BPG 层析柱标准装柱流程规范
BPG 层析柱实用标准装柱流程的要求规范
操 作 标 准目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1 基本术语概念填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值，GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA 》；线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min 表示；换算：2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L；装柱需要slurry体积Vslurry =V柱×PF/Cslurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，则，Vslurry=7×1.15/0.75L=10.73L；装入柱中的slurry高度Lslurry =Vslurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM 。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱摘要：I.简介- 介绍BPG 层析柱II.装柱过程- 准备工作- 层析柱的准备- 装柱器的准备- 装柱步骤- 加样- 加固定相- 加流动相- 排除气泡- 密封装柱器III.注意事项- 避免气泡的产生- 保持操作环境的清洁- 选择合适的固定相和流动相IV.总结- 装柱的重要性- 装柱后的处理正文：BPG 层析柱是一种在生物分离技术中广泛应用的工具，它通过利用样品中各组分在固定相和流动相之间的分配系数的不同，达到分离的目的。
在使用BPG 层析柱进行分离前，我们需要进行装柱操作。
首先，我们需要进行准备工作。
层析柱的准备主要是清洗柱子，以去除可能影响分离效果的杂质。
装柱器的准备则包括检查装柱器是否完好，并按照说明书进行必要的清洗和消毒。
装柱过程分为以下几个步骤：首先，将样品加入装柱器中。
然后，加入固定相。
这一步需要注意，固定相的加入量应适宜，过多或过少都可能影响分离效果。
接着，加入流动相。
在加流动相的过程中，应缓慢、均匀地加入，以避免气泡的产生。
之后，需要排除气泡，以保证样品在柱子中的分离效果。
最后，密封装柱器，开始进行层析。
在装柱过程中，有几点需要特别注意。
首先，应尽量避免气泡的产生，因为气泡会影响样品的分离效果。
其次，应保持操作环境的清洁，避免杂质污染样品。
最后，选择合适的固定相和流动相，是保证分离效果的关键。
总的来说，装柱是BPG 层析柱实验的重要步骤，正确的装柱操作可以保证实验的顺利进行，得到理想的分离效果。
BPG层析柱规范标准装柱经过流程规范标准
操 作 标 准目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员 标准操作程序： 1 基本术语概念填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns UserManual 28-9562-89 Edition AA 》；线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min表示；2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L；装柱需要slurry体积V slurry=V柱×PF/C slurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，则，V slurry=7×1.15/0.75L=10.73L；装入柱中的slurry高度L slurry=V slurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM。
层析柱 操作规程
层析柱操作规程层析柱操作规程一、引言层析柱是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术，可以用于纯化混合物、分离样品中的化合物等。
为确保层析柱操作的准确性和安全性，制定本操作规程。
二、设备准备1. 确认所需使用的层析柱类型和规格。
2. 检查层析柱的外观是否完好，检查是否有裂纹或破损。
