Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙ４ ４㊀Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｈｅｐａｔｉｔｉｓ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ５㊀Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎａｎｄｏｕｔｌｏｏｋ１㊀引言蛋白⁃蛋白相互作用（ＰＰＩ）在许多生物过程中扮演着重要的角色，例如病毒的自组装，细胞的增殖㊁生长㊁分化及程序性死亡㊂人类疾病中许多潜在的治疗靶标主要是蛋白⁃蛋白相互作用㊂由于大部分ＰＰＩ面比较大而且是不连续的平面，小分子试剂很难与其特异性紧密结合㊂目前，大约有１０％的胞外疾病可以利用蛋白类药物来治疗㊂蛋白药物最大的缺点是不能透过细胞膜，因而无法靶向于胞内靶标㊂基于小分子和蛋白类药物的局限，发展能穿过细胞膜的多肽㊁蛋白质和核酸逐渐成为药物研究的前沿问题㊂最近生物大分子化学合成方面取得了一些新的进展，为研发这类药物提供了有力的技术工具［１ ２１］㊂最近研究表明，具有α螺旋结构和富含正电荷的多肽［２２ ２４］可以穿过细胞膜㊂因此，越来越多的研究开始关注含有α螺旋结构的多肽的合成与应用㊂然而，多肽一旦从母体上分离就不能保持原有的二级结构，由于构象的不稳定，多肽与作用蛋白的结合能力非常弱，而普通的线性多肽不能透过细胞膜，且易被蛋白酶水解［２５］㊂基于此，人们不断尝试发展稳定α螺旋结构的方法，例如，利用二硫键或分子内酰胺键作为支架㊂然而，这些支架在生理环境下均不能稳定存在㊂２０００年，Ｖｅｒｄｉｎｅ等发展了一种用碳碳键作为支架来稳定多肽α螺旋结构的方法［２６］㊂由该方法得到的多肽称为订书肽（ｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ）㊂订书肽有着更高的α螺旋程度，与靶标的结合能力增加５ ５０００倍㊂此外，订书肽能透过细胞膜，难被蛋白酶水解，在生物体内的半衰期较长㊂本文将主要从合成方法㊁理化性质和生物学功能及前景展望来４个方面介绍订书肽㊂表１为三种药物分子优缺点比较㊂表１㊀三大类型药物分子的比较Ｔａｂｌｅ１㊀Ｔｈｒｅｅｋｉｎｄｓｏｆｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓｍｏｌｅｃｕｌｅｓｒｅｓｅａｒｃｈｏｂｊｅｃｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ（Ｄａ）ａｄｖａｎｔａｇｅｓｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｓｍａｌｌｏｒｇａｎｉｃｍｏｌｅｃｕｌｅｓ＜１０００Ｈｉｇｈｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｈｉｇｈｃｅｌｌｕｌａｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙａｎｄｌｏｗｃｏｓｔｏｆｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓｅｖｅｒｅｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓ，ｉｎａｂｉｌｉｔｙｔｏｄｉｓｒｕｐｔｐｒｏｔｅｉｎ⁃ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，ａｎｄｄｅｍａｎｄｆｏｒｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓ＞１００００ｌｏｗｔｏｘｉｃｉｔｙ，ａｂｉｌｉｔｙｔｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒｆａｃｅｓｈａｖｉｎｇｌａｒｇｅｓｈａｌｌｏｗｓｕｒｆａｃｅｓｐｏｏｒｉｎｖｉｖｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｕｎａｂｌｅｔｏｔｒａｖｅｒｓｅｃｅｌｌｍｅｍｂｒａｎｅｓ，ｈｉｇｈｃｏｓｔｏｆｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ１０００ ５０００ｌｏｗｔｏｘｉｃｉｔｙ，ｈｉｇｈｓｔａｂｉｌｉｔｙｉｎｖｉｖｏ，ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅｔｏｔａｒｇｅｔｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｆｅｗｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｉｒｓａｆｅｔｙａｎｄｅｆｆｉｃａｃｙｉｎｈｕｍａｎ２㊀订书肽的合成与修饰订书肽的合成策略如下，首先在固相合成多肽链过程中引入两个α⁃甲基，α⁃烯基非天然氨基酸，然后通过烯烃复分解反应（ＲＣＭ）环化，得到订书肽［２７］㊂α⁃甲基，α⁃烯基非天然氨基酸因含有手性中心，需采用手性基团诱导来合成㊂以Ｓ⁃型α⁃甲基，α⁃烯基非天然氨基酸的合成为例，我们简单介绍合成该类物质的一般方法，见图１㊂首先，在三乙胺催化下，手性辅基试剂（１Ｒ，２Ｓ）⁃２⁃胺基⁃１，２⁃二苯乙醇与２⁃溴丙酸乙酯发生亲核取代反应，并采用（Ｂｏｃ）２Ｏ保护自由胺基；接下来，在对甲基苯磺酸的催化下，环状的含有手性辅基的丙氨酸前体得以高效生成，在碱性催化剂和低温下，烯基基团高效立体选择性地连接到氨基酸的α⁃位㊂最后，在氨基锂条件下脱去手性辅基，并采用Ｆｍｏｃ基团保护α⁃胺基㊂２ １㊀非天然氨基酸插入位点的选择为了使订书肽与靶点蛋白质的相互作用不受外加非天然结构的影响，选择非天然氨基酸的插入位点至关重要㊂通过对蛋白质的核磁或晶体数据的分析，可以选择与靶向蛋白相互用的α螺旋多肽片段㊃１０２㊀㊃ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４，２６（１）：１００ １０９图１㊀非天然氨基酸插入位点及合成［２７，２９，３０］Ｆｉｇ．１㊀Ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓｉｔｅｓａｎｄｓｙｎｔｈｅｔｉｃｒｏｕｔｅｏｆα⁃ｍｅｔｈｙｌ，α⁃ａｌｋｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅ［２７，２９，３０］为研究对象，同时选择不参与靶向蛋白作用的氨基酸残基作为非天然氨基酸插入的潜在位点㊂如果缺乏上述数据，也可以首先合成一系列锁定多肽，然后通过活性筛选的方法选出最优结构的订书肽㊂通常，一对用于ＲＣＭ反应的非天然氨基酸的合成流程［２８，２９］及插入在多肽序列的ｉ，ｉ＋３位，ｉ，ｉ＋４位或者ｉ，ｉ＋７位的位点，如图１㊂一般而言，选择合成的构象锁定α螺旋多肽的长度不超过２０个氨基酸［３０］㊂在设计多肽过程中，电荷也是影响订书肽功能的重要因素，正电荷有利于多肽跨膜，而负电荷不利于跨膜㊂研究发现，将正负电荷分别放在肽链的碳末端和氮末端可以产生额外的氢键结合，该结构能中和订书肽产生的大的偶极作用㊂２ ２㊀订书肽的合成通常采用Ｆｍｏｃ⁃固相多肽合成方法制备订书肽㊂普通氨基酸的侧链由对酸不稳定的保护基保护，α⁃氨基由被对碱不稳定的Ｆｍｏｃ保护基保护㊂两个用于构象锁定的氨基酸均为α⁃甲基，α⁃烯基非天然氨基酸㊂这两个非天然氨基酸间隔一般为两个㊁三个或者六个氨基酸，其中ｉ，ｉ＋３⁃位和ｉ，ｉ＋４⁃位稳定一个α⁃螺旋，ｉ，ｉ＋７⁃位稳定两个α⁃螺旋，如图１㊂可以根据碳端官能团来选择树脂，如需碳端保留羧基，可以选择２⁃ｃｌ⁃ｔｒｔ树脂或Ｗａｎｇ树脂；如需碳端为酰胺，可以选择ＲｉｎｋＡｍｉｄｅ⁃ＡＭ树脂㊂多肽合成完成后，采用钌作为催化剂进行烯烃复分解反应关环，形成碳碳键支架㊂根据后续实验需要，订书肽可以在固相上进行进一步的修饰㊂最后，将目标多肽从树脂上切割下来进行纯化，图２为ｉ，ｉ＋４⁃位订书肽合成的流程示意图㊂图２㊀固相合成订书肽［２５］Ｆｉｇ．２㊀Ｓｏｌｉｄ⁃ｐｈａｓｅｐｅｐｔｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ［２５］２ ３㊀订书肽的修饰在从树脂上切割下订书肽之前，将多肽氮端去化学进展，２０１４，２６（１）：１００ １０９㊃１０３㊀㊃保护，裸露出α⁃氨基，继而可以在该位置进行不同的修饰㊂如果不需要氨基的电荷，可以进行乙酰化修饰；如果需要其他修饰，可以进一步进行修饰㊂订书肽的修饰大致可以分为两类：荧光素类标签（主要是荧光素）和亲和类标签（主要是生物素）㊂图３为主要的订书肽的修饰过程㊂订书肽氮端修饰荧光素可以用来研究多肽的细胞吸收和生物物理性质；氮端修饰生物素可用来研究多肽的生物物理性质和评价生物体内的靶向反应㊂当修饰氮端的时候，必须考虑修饰的位置是否会影响订书肽与靶向蛋白的结合能力㊂图３㊀订书肽修饰基团［４１］Ｆｉｇ．３㊀Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｎｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ［４１］此外，也可以对订书肽的碳端进行修饰㊂２０１１年，Ｍｕｐｐｉｄｉ等发展了在订书肽的碳端修饰精氨酸的方法［３１］㊂实验结果表明，碳端精氨酸修饰不仅增加了订书肽的α螺旋程度，而且增强了订书肽的细胞入膜性，并且无明显的细胞毒性㊂２ ４㊀长链订书肽的合成一般认为，由３０个以上氨基酸残基组成的订书肽的合成不能通过固相合成一次高效合成，而需要多肽片段连接反应实现㊂２０１３年，Ｐｅｎｔｅｌｕｔｅ课题组，用 自然化学连接反应 （ｎａｔｉｖｅｃｈｅｍｉｃａｌｌｉｇａｔｉｏｎ，ＮＣＬ）的方法合成了长链非经典的订书肽（其侧链为半胱氨酸与六氟化苯或十氟联苯反应关环，而非Ｖｅｒｄｉｎｅ型订书肽）从而使订书肽的得到更广泛的应用［１９］㊂他们采用的连接方法为Ｋｅｎｔ发明的ＮＣＬ［１］，它涉及氮端半胱氨酸肽段与碳端硫酯肽段㊂ＮＣＬ在蛋白质合成与半合成中取得了广泛的应用，但是碳端硫酯的Ｆｍｏｃ化学合成还存在挑战㊂近期的一个改进方法是我们发展的利用碳端酰肼代替硫酯进行多肽酰肼连接技术［６］，该方法基本原理是在弱酸条件下多肽酰肼被亚硝酸氧化为酰基叠氮，并在芳基硫醇存在下原位转化为硫酯后与Ｎ端Ｃｙｓ肽实现化学选择性连接反应㊂与硫酯相比，碳端酰肼肽可以直接采用Ｆｍｏｃ法固相合成高效得到，且易于自动化㊂此外，酰肼肽可以实现生物表达，使酰肼法应用范围更加广泛㊂３㊀订书肽生物物理性质的表征订书肽的结构和生物活性可以通过多种生物物理的实验进行表征，例如，圆二色光谱［３２］㊁二维核磁共振谱㊁Ｘ射线单晶衍射㊁荧光偏振和表面等离子体共振等㊂我们从以下５个方面来阐述该方面的进展㊂３ １㊀订书肽结构的表征圆二色光谱㊁核磁共振谱和Ｘ射线单晶衍射均可以用来表征订书肽的二级结构㊂圆二色光谱可用来表征订书肽的α螺旋的稳定程度㊂在多肽中主要的光活性基团是肽链骨架中的肽键㊁氨基酸的芳香残基和二硫键㊂如果多肽含有不规则的二级结构，那么其圆二色光谱在１９５ｎｍ处将有一个强的吸收峰；如果多肽含有α螺旋结构，那么其圆二色光谱在２０８ｎｍ和２２２ｎｍ处均有吸收峰㊂已知多肽的浓度，可以根据圆二色光谱在２２２ｎｍ的吸收信号来定量订书肽的α螺旋程度㊂通过对订书肽在不同温度下的圆二色光谱的测试，可以直观研究多肽构象的热稳定性㊂Ｂａｅｋ等用圆二色谱表征了ＳＡＨ⁃ｐ５３⁃８的结构，发现了支架结构能稳定多肽的α螺旋［３３］㊂核磁共振谱和Ｘ射线单晶衍射可以直接模拟出订书肽的实际结构，并可以确定订书肽与靶蛋白的结合位点，为进一步的订书肽的设计提供了结构基础㊂Ｐｈｉｌｌｉｐｓ等设计了靶向雌激素受体的订书肽［３４］㊂通过对一系列锁定多肽的核磁与单晶衍射结构的表征，他们发现订书肽的碳碳支架会影响其与疏水蛋白表面的相互作用㊂３ ２㊀订书肽与靶蛋白结合能力表征荧光偏振与表面等离子共振技术可以用于多肽与靶向蛋白结合能力的测定，并且能定量测量订书肽结合常数［３５ ３８］㊂偏振荧光的强弱程度与荧光分子的大小呈正相关，与其受激发时转动速度呈反相关㊂在固相多肽合成的过程中将一个荧光基团引入订书肽，如异硫㊃１０４㊀㊃ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４，２６（１）：１００ １０９氰酸荧光素㊂在溶液中，靶向蛋白与订书肽结合，可以产生荧光偏振，荧光偏振程度与多肽绑定在靶向蛋白的数量有关㊂通过测量偏振荧光，可以定量测定多肽与靶向蛋白的结合常数㊂另一种改进的荧光偏振方法可以测定不含荧光基团的订书肽阻断蛋白⁃蛋白相互作用的能力㊂在这种改进的荧光偏振中，含有荧光修饰的线性天然多肽与不含荧光修饰的订书肽混合在一起㊂通过对含有荧光标记的天然多肽荧光偏振降低程度的测量，来测量订书肽阻断天然多肽与蛋白靶向的结合能力㊂２００９年，Ｂａｕｔｉｓｔａ等［３９］用荧光偏振的方法，分析了构象锁定的β多肽与ｈＤＭ２之间的结合能力㊂他们发现构象锁定的β多肽与靶蛋白的结合能力与引入构象锁定支架的位置相关，有些位置可以明显增强结合能力，有些位置却会明显降低结合能力㊂在表面等离子体共振实验中，首先将生物素修饰的订书肽固定在生物传感芯片上，然后将其暴露于靶向蛋白中㊂这样订书肽与靶向蛋白之间的相互作用可以被直接测定，并且可以得到结合的动力学过程㊂表面等离子体实验也可以用于测定订书肽抑制蛋白复合物形成的程度㊂将蛋白复合物固定在生物传感芯片上，然后将其暴露在订书肽中，这样可以测定订书肽对多蛋白复合物的结合与解离动力学影响㊂３ ３㊀订书肽酶解稳定性的表征从人工合成多肽到药物，多肽的酶解稳定性成为一个重要的指标，也是一个主要的障碍㊂由于蛋白水解酶水解酰胺键需要多肽有一个舒展的构象，因此用支架来锁定多肽的α螺旋结构可以有效地抑制多肽被蛋白水解酶水解㊂为了评估多肽的体外酶解稳定性，需要基于订书肽的序列选择蛋白水解酶㊂胰蛋白酶可以识别精氨酸（Ａｒｇ）和赖氨酸（Ｌｙｓ），糜蛋白酶主要识别苯丙氨酸（Ｐｈｅ）㊁酪氨酸（Ｔｙｒ）㊁亮氨酸（Ｌｅｕ）和甲硫氨酸（Ｍｅｔ）㊂Ｂｉｒｄ等［４０］表征了Ｂｃｌ⁃２域的订书肽，并进行了酶解稳定性的测定㊂他们通过对比荧光素标记的订书肽与荧光素标记的线性肽在胰蛋白酶存在下不同时间段的荧光强度变化来确定订书肽的酶解稳定性㊂对订书肽进行体内或体外的血清稳定性测定可以更加明确地表明多肽的酶解稳定性㊂３ ４㊀订书肽入膜性的表征流式细胞计和共聚焦荧光显微镜这两种方法可以利用荧光标记订书肽来研究多肽的细胞通透性［４１］㊂单个含有荧光分子的细胞可以便捷地被流式细胞计筛选出，这样可以精确了解订书肽的入膜效果㊂但是，流式细胞计数不能观察订书肽在细胞中的具体位置㊂由于黏附在细胞表面的订书肽会产生入膜的错误信息，在分析订书肽入膜性时，必须用胰蛋白酶除去吸附细胞表面的订书肽㊂共聚焦荧光显微镜法研究的细胞数量明显要少于流式细胞计所研究的数目㊂需要指出的是，共聚焦荧光显微镜法可以研究订书肽的入膜的更多细节，如订书肽在细胞内的具体位置，但是共聚焦显微镜法只能定性的判断多肽是否能进入细胞㊂最近发展了一种可以定量测定多肽入膜性的荧光显微镜法，也可以直接定量比较多肽的入膜性差异，但不能提供可视化信息㊂Ｍｕｐｐｉｄｉ等［３１］采用流式细胞计和共聚焦荧光显微镜研究了精氨酸修饰的订书肽的入膜过程㊂通过流式细胞计的方法，他们发现精氨酸修饰的订书肽可以明显提高多肽的入膜性；利用共聚焦显微镜法，他们进一步的确认了该结果，并提出精氨酸修饰的订书肽的入膜可能是通过内吞机理实现的㊂３ ５㊀订书肽生物活性的表征理论计算结构表明订书肽中支架的局部稳定作用比α螺旋程度对生物活性的影响可能更大，测定订书肽的生物活性也成为必不可少的一步㊂体外免疫共沉淀可以测定订书肽在细胞环境下与靶蛋白的结合能力［４２ ４５］㊂订书肽的免疫共沉淀过程可以简述为用抗体将目标蛋白特异性沉淀下来，同时与目标蛋白结合的订书肽也一起被沉淀㊂常用两种订书肽进行该实验，一种是利用荧光素标记的订书肽，另一种是利用生物素标记的订书肽㊂具体步骤主要为，在细胞裂解液中加入靶蛋白的特异性抗体，孵育一段时间后，加入与抗体特异性结合的琼脂糖上的蛋白Ａ或蛋白Ｇ㊂当订书肽与靶蛋白结合时，订书肽也同时被沉降；沉淀复合物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳又被分开；最后采用免疫印迹实验进一步证实构象锁定肽与靶蛋白结合㊂订书肽是否具有潜在的医学应用是通过活体内其功能的测量来评估的㊂将订书肽注入到活的患病动物体内，观察和测定动物体内各项生理指标以确定订书肽的生物活性㊂４　订书肽的生物医学功能与应用到目前为止，国际上有许多课题组都在从事与订书肽相关的研究，并取得了一定的成果㊂订书肽在治疗癌症㊁抑制艾滋病和丙型肝炎以及调节信号通路等方面的应用均有报道㊂下面主要将从这几个化学进展，２０１４，２６（１）：１００ １０９㊃１０５㊀㊃方面简单介绍一下订书肽的医学应用㊂４ １㊀订书肽在癌病防治中的应用４ １ １㊀调控ｐ５３基因ｐ５３基因是一种抑癌基因，是细胞生长周期中的负调节因子，与ＤＮＡ的修复㊁细胞分化㊁细胞周期的调控等生命过程有关㊂ｐ５３的缺失和突变及相关蛋白酶体的降解会导致肿瘤细胞的产生㊂修复ｐ５３的活性可以更加有效地治疗癌症㊂Ｅ３泛素连接酶ｈＤＭ２直接结合在ｐ５３蛋白的反式激活域，靶向ｐ５３蛋白进行酶解如图４ａ所示㊂ｈＤＭ４／ｈＤＭｘ可以抑制ｐ５３的活性㊂治疗癌症的一个有效的方法是寻找一种可以抑制ｈＤＭ２／ｈＤＭｘ与ｐ５３结合的活性分子㊂基于ｐ５３序列而设计的多肽类抑制剂可以高效地结合ｈＤＭ２；但线性的多肽不能进入细胞膜，且酶稳定性差㊂基于此，Ｂｅｒｎａｌ等［３５］利用碳碳支架设计合成构象锁定肽，明显提高了多肽的入膜性和酶解稳定性，订书肽的结构如图４ｂ与４ｃ所示㊂含有１５个氨基酸的构象锁定可以抑制ｐ５３蛋白与ｈＤＭ２蛋白之间的相互作用㊂订书肽的α螺旋结构会插入到ｈＤＭ２表面的疏水凹槽中从而抑制ｐ５３与之结合㊂该订书肽中的三个氨基酸对于结合ｈＤＭ２是必不可少的，分别是１９位苯丙氨酸㊁２３位色氨酸和２６位亮氨酸㊂ＳＡＨ⁃ｐ５３疗法通过构象锁定肽ＳＡＨ靶向转录过程激活ｐ５３达到抑制肿瘤㊂该策略的设计思路如下，首先，设计与ｈＤＭ２相互作用的订书肽，碳碳支架的位置尽量避开与ｈＤＭ２结合的重要部位；其次，利用烯烃复分解反应合成了４条ｉ，ｉ＋７位订书肽（ＳＡＨ⁃ｐ５３ｓ１ ４）；最后，对订书肽ＳＡＨ⁃ｐ５３ｓ１ ４进行生物物理实验表征㊂圆二色谱表明多肽的α螺旋程度都有所增加；荧光偏振实验发现订书肽的亲和力与天然多肽相近㊂细胞实验发现ＳＡＨ⁃ｐ５３ｓ１ ４均难以跨过细胞膜㊂在生理ｐＨ条件下，订书肽ＳＡＨ⁃ｐ５３ｓ１ ４由于带两个负电荷而难以通过细胞膜㊂他们将天冬氨酸与谷氨酸分别替换为天冬酰胺与谷氨酰胺，发展了第二代多肽化合物ＳＡＨ⁃ｐ５３ｓ５ ８㊂细胞实验表明ＳＡＨ⁃ｐ５３８与ｈＤＭ２有着高的亲和性并可以跨过细胞膜㊂Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹实验进一步证实ＳＡＭ⁃ｐ５３８能恢复ｐ５３的正常水平㊂该研究表明订书肽可以用于阻断蛋白⁃蛋白相互作用，在癌症的治疗方面有着广阔的前景㊂２０１０年，Ｂｅｒｎａｌ等［４６］对ＳＡＨ⁃ｐ５３８调控ｐ５３进行了进一步的研究㊂ｈＤＭｘ的结构分析发现ｈＤＭｘ抑制ｐ５３的反式激活的α螺旋与ｈＤＭ２的模式极为相似㊂因而，他们测试ＳＡＨ⁃ｐ５３８对ｈＤＭｘ的靶向抑制作用，并且研究了ｈＤＭｘ被抑制后的体内ｐ５３功能变化，实验结果表明，ＳＡＨ⁃ｐ５３８可以有效地抑制ｈＤＭｘ㊂ＳＡＨ⁃ｐ５３８既可以靶向ｈＤＭ２也可以靶向ｈＤＭｘ，并且ＳＡＨ⁃ｐ５３８对于ｈＤＭｘ靶向能力比对ｈＤＭ２的靶向能力高２５倍㊂ＳＡＨ⁃ｐ５３８靶向细胞里的ｈＤＭｘ，阻断ｐ５３⁃ｈＤＭＸ复合物的形成，从而激活ｐ５３的肿瘤抑制通路㊂因此，对ｈＤＭ２和ｈＤＭｘ双靶向的抑制剂可以更好地用于治疗癌症㊂ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅＫｄ（ｎＭ）ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙＷＴＡｃ⁃ＬＳＱＥＴＦＳＤＬＷＫＬＬＰＥＮ⁃ＮＨ２４１０ʃ１９ ＳＡＨ⁃ｐ５３⁃１Ａｃ⁃ＬＳＱＥＴＦＳＤ∗ＷＫＬＬＰＥ∗⁃ＨＮ２１００ʃ８ ＳＡＨ⁃ｐ５３⁃２Ａｃ⁃ＳＱＥ∗ＦＳＤＬＷＫ∗ＬＰＥＮ⁃ＮＨ２４００ʃ５０ＳＡＨ⁃ｐ５３⁃３Ａｃ⁃ＬＳＱ∗ＴＦＳＤＬＷ∗ＬＬＰＥＮ⁃ＮＨ２１２００ʃ８９ ＳＡＨ⁃ｐ５３⁃４Ａｃ⁃ＬＳＱＥＴＦ∗ＤＬＷＫＬＬ∗ＥＮ⁃ＮＨ２０．９２ʃ０．１１ ＳＡＨ⁃ｐ５３⁃５Ａｃ⁃ＬＳＱＥＴＦ∗ＮＬＷＫＬＬ∗ＱＮ⁃ＮＨ２０．８０ʃ０．０５＋ＳＡＨ⁃ｐ５３⁃６Ａｃ⁃ＬＳＱＱＴＦ∗ＮＬＷＲＬＬ∗ＱＮ⁃ＮＨ２５６ʃ１１＋ＳＡＨ⁃ｐ５３⁃７Ａｃ⁃ＱＳＱＱＴＦ∗ＮＬＷＫＬＬ∗ＱＮ⁃ＮＨ２５０ʃ１０＋ＳＡＨ⁃ｐ５３⁃８Ａｃ⁃ＱＳＱＱＴＦ∗ＮＬＷＲＬＬ∗ＱＮ⁃ＮＨ２５５ʃ１１＋图４㊀ＳＡＨ⁃ｐ５３ｓ的序列［３５］Ｆｉｇ．