(三)网织红细胞计数
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网织红细胞
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计数方法
▪1、普通光学显微镜法:活 体染色后推片镜检
▪2、网织细胞计数仪法:荧 光染色后用流式细胞术计数
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二、试剂器材
1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精(水)溶液 2、器材 毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、
(2)评价疗效
网织红细胞反应:IDA或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗2~3d后,网织 红细胞计数值开始上升,7~10d达到最高(10% 左右);两周以后逐渐降至正常水平,红细胞、 血红蛋白开始升高。
骨髓移植、EPO治疗后:若骨髓开始恢复造 血功能,RMI升高,网织红细胞计数值上升。
网织红生成指数(Reticulocyte production index,RPI)
• RPI=病人网织红细胞(%)/2 * 病人HCT/正常
人HCT(男0.45,女0.40)
• 临床应用: • >3提示溶血性贫血或急性失血性贫血;
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八、思考题
一溶血性贫血患者,红细胞计数2.6x1012/L,血细胞比容0.29,网织红细
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七、临床意义
(1)评价骨髓增生能力,判断贫血类型
再障时,明显降低。绝对值低于5×109/L可 做为急性再障的辅助诊断指标。
失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 显高于正常。
营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。
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实验三 网织红细胞计数
一、实验原理
网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质 ,经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负 电荷基团与带正电荷的有色基团结合,凝聚成 颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构 ,可在显微镜下识别。计数1000个红细胞中所 有的网织红细胞数直接报告其百分比,或×红 细胞计数结果报告其绝对值。
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(3)放、化疗监测
机体接受放、化疗后,如出现骨髓抑制 ,早期HFR和MFR降低,然后才检测到网 织红细胞的降低。而停止放、化疗,骨髓 功能恢复后,又见上述指标依次上升。可 指导临床医师适时调整治疗方案,避免造 成严重的骨髓抑制。
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2.直接计数法:网织红细胞(Retic)百分率(%)= 多个视野内Retic总数/ 多个视野内RBC总数×100%
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五、注意事项
1.用酒精染液时,应待玻璃片上的酒精挥发干燥后 ,才能加血液,染色时应用推片角不停搅动, 使染料和血液混合,防止凝固。
2.染色时间一定要充足,混合后不能立即推片,室 温低时染色时间应适当延长,应覆以另一玻片 防止蒸发。
3.染液与血液比例以1:1为宜,贫血适当加血量。
4.涂片厚薄均匀适宜,弓形移动,多个区域计数
5.试剂应定期重配,以免变质沉淀。
6.与变性珠蛋白小体鉴别
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六、参考值
成人:0.005-0.015(0.5%-1.5%) 新生儿:0.02-0.06(2%-6%) 儿童:0.005-0.075(0.5%-7.5%) 成人绝对值(24-84) 109/L
二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm(较目镜内径稍小)的圆形硬 纸片(正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔,置目镜光阑处,用于 缩视野法计数)
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三、操作步骤
1. 染色:于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴, 任其自然凉干后备用,取末梢血或抗凝血一滴,于 已干燥的染料上,用推片角混匀后,将两玻片盖合 (玻片法);试管法取染液2滴入试管,加血2滴混 匀,封闭好,待15分钟以上时间,
胞计数相对值为35%,如何报告网织红细胞检测结果?
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网织红细胞(Ret)
是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞,是尚未完全成熟 的红细胞,其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成 蓝色颗粒,颗粒与颗粒连缀成线,线连接成网,故而得名。 分型:丝球型、网型、破网型、点粒型。(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)
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Miller窥盘
将Miller窥盘放在显 微镜目镜中,通过窥盘 中大小方格间的9比1 比例关系计算RBC数和 Ret数。
B1
3
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四、计算
1.Miller窥盘法:网织红细胞(Retic)百分率(%)= (大方格内Retic总数 )/(小方格内RBC总数×9)×100%
2. 推片:取混合液1小滴于载玻片的一端,推制成薄 而均匀的血膜,
3. 低倍镜浏览,选取红细胞分布均匀网织红细胞染色 较好的部分(体尾交界处),滴香柏油转换至油镜 ,在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格 中的网织红细胞数(或数出整个视野中的RBC总数 和其中的网织红细胞数,换一视野同法计数至几个 视野RBC总数>1000为止)。