3. 选择合适的填料，并用洗净的溶剂将其均匀填充到层析柱中。
三、试样处理1. 准备待测样品，并将其溶解于适当的溶剂中。
2. 调整样品的pH值，以便于目标化合物的分离。
3. 使用过滤器过滤样品，以去除杂质。
四、操作步骤1. 将样品注入层析柱。
注意控制进样量，以避免柱内过载。
2. 使用一定流速的溶剂将样品通过层析柱。
可以使用手动或自动进样系统实现。
3. 观察溶剂前端和尾端的流动情况，确保它们在操作过程中维持稳定。
4. 根据需要，在柱体顶端加入适当的洗脱剂，以推动样品的分离。
5. 监测柱体顶端的洗脱溶液，以确定目标化合物的出现时间。
6. 收集洗脱溶液，直到目标化合物完全洗脱出来。
五、注意事项1. 在操作过程中，避免柱体受到剧烈震动或颠倒，以免损坏填料和柱体。
2. 在柱体运行时避免样品的进样保持过久，以防止填料变形或堵塞。
3. 柱体结束后，及时清洗柱体和填料，以便下一次使用。
4. 注意操作时的个人防护，避免接触或吸入有害溶液。
六、故障处理1. 如果柱体流速变慢或停止，请检查是否柱内有堵塞现象。
2. 如果柱体出现漏液或损坏，请及时更换或修复。
七、实验数据记录1. 记录样品的进样量和溶剂流速。
2. 监测洗脱溶液的UV/Vis或其他检测方法，记录目标化合物的出现时间和峰面积。
八、实验结束1. 按照操作规程清洗柱体和填料。
2. 关闭层析柱，保持其干燥和安全。
九、附录1. 填料的种类和性质。
2. 样品的名称和来源。
以上为层析柱操作规程，希望能对层析柱操作提供相应的参考和指导。
在操作过程中请务必严格按照规程操作，以确保实验的准确性和安全性。
BPG 层析柱标准装柱流程规范
操作标准目得:为了使BＰG3００层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好得柱效,故建立此操作规范。
范围:配合ÄKTA prｏcｅsｓ系统进行有效得蛋白质纯化操作。
责任人:层析工序操作人员标准操作程序:1基本术语概念填料因子(PackｉｎｇFａｃtor, PＦ):指在在装柱过程中,用低流速(如６0ｃm/h)对填料进行沉降压缩得到得调料高度与最后装柱完成时填料高度(柱高)得比值,GＥHC生产得各种常见填料得PF参见《GEＨC ＡxiＣhroｍ300－10０0columns UseｒＭanuａl 28-95６２—89 Ｅｄiｔiｏn AＡ》;线性流速(liｎeａr flow ratｅ):单位时间内液体流经得直线距离,常用cm／h表示;体积流速(volume floｗratｅ):单位时间内液体流经得空间容积,常用ml/mｉｎ表示;换算:２准备工作2.１检查层析柱得完整性,所带配件,就是否水平(用水平仪矫正),就是否清洁(如有污染应进行清洗)、2、２确定所用填料及其特性、浓度等以DＥAE ＳｅpｈaroｓｅFast Flｏw填料为例,其填料因子(PF)为1.１５,新填料(slｕｒｒy)浓度为75％(保存于2０%乙醇中),耐压3bａｒ。
2。
3 确定放大后得工艺参数以ＸX生化制药股份有限公司得放大工艺为例,中试工艺参数:柱高h＝10ｃm;体积流速v1=3mｌ/min;柱内径d=１、６cm、即,线性流速v ２=v1/s 柱=3/(3、14×0。
82) cm/mi ｎ=1.５ cm ／min;样品与填料接触时间t ＝h ／v2=１０/1、5min ＝6。
67mi ｎ;在工艺得线性放大中h 、ｖ2与t 均不变,则可保证样品出峰得位置(洗脱时间)与形状不变、使用ＢP Ｇ３００层析柱进行放大得工艺参数:装柱体积V 柱= S 柱h=3。
1４×1、52×１L=7Ｌ;装柱需要sl ｕr ｒｙ体积V ｓｌurry =Ｖ柱×PF/C sl ｕr ｒy以ＤE ＡE Sepharo ｓe Fast F ｌow 为填料,则,V slur ｒｙ＝7×1。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱（Column Chromatography）是一种常见的色谱技术，用于分离和纯化化合物混合物。
它利用样品成分在固定相和流动相之间的差异迁移速率来实现分离。
在这篇文章中，我们将介绍层析柱装柱的基本步骤和相关参考内容，帮助读者了解层析柱技术的应用与操作。
1. 准备工作在进行层析柱装柱前，我们需要准备以下材料和设备：- 色谱柱：选择合适的柱径和柱高，以容纳样品和分离剂。
不同的应用需要不同类型的色谱柱，如硅胶柱、石墨化炭柱、反相柱等。
- 流动相：确定合适的流动相溶剂体系，用于样品的迁移和分离。