４㊀ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓＳＡＨ⁃ｐ５３ｓ［３５］４ １ ２㊀对于Ｂｃｌ⁃２蛋白家族的调控Ｂ淋巴细胞瘤⁃２基因（Ｂ⁃ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ⁃２）简称Ｂｃｌ⁃２，是调控细胞凋亡的重要基因之一㊂Ｂｃｌ⁃２基因是一种原癌基因，在抑制细胞凋亡过程中发挥重要的作用㊂Ｂｃｌ⁃２家族蛋白是由４个保守的Ｂｃｌ⁃２同源的区域组成，且每个同源域都包含一个α螺旋结构㊂根据在细胞凋亡过程中所起的功能不同，Ｂｃｌ⁃２蛋白家族可以分为两大类，一类具有抑制细胞调亡作用，如Ｂｃｌ⁃２㊁Ｂｃｌ⁃ＸＬ㊁Ｂｃｌ⁃１㊁Ｍｃｌ⁃１等；另一类具有促进细胞凋亡作用，如Ｂａｘ㊁Ｂｃｌ⁃Ｘｓ㊁Ｂａｋ㊁Ｂｉｄ等㊂Ｂｃｌ⁃２家族蛋白构成了一个调节细胞凋亡的关键点㊂最近研究发现Ｂｃｌ⁃２家族蛋白除了调控线粒体中凋亡因子的释放外，还在生命活动中扮演者许多新的角色，例如，调节新陈代谢［４７，４８］㊁体内Ｃａ２＋浓度［４９］和线粒体形态［５０］㊂Ｂｃｌ⁃２蛋白通过包含其中的α螺旋结构的ＢＨ３片段来调节细胞内的蛋白⁃蛋白相互作用，最终调节许多生物过程㊂㊃１０６㊀㊃ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４，２６（１）：１００ １０９天然线性的短肽不能保持原有二级结构，难以进入细胞膜，且对蛋白水解酶不稳定㊂２００４年，Ｗａｌｅｎｓｋｙ等［３７］用碳碳支架来稳定的短肽的构象㊂通过模拟Ｂｉｄ的ＢＨ３区域，设计了一组具有稳定α螺旋结构的订书肽ＳＡＨＢｓ，如表２所示㊂通过对天然ＢＨ３与ＳＡＨＢｓ的圆二色谱比较，他们发现天然多肽主要以不规则卷曲的形式存在，只有１６％的α螺旋程度；而ＳＡＨＢｓ的α螺旋程度则提高到３５％到８７％㊂酶解稳定性的实验证实，与天然ＢＨ３相比，ＳＡＨＢｓ具有更高的酶解稳定性以及血浆稳定性㊂此外，他们还通过核磁实验分别研究ＢＨ３和ＳＡＨＢＡ与Ｂｃｌ⁃ＸＬ的相互作用㊂外加天然多肽ＢｉｄＢＨ３或者ＳＡＨＢＡ于１５Ｎ标记的ＢＣＬ⁃ＸＬ溶液后，采集Ｂｃｌ⁃ＸＬ的二维１５Ｎ⁃１Ｈ异核单量子相关核磁共振谱（ＨＳＱＣ）㊂两种ＨＳＱＣ谱图极为相似，这说明ＳＡＨＢＡ和天然多肽ＢｉｄＢＨ３与靶向蛋白Ｂｃｌ⁃ＸＬ的相互作用模式相同㊂荧光偏振实验发现ＳＡＨＢＡ结合Ｂｃｌ⁃ＸＬ的能力比天然多肽ＢｉｄＢＨ３高６倍㊂研究发现在小鼠的肝脏细胞中，ＳＡＨＢＡ会使细胞色素ｃ释放增加，而天然多肽ＢｉｄＢＨ３对细胞色素ｃ释放量几乎没有影响㊂这也进一步证实了ＳＡＨＢＡ能够激活细胞凋亡信号通路㊂随后的细胞入膜实验证明ＳＡＨＢＡ可以进入细胞膜㊂上述研究结果预示订书肽ＳＡＨＢｓ有潜力成为治疗癌症或者其他疾病的药物㊂表２㊀订书肽ＳＡＨＢｓ序列［３７］Ｔａｂｌｅ２㊀ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｓｔａｐｌｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓＳＡＨＢｓ［３７］ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅα⁃ｈｅｌｉｃｉｔｙ（％）ＢＩＤＢＨ３ＥＤＩＩＲＮＩＡＲＨＬＡＱＶＧＤＳＮＬＤＲＳＩＷ１５．