通常选择非极性溶剂（如石油醚、丙酮、甲醇等）或极性溶剂（如乙酸乙酯、二甲醚等）。
- 固定相：将合适的固定相装填到色谱柱中，用于分离和吸附样品成分。
选择合适的固定相类型，如硅胶、氧化铝、石墨化炭等。
- 样品：准备需要分离和纯化的混合物样品。
- 旋转蒸发仪：用于去除样品中的溶剂。
2. 装填色谱柱- 将色谱柱固定在柱座上，并根据柱径和柱高的大小调整砂轮，使得柱床均匀。
- 用适当的溶剂湿润色谱柱，避免流动相在柱床中出现间隙和假相。
3. 样品预处理- 将样品溶解在适当的溶剂中，以便在层析柱中迁移。
- 如果样品中有大量杂质，可以使用旋转蒸发仪去除溶剂。
4. 层析柱操作- 使用毛细管或注射器将样品注入色谱柱顶部。
确保样品不超过柱床高度。
- 将流动相逐步加入色谱柱，使其通过柱床。
可以根据实验需要调整流速和溶剂比例。
- 样品成分会根据其在固定相和流动相之间的亲疏水性质而分离。
在柱床中具有更大亲和力的成分会被滞留，而亲和力较小的成分会更快地通过柱床。
- 根据成分的迁移速度和柱床的色谱裂分能力，监测和采集分离后的组分。
常见的监测方法包括紫外可见光谱、红外光谱、荧光检测等。
5. 分离和纯化产物- 根据监测结果，确定目标化合物的峰位置和纯度。
- 通过收集色谱峰和进一步的实验操作，如再层析、结晶、后处理等，将目标化合物从样品中分离和纯化。
柱层析操作的基本流程
1.样品选择与预处理。
根据分离目的选择合适的样品，并进行必要
的预处理。
2.装柱。
选择合适的层析柱，如干法或湿法装柱。
在装柱前，柱子
应预先用适当的溶剂或缓冲液处理，以除去可能吸附的杂质，并确保内部没有气泡。
装柱时，应确保柱子均匀且无分层现象。
3.平衡。
用平衡液（通常是缓冲液）填充柱子，以确保柱子内部充
分平衡。
平衡液的体积一般为柱床体积的3到5倍，以保持平衡后柱床体积的稳定及基质充分平衡。
4.加样。
缓慢小心地将样品溶液加到固定相表面，尽量避免冲击基
质，以保持基质表面平坦。
加样量应尽量少，以减少对基质的干扰。
5.洗脱。
使用适当的洗脱液进行洗脱，以将样品组分从固定相上洗
脱下来。
洗脱液的流速和体积应根据分离目的和样品性质进行调整。
6.收集与鉴定。
收集不同馏分的样品，并进行进一步的分析和鉴定。
请介绍层析柱的制备与层析操作的基本流程
请介绍层析柱的制备与层析操作的基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!层析柱的制备与层析操作是一个涉及多个步骤的过程，旨在通过利用固定相（如层析柱内的填料）和流动相（洗脱液）之间的物质分配差异，实现混合物中各组分的分离。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱是一种用于分离、纯化化合物的重要工具，它具有操作简单、分离效果好、适用范围广等优点，因此在化学、生物等领域得到了广泛的应用。
在进行层析柱操作时，正确的装柱流程是非常重要的，它直接影响到实验结果的准确性和重现性。
下面将介绍层析柱的装柱流程。
首先，准备好所需的层析柱和填料。
层析柱通常由玻璃或塑料制成，填料的选择根据需要分离的化合物而定，可以是硅胶、纸浆、聚合物凝胶等。
填料的粒径和填充量也需要根据具体实验要求进行调整。
接着，将层析柱放置在支架上，并用适当的溶剂进行预洗。
预洗的目的是去除填料中的杂质和空隙中的气体，为样品的装柱做好准备。
预洗的溶剂通常是与样品相似的极性溶剂，如甲醇、乙醇等。
然后，将填料均匀地装入层析柱中。
填料的均匀性对于分离效果至关重要，因此在装填填料时需要轻轻振动层析柱，使填料能够均匀分布，并避免出现空隙或局部堆积的情况。
接下来，将样品溶液缓慢地加入层析柱中。
在加样的过程中，需要注意控制流速，避免填料被冲洗出来或样品在填料中发生混合。
通常情况下，可以使用移液枪或注射器来进行加样，以确保流速的均匀和稳定。
装柱完成后，可以开始进行层析操作。
根据需要，可以选择使用不同的洗脱溶剂来进行洗脱，以实现对样品的分离和纯化。
在洗脱的过程中，需要注意收集不同洗脱峰的组分，并记录下各个组分的出现时间和洗脱溶剂的类型，以便后续的分析和鉴定。
最后，对层析柱进行清洗和保存。
清洗时，可以用适当的溶剂将填料中残留的样品和杂质洗净，然后用干燥剂将层析柱中的水分去除干净。
清洗完成后，将层析柱放置在干燥通风的地方保存，避免受潮和受到污染。
总之，层析柱的装柱流程是一个关键的操作步骤，它直接影响到后续层析操作的效果和实验结果的准确性。
正确的装柱流程应该包括层析柱的预洗、填料的均匀装填、样品的缓慢加样、洗脱组分的收集和记录、以及层析柱的清洗和保存等步骤。
只有严格按照流程进行操作，才能保证层析柱操作的顺利进行和实验结果的准确可靠。
层析柱 操作规程
层析柱操作规程
《层析柱操作规程》
层析柱是一种分离和纯化化合物的工具，它在实验室和工业生产中都得到广泛应用。
为了正确、高效地运用层析柱进行实验操作，必须严格按照规程进行操作。
1. 准备工作
在开始操作层析柱之前，首先需要检查仪器设备和试剂是否准备就绪。
确保层析柱、柱子和柱底都是干净的，没有杂质和残留物。
同时，检查溶剂和流动相的浓度和pH值是否符合实验要求。
2. 样品预处理
样品在进入层析柱之前，需要进行适当的预处理。
通常包括溶解、过滤或稀释等步骤，以确保样品的纯度和浓度符合层析柱的使用要求。
3. 层析条件选择
根据样品的特性和分离要求，选择合适的层析柱和流动相。
流动相的选择包括了溶剂的种类、比例和流速等参数，需要根据实验要求进行合理选择。
4. 样品加载
将经过预处理的样品通过适当的方法加载到层析柱中。
可以采用重力流动、压力注入或者其他方法，确保样品均匀地进入层析柱。
5. 层析过程监控
在样品加载后，需要监控层析过程并进行记录。
包括流出液的收集、色谱图谱的观察等，以便及时发现异常情况并进行调整。
6. 收集和分析分离物
根据层析过程中的监控数据，及时收集目标物质，并进行分析和检测。
可以通过色谱、质谱等技术进行分析，得到分离物的纯度和产率数据。
7. 层析柱的清洗和保养
在操作完毕后，及时清洗和保养层析柱。
包括流动相的冲洗、柱子和柱底的清洗以及存放，以保证下次使用时的质量。
在实验操作层析柱时，严格按照规程进行操作，能够确保实验的准确性和重复性，同时也保证了仪器设备的长久使用。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱【原创实用版】目录1.BPG 层析柱简介2.装柱的目的和方法3.BPG 层析柱的装柱流程4.注意事项和常见问题正文BPG 层析柱是一种用于生物分离和纯化的实验设备，广泛应用于生物制药、生物化工、食品安全等领域。
在实验室中，装柱是使用 BPG 层析柱的关键步骤之一，其目的是在柱内填充固定相，以便进行样品的分离和纯化。
装柱的目的是在 BPG 层析柱内填充固定相，固定相通常是由吸附剂、凝胶或者其他固态材料组成，它们能够吸附样品中的目标物质，从而实现样品的分离和纯化。
装柱的方法有多种，常见的有湿装法、干装法和半干装法等。
BPG 层析柱的装柱流程如下：1.准备固定相：根据实验需要选择合适的固定相，并进行预处理，如清洗、烘干等。
2.准备柱子：将 BPG 层析柱清洗干净，并检查是否有破损。
3.装柱：将固定相添加到柱子中，一般采用湿装法，即在固定相中加入适量的溶剂，使其形成悬浮液，然后倒入柱子中。
在装柱过程中，应尽量避免气泡的产生，以免影响分离效果。
4.冲洗：装柱完成后，用溶剂冲洗柱子，以去除残留的气泡和固定相颗粒。
5.检测：装柱完毕后，可以通过检测柱子的压力和流量等参数，以确保装柱的质量。
在装柱过程中，需要注意以下事项：1.选择合适的固定相：根据样品的特性和实验需求，选择合适的固定相，以实现最佳的分离效果。
2.避免气泡的产生：在装柱过程中，应尽量避免气泡的产生，以免影响分离效果。
3.柱子的清洗：装柱前，应将柱子清洗干净，以去除杂质和油污等。
常见的装柱问题有：1.柱压过高：可能是由于装柱过程中产生的气泡或固定相填充不均匀导致的，需要重新冲洗柱子或重新装柱。
2.分离效果不佳：可能是由于固定相选择不当或装柱质量差导致的，需要重新选择固定相或重新装柱。
层析柱(色谱柱)填料介质的装载及洗脱操作规程
层析柱（色谱柱）填料介质的装载及洗脱操作规程工业制备层析柱（色谱柱）的填料装载充填和洗脱操作的规范直接影响色谱分离纯化工艺过程的效率，迈思通公司经过多年的实践经验和该行业专家的指导，编写了关于《层析柱（色谱柱）吸附介质的充填及洗脱规程》的方法，供广大用户和科研者参考。
一、柱头安装是否合适及是否严密的检查1、检查下柱头是否按图纸要求安装?（要求按图纸要求安装）2、检查下柱头内，是否安装了防止吸附剂（例如硅胶）漏出的滤布（或滤网）。
3、所用滤布（滤网）的材质要求能耐所用溶剂的腐蚀，而且孔径很小，一般要求使用500目以上孔径大小的滤布（网）。
4、下柱头安好，紧固后，从柱上端（开口）加入所用洗脱剂中极性较小的一种溶剂（例如已烷、石油醚、甲苯等），使溶剂液面比下柱头上部分离出20-30厘米，仔细观察下柱头是否漏溶剂。
如果漏，则必须坚固（或重装），直至不漏为止。