７ＳＡＨＢＡＥＤＩＩＲＮＩＡＲＨＬＡＳ５ＶＧＤＳ５ＮＬＤＲＳＩＷ８７．５ＳＡＨＢＡ（ＧｔｏＥ）ＥＤＩＩＲＮＩＡＲＨＬＡＳ５ＶＥＤＳ５ＮＬＤＲＳＩＷ７７．８ＳＡＨＢＢＥＤＩＩＲＮＩＳ５ＲＨＬＳ５ＱＶＧＤＳＮＬＤＲＳＩＷ８５．５ＳＡＨＢＣＥＤＩＩＲＮＩＡＳ５ＨＬＡＳ５ＶＧＤＳＮＬＤＲＳＩＷ５９．７ＳＡＨＢＤＥＤＩＩＲＮＩＡＲＲ５ＬＡＱＶＧＤＳ８ＮＬＤＲＳＩＷ３５．６㊀㊀Ｂａｘ是Ｂｃｌ⁃２家族蛋白中一个促凋亡因子㊂它位于细胞基质中，其被激活后会诱导细胞的死亡㊂Ｂｃｌ⁃２等抗凋亡蛋白可以与Ｂａｘ相互作用，抑制细胞的死亡㊂目前，科学家一致认为细胞的凋亡是通过细胞凋亡蛋白与抗凋亡蛋白相互作用来调节的，然而在凋亡应激反应中激活Ｂａｘ和Ｂａｋ的机理仍然存在争论㊂Ｇａｖａｔｈｉｏｔｉｓ等发现订书肽ＳＡＨＢｓ可以直接激活Ｂａｘ调节的线粒体凋亡［４２］㊂通过ＢｉｍＳＡＨＢ与Ｂａｘ复合物的二维１５Ｎ⁃１Ｈ异核单量子相关核磁共振谱与顺磁弛豫增强核磁共振实验，他们确定Ｂａｘ的激活位点与抗凋亡蛋白的典型模式完全不同㊂Ｂａｘ激活反应引起了一系列动态连续变化，包括构象的改变与齐聚反应㊂通过一系列订书肽与ＢＡａｘ结合实验发现，只要碳链支架不是位于结合位点，ＢｉｍＳＡＨＢ均能有效地与Ｂａｘ作用㊂该工作为癌症的治疗提供了一条新的思路，即建立细胞凋亡调节的一个新的靶标，寻找订书肽来激活癌细胞中的细胞凋亡通路㊂４ ２㊀订书肽在艾滋病治疗中的应用人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）属于反转录病毒的一种㊂ＨＩＶ通过破坏人体的免疫能力，导致免疫系统对抗原失去抵抗力，从而引发各种疾病包括癌症㊂ＨＩＶ⁃１衣壳蛋白在病毒组装中扮演着重要的角色，成为新型艾滋病疗法的一个重要的靶标㊂研究者曾报道一个含１２个氨基酸的带有α螺旋结构的多肽（ＣＡＩ）可以在体外靶向衣壳的碳端区域（Ｃ⁃ＣＡ）阻断病毒衣壳的组装［５１］㊂但是，该多肽因不能进入细胞膜而在生物体内不能发生作用，不适合作为抗病毒的药物㊂ＣＡＩ在复合物ＣＡＩ⁃Ｃ⁃ＣＡ结合的结构已经通过高分辨Ｘ射线晶体衍射法被解析［５２］㊂Ｚｈａｎｇ等［３８］通过结构优化将ＣＡＩ转变成可以进入细胞膜的订书肽（ＮＹＡＤ⁃１）㊂首先，他们利用圆二色谱测试溶液中ＮＹＡＤ⁃１与ＣＡＩ的二级结构，发现ＣＡＩ主要以无规则卷曲的形式存在，并无典型的α螺旋结构㊂这一结果间接支持了结合诱导ＣＡＩ的构象发生变化导致ＣＡＩ与Ｃ⁃ＣＡ复合物的形成㊂不同的是，ＮＹＡＤ⁃１有着明显的α螺旋结构，其螺旋程度大约为８０％㊂通过核磁谱图映射，他们发现ＮＹＡＤ⁃１和ＣＡＩ分别与Ｃ⁃ＣＡ结合的化学位移非常相似，从而证明其结合方式也非常相似㊂通过共聚焦显微镜实验，证实订书肽可以进入细胞膜；通过体外细胞实验，他们证实了ＮＹＡＤ⁃１可以抑制病毒的组装㊂在病毒侵染细胞实验中，ＮＹＡＤ⁃１没有任何活性，表明订书肽对病毒进入细胞膜的过程没有抑制作用㊂这也进一步确定ＮＹＡＤ⁃１通过直接结合在ＣＡ上影响二聚界面的形成，阻碍成熟的和未成熟的病毒衣壳的形成，减少病毒感染人体内细胞㊂ＮＹＡＤ⁃１是对于抗ＨＩＶ⁃１有着广谱的抗病毒活性，有着被优化成为一种新的治疗艾滋病药物的潜力㊂许多链段长的多肽由于结构的丧失和酶解稳定性差而致使其生物利用性低㊂恩弗韦肽是由３６个氨基酸组成的多肽，是第一个可以阻断ＨＩＶ⁃１进入人体的膜融合抑制剂㊂它通过靶向病毒的融合片段来抑制ＨＩＶ⁃１病毒的感染㊂但是，由于生物稳定性差，不能口服，恩弗韦肽一直被限制成为补救型的医。