5、检查确实不漏后，放出柱内溶剂，准备装吸附剂（例如硅胶等）。
二、充填吸附剂以充填（或称装填）硅胶为例，作如下说明：1、干法装柱①、取吸附剂（例如硅胶）记下硅胶的量，（等装完柱后，检查剩余硅胶量，就可以知道装入柱中的硅胶量了）。
②、工作人员戴上口罩，准备好木槌，有人从柱上端倒入一定时的硅胶，柱下边有人用木槌敲击柱外壁，振实硅胶；一边加硅胶，一边敲击柱；最好硅胶加到什么高度，就在此高度敲击；且向上下移动敲击。
如此，直至硅胶装满时为止；再上下移动敲击一阵子；至硅胶上平面不再下沉，而且硅胶面很实时为止。
③、如果体系中没有设预柱，层析柱中上端硅胶不把装满，留出空间待“上样”用。
④、如果有预柱的体系，层析柱应装满硅胶。
⑤、干法装柱，粉尘大，且敲击声大，柱外表易变成不光亮，但不耗溶剂。
2、湿法装柱①、同上，准备一定时的硅胶，且记录下硅胶量。
②、准备一只30-50升的耐溶剂腐蚀的塑料桶，例入极性小的且配洗脱剂时需用的溶剂（例如已烷，石油醚、甲苯等），再例入硅胶，搅拌混合。
层析柱使用方法
层析柱使用方法
哇塞，层析柱可是个很重要的实验工具呢！它在很多领域都有着广泛的应用。
那咱就来好好说说层析柱的使用方法哈。
首先得准备好层析柱，检查是否完好无损。
然后就是装柱啦，这可是关键步骤哦！要将填料慢慢倒入柱中，同时用适当的溶剂冲洗，注意不能有气泡产生呀，这就好比盖房子得根基牢固一样重要呢！接着就是上样啦，把样品小心地加到柱子上，可别弄撒了哦。
再进行洗脱，控制好洗脱液的流速，就像把握好节奏一样重要呢。
在整个过程中，要注意保持操作环境的清洁，不然杂质混入可就麻烦啦！还有呀，使用的溶剂要合适，不然也达不到好的效果呀。
在使用层析柱的过程中，安全性和稳定性那也是相当重要的呀！就像走钢丝一样，稍有不慎可能就前功尽弃啦。
要确保实验装置的稳固，避免倒塌啥的危险情况发生。
同时呢，操作过程要规范，可不能马虎大意，这是对自己和实验结果负责呀！只有这样，才能保证实验的顺利进行，得到可靠的结果呢。
层析柱的应用场景那可多了去了呀！在生物化学、制药、食品等领域都能看到它的身影呢。
它的优势也很明显呀，比如能高效分离混合物，让我们更清楚地看到各种成分呢。
这就好像是在一堆混乱中找出秩序一样神奇呀！而且它还可以重复使用，多经济实惠呀！
给你们讲个实际案例哈。
有一次在一个生物实验中，我们就是用层析柱来分离蛋白质的。
哇，效果那叫一个好呀！很清晰地就把不同的蛋白质分离开了，为后续的研究提供了重要的数据支持呢。
这就充分说明了层析柱在实际应用中的强大呀！
总之呢，层析柱真的是个超棒的实验工具呀，只要我们正确使用它，就能发挥出它巨大的作用呀！。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱BPG层析柱是一种常见的分离技术装置，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
本文将介绍BPG层析柱的装柱过程及其相关特点。
一、BPG层析柱的装柱BPG层析柱的装柱过程主要包括填充填料、封口和测试等步骤。
1. 填充填料填充填料是装柱的第一步。
首先，将BPG层析柱的尾部封口，确保填料不会从尾部漏出。
然后，将填料填充到柱体中，填料的选择根据具体的实验目的而定。
常见的填料有凝胶、树脂、硅胶等。
填充填料时需要注意均匀填充，避免形成空隙或过度填充。
2. 封口填充填料后，需要对层析柱进行封口。
封口的目的是固定填料，防止填料在柱体中移动或漏出。
封口材料可以选择合适的密封胶或橡胶垫片，确保封口牢固。
3. 测试装柱完成后，需要对BPG层析柱进行测试。
测试的主要目的是检查装柱过程中是否出现漏液或其他问题。
可以通过加入缓冲液或样品，在一定压力下通过柱体，观察是否有液体泄漏或柱体渗透等现象。
如果发现问题，需要及时进行修复或更换。
二、BPG层析柱的特点BPG层析柱具有以下几个特点：1. 高分离效果BPG层析柱的填料具有较大的比表面积和孔隙结构，能够提供更多的分离位点，有效提高分离效果。
同时，BPG层析柱还可以根据需要选择不同的填料，进一步提高分离效果。
2. 快速操作BPG层析柱的装柱过程相对简单，操作方便快捷。
填充填料和封口都可以在较短的时间内完成，适用于一些对操作时间要求较高的实验。
3. 良好的重复性BPG层析柱具有较好的重复性，可以反复使用。
在使用过程中，只需要更换填料和进行适当的维护保养，就可以保持较好的分离效果和分离效率。
4. 广泛应用BPG层析柱可以应用于各种领域的实验，如生物分离、蛋白质纯化、药物筛选等。
其灵活性和高效性使得BPG层析柱成为实验室中常用的分离技术装置。
总结：BPG层析柱是一种常用的分离技术装置，其装柱过程简单，操作方便快捷。
具有高分离效果、快速操作、良好的重复性和广泛应用等特点。
在实验室中，合理选择和使用BPG层析柱能够提高实验效率，促进科研工作的顺利进行。
层析柱装柱操作规范
层析柱装柱操作规范(总2页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除层析柱装柱流程装柱材料层析柱：BXK层析柱装柱仪器：ÄKTA装柱器装柱溶液20%乙醇匀浆的准备精确计算所需介质的量（这对固定柱高的层析柱尤其重要）。
1L填充柱所需的介质量大约是1.15L自然沉淀匀浆的量，于干净烧杯中，取 100%沉降胶（静止放置一天以上，倾去20%乙醇后的胶为100%沉降胶）与等体积20%乙醇混合备用。
安装层析柱1.检测层析柱的各个部件，确保干净、完整，拧上下端堵头，拧紧膨胀圈，然后将层析柱垂直固定在铁架台上。
2.将装柱器安装在层析柱上端。
3.往层析柱中加入适量的20%乙醇，打开下端口，重力流，排除下筛网中滞留的气泡，在液面低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。
装柱1.用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将摇匀的介质加入到层析柱中，这可以减少气泡的产生。
迅速用20%乙醇填满柱子和装柱器，装上装柱器盖子，连接到ÄKTA上。
2.打开层析柱下端，开始以30cm/h流速装柱，直至柱床界面平稳。
停止装柱。
3.打开装柱器盖子，用虹吸法去除界面上端的液体，去掉装柱器，然后小心的用20%乙醇封满柱子剩余部分。
4.将上端转接头一端连上ÄKTA，打开机器，以装柱流速用装柱液排出转接头管路中及筛板中残留的气泡，然后将转接头另一端装到层析柱上，使转接头下端刚好接触胶界面。
(装柱流速约为70-100%的最大流速）5.拧紧膨胀圈，继续用装柱流速压柱，至少保持3个柱体积，以界面不变为主，在界面处做上记号。
6.关闭泵，并关闭柱子下端出口，使层析柱上端和泵断开（转接器上接口是打开的），略拧松膨胀圈，缓慢向下转动调节杆，到记号处停止，然后再拧紧膨胀圈，关闭上接口。
7. 检测柱效3。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程介绍层析柱是一种常用于分离和纯化化合物的技术，其基本原理是利用化合物在不同介质中的亲和力差异而实现分离。
层析柱分为填充柱和装柱两种，本文将主要介绍装柱流程。
装柱前准备工作确定分离目标在装柱前，需要明确分离目标，以选择合适的载体和介质，如离子交换色谱柱、逆相色谱柱、凝胶过滤柱等。
准备层析柱和配件根据选择的层析柱类型，选购适当的层析柱、压力计、样品瓶、钝化剂等必要配件。
准备介质根据选择的柱类型和实验需求，选择合适的介质。
在使用新柱前，需要进行开柱处理，以去除杂质和预处理柱体。
装柱流程1. 柱体预处理将新柱体安装在装置中，流通适当的缓冲溶液经过柱体，洗涤不溶于溶液中的杂质和微生物。
2. 样品准备用适当的缓冲液将样品准备妥当，剔除其中的微粒和杂质。
3. 柱体装填将预处理后的柱体安装在柱体装填器上，逐层添加介质和样品，并用特殊方法将介质压实，尽可能减小柱体和样品的空隙。
4. 柱体检测装填完成后，用压力计检测柱体的漏气和密封情况，确保柱子健康并正常工作。
5. 样品装柱用希望分离的样品样品注入装好介质的分离柱，并应用压力调节器，并通过仪器程序使样品流过柱体。
在这个过程中，样品将在介质上进行分离。
6. 分离结果分析在对样品通过柱体后，将流出的溶液进行采集和处理，并用相应的分析方法对化合物进行测定。
后续处理1. 柱子的清理在完成实验后，需要将层析柱进行清洗以去除残留的样品和介质，防止柱体污染和结晶，降低柱子的使用寿命。
2. 柱子的储藏对于长期不使用的柱体，需要将柱子放置在特定的保护剂中，以保持干燥和清洁状态，防止介质变质或者柱子老化。
装柱流程是层析柱实验的重要步骤之一，其良好的实施关系到实验结果。
在实验前，需要仔细做好准备工作，掌握每一个环节的操作细节，并进行严格的柱子检测和后续处理工作。
亲和柱层析操作(可溶性蛋白)
亲和柱层析操作规程（可溶性蛋白）1.装柱：1.1 取出层析柱，用去离子水冲洗干净，连接好管子后固定柱子；1.2用水冲洗层析柱3-5次，每次10ml去离子水；1.3取出填料，静止至室温后，根据需要用移液器取出3-5ml的填料进行装柱，1.4用去离子水冲洗填料5个柱体积；2.柱的平衡与上样：2.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)平衡Ni柱，直至流出液的pH为8.0；2.2对处理的样品进行过滤后，缓慢上样让蛋白充分结合；3洗杂蛋白：3.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)过柱，清洗没有结合到层析柱上的杂蛋白，至流出液与缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.3用含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.4用含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.5用含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.6用含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）4解离目的蛋白：4.1用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.2 用含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.3 用含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.4用含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul 做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）5.柱的清洗与保存：5.1用含500mM咪唑的缓冲液A（pH8.0）以冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.2用浓度为1.5M的NaCl溶液冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.3用过滤去离子水冲洗50ml；5.4用20%乙醇冲洗30ml后于4℃20%乙醇中保存。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
操 作 标 准
目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。
范围：配合ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。
责任人：层析工序操作人员
标准操作程序：
1 基本术语概念
填料因子（Packing Factor, PF ）：指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h ）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值，
GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA 》；
线性流速（linear flow rate ）：单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h 表示；
体积流速（volume flow rate ）：单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min 表示；
换算：
2 准备工作
2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。
2.2 确定所用填料及其特性、浓度等
以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例，其填料因子（PF）为 1.15，新填料（slurry）浓度为75%（保存于20%乙醇中），耐压3bar。
2.3 确定放大后的工艺参数
以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，
中试工艺参数：
柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.
即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；
样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；
在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数：
装柱体积V
柱= S
柱
h=3.14×1.52×1L=7L；
装柱需要slurry体积V slurry=V柱×PF/C slurry
以DEAE Sepharose Fast Flow为填料，
则，V slurry=7×1.15/0.75L=10.73L；
装入柱中的slurry高度L slurry=V slurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.
3管路安装
3.1 层析柱管道和配件安装
3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；
3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二
通阀；
3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至ÄKTA process 上端连接口COLUMN TOP ，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至ÄKTA process 的下端连接口COLUMN BOTTOM。
图1、BPG300层析柱安装示意图
3.2层析柱下端筛网排气泡
3.2.1连接两根足够长的细管到ÄKTA process 进样泵的A1和B1进口，两管另一端均放入纯水中；
3.2.2从A1泵入纯水：打开UNICORN 软件，在system control 窗口点击manual →valves →InletA ，选择inletA1，insert ；InletB ，选择closed ，insert ；
Column，选择upflow，insert；Pump→Flow，设定流速60L/h，点击execute运行程序充水至BPG柱中2-3cm左右，pause，清除下端筛网中的空气，用注射器吸出筛网中残留的气泡。
4装填料
4.1准备填料
所用填料为DEAE Sepharose Fast Flow ，装置的是保存于20%乙醇中的新slurry；
4.2卸下柱头，用搅拌棍引流加入混匀的slurry至1
5.2cm处，再加入纯水至40cm左右，充分搅拌混匀，同时避免挤压筛网和柱壁，静置使填料界面至少低于38cm；
4.3在system control窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择closed，insert；Column，选择downflow，insert；Pump→Flow，设定流速60L/h，点击execute运行程序将柱头上端筛网充满水以除去气泡，再装上柱头，用密封调节器固定柱头，拧紧螺丝；
4.4在system control窗口点击manual→Pump→Flow，设定流速为42L/h （60cm/h），进行填料的沉降，待填料高度降至14cm左右，将密封调节器旋至全松，将柱头快速调至距离填料3-4cm处，将密封调节器旋至半松，将柱头快速调至滤网距离填料1-2cm，旋紧密封调节器，再设定高流速（如150L/h），继续压缩填料，最后再调节柱头至10cm。
整个过程一直有流速，泵速不能停。
5 柱效测定
图2、柱效测定示意图
5.1 平衡
将A1接口细管放入0.4M NaCl溶液中，将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在system control窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择closed，insert；Column，选择downflow，insert；Pump→Flow，再设定高流速（如150L/h），点击execute运行，排气泡，再将阀调至管路与柱头相连状态，平衡3-5个柱体积至电导曲线稳定，点击END；
5.2上样
5.2.1将B1接口细管放入2M NaCl溶液，柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在system control窗口点击manual→valves→InletA，选择Closed，insert；InletB，选择InletB1，insert；Column，选择downflow，insert；Pump →Flow，设定高流速（150L/h）点击execute运行，排气泡，pause；
5.2.2 在system control窗口点击manual→Other→End_Timer，选择Acc.
V olumn, Timeout 设上样量为70mL（1%柱体积）；Pump→Flow，设定上样流
速60L/h，点击execute的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连，完
成上样；
5.3 洗脱
5.3.1 将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在system control窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择closed，insert；Column，选择downflow，insert；Pump→Flow，设定高流速（150L/h）点击execute运行，排气泡，同时将管路充满0.4M NaCl溶液，调流速至21L/h （30cm/h）；
5.3.2 待流速稳定后，在system control窗口点击manual→valves→Injection Mark，insert，点击execute的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连，开始洗脱，在一个柱体积左右，电导检测下将产生目的峰。
5.4 测柱效
在Evaluation窗口中，选择实验保存的结果，在结果图中点击鼠标右键，选择Properties，点击Clear，并选中Cond_102，点击OK。
回到Evaluation窗口，选择积分按钮，在弹出窗口中，选择Cond_102，peak window中调整积分的范围，并在Reject Peaks中，填Peak must be one of 1 largest；确定后，在积分结果窗口，点击右键，选择Properties，在peak table选项中，勾选Plate Height （HETP）和Asymmetry。
确定后即可计算得到计算理论塔板高度HETP和对称因子As。
1.1 instead of the Packing Factor above which is used during packing.。