实验室检测

仪器设备： 分光光度计（722、723等） 220V电源（稳压器） 冷藏保温箱 离心机
现场实验室工作
1、准备工作
1）准备实验仪器及耗材（如采血针、真空管、 吸管、储存管、比色计等），采血编号，样 品储存设备(冰箱或冷藏箱）等。 2）准备现场急救所需的药品
2、现场工作 1）发放医学体检通知：与现场有关机构人员沟通， 在采血前一天及时通知被调查对象采血时间及相 关要求（如 空腹10小时以上）。
（5）维生素A过量：有发生维生素A中毒的可能。
缺乏与过量的危害：
（一）缺乏 （1）眼部和视觉表现 干眼症(xerophthalmia)是维生素A缺乏的典型临 床特征。 （2）其它上皮功能异常的表现 毛囊增厚（毛囊角质化）是维生素A缺乏 的皮肤表征。 （3）胚胎生长和发育异常 维生素A缺乏会损伤胚胎生长。
(2) 用 10 微升毛细管吸满血 , 擦净管壁外余血放入
装有 2.5ml Hb 试剂的试管中混匀 ,15 分钟后比色。 (3)其余步骤与样品测定相同。
Hb的DI计算公式如下:
— |Χ -Χ | DI(Hb)= Χ ×20
式中X为各点实验结果,5%为计算DI时Hb的常数 (即计算Hb时,5%相当于1DI,此公式所得DI为绝对 值,不计正负,其意义如下:
DI≤0.5优秀 1.0< DI ≤1.6及格
0.5< DI≤1.0 良好
技术考核主要目的是为了了解实验结果的准确性, 应按自己测定的结果如实报告,这样才能发现问 题并及时纠正.
g/L
T+ 8% T 124.2
最大允许线
T+ 5 % T 120 .8
警告线
115 T
靶值线
T- 5 % T
109.2
比色法：维生素A在三氯甲烷与三氯化锑相互作用产生蓝色 物质，其深浅与溶液中维生素A含量成正比。620nm波长。 误差大。 高效液相色谱（HPLC）：具有快速灵敏同时进行定性定量 的优点,而且还能同时测定几种维生素。 液质联用（LC-MS） ：LC-MS法灵敏度、特异性、准确性 都高，但需要样品量较大，操作较复杂，对操作人员的要 求较高，而且仪器价格昂贵。
不同海拔高度的血红蛋白调整值
中国城乡居民贫血率比较（%）
年龄 合计 男 女 2002年 城市 农村 16.7 15.2 6.8 8.7 8.4 9.0 12.1 11.2 13.0 18.4 10.9 23.7 21.9 18.0 24.9 13.7 14.0 13.3 17.5 16.2 19.0 21.8 14.4 27.2 2010-2012年 农村 城 市 9.7 9.8 6.8 7.4 12.8 12.4 4.5 4.0 5.0 7.8 6.6 9.4 18.4 10.9 23.7 5.5 5.3 5.7 8.9 8.5 9.4 21.8 14.4 27.2
12.5 12.4 12.6
9.7 7.6 11.8
12.7 13.0 12.3
2010-2012年 贫困农村贫血患病率
25
20
男性
15
女性
10
5
0 6789- 10- 11- 12- 13- 14- 15- 16- 17- 18- 20- 25- 30- 35- 40- 45- 50- 55- 60- 65- 70- 75- 80-
点。
电化学发光免疫分析（ECLIA）
是集电子发光技术、纳米微粒技术、生物素-亲和素系统 、抗原-抗体免疫反应、电磁场分离整合为一体而设计的 一种自动化标记免疫分析系统。其标记物的发光原理是一
维生素A的营养状况可以分为五类：
（1）维生素A 严重缺乏：临床上表现为明显的维生素A缺乏症状，怕光， 流泪，眼睛疼痛甚至失明，即通常所说的干眼病.此时血清（浆）中视黄醇 浓度< 0.35μ mol/L(<0.1 μ g/ml ) （2）维生素A缺乏：组织和血液中的视黄醇浓度低,暗适应能力降低，但没 有明显的干眼病症状。 0.35μ mol/L <血清（浆）中视黄醇浓度 <0.70μ mol/L(0.1-0.2 μ g/ml) （3）边缘性维生素A缺乏(SVAD)：肝脏中维生素A的贮备不足，不能应付各 种应激状态或短期的低膳食摄入，有发生缺乏的危险。 0.70μ mol/L <血 清（浆）视黄醇浓度<1.05μ mol/L(0.2-0.3 μ g/ml) （4）维生素A充足：维生素A含量正常，无临床体征，体内贮备量足以应付 各种应急需要。血清（浆） 中视黄醇浓度≥1.05μ mol/L(≥ 0.3 μ g/ml)
维生素A营养状况评价
目前WHO调查显示：全球每年约有1.24亿儿童缺乏维生素 A，2亿边缘性维生素A缺乏；亚洲每年约有50万儿童因缺乏 维生素A而患干眼症，其中50%的儿童因此失明。
VAD和SVAD作为118个国家的重大公共卫生问题，主要分 布在赤道周围和世界南部地区。中国所在的西太平洋区域 中：重度SVAD地区（越南、老挝），中度SVAD国家（马来西 亚、中国）。 有报道结果显示，VAD的发病率在发达国家和发展中国家 有明显的差别，发展中国家维生素A缺乏发病率远远高于发 达国家。VAD已成为许多发展中国家的一个主要公共卫生问 题，在非洲和亚洲许多发展中国家的部分地区甚至呈地方 性流行。
血红蛋白测定方法及其质量控制 （氰化高铁法）
原 理
血红蛋白与铁氰化钾作用生成高铁血红蛋白,与 氰化钾作用生成氰化高铁血红蛋白, 此化合物呈 红色, 极为稳定。在540nm波长下, 用分光光度 法测其光密度, 以测得的光密度与标准品的光密 度比较而得出样品血红蛋白含量。
仪器
分光光度比色计
光径1cm或0.5cm比色杯
计算公式:
样品光密度
样品Hb g/L= 标准光密度 ×标准浓度g/L
原始记录及结果的报告：
实验原始记录表应填写完整，并有实验室负责人签字。样
品测定结果应填写在医学体检结果通知单上。及时将实验 原始记录表和医学体检结通知单返回中心实验室。
测定日期：
年
月
日
测定人：
审核人：
备注
血样放入试剂后所形成的氰化高铁血红 蛋白极为稳定，反应15分钟后进行比色，
放射免疫法（RIA）
具有灵敏度高、特异性强、精密度好、检测限低的优点， 缺点：
①试剂的半衰期短，相对费用高，需要伽马计数仪等专业设
备 ②放射性核素对操作人员存在潜在危害性 ③试验废弃物处理困难。
化学发光免疫分析(CLIA)
1977 年，化学发光免疫分析方法(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)， 它是在RIA理论的基础上,以标记发光剂为示踪物信号建 立起来的一种非放射标记免疫分析法，具有灵敏度高、线 性范围宽、操作方便、分析速度快和容易实现自动化等优
（4）免疫功能受损。
（5）感染性疾病的患病率和死亡率升高。
缺乏与过量的危害： （二）过量 肝脏维生素A浓度超过300mg/g被认为是过量，并会 引起相应临床毒性表现。急性维生素A过量、慢性过量。 （1）致畸。
（2）骨矿物质丢失和骨质疏松症风险。
（3）肝脏损伤。
（4）增加心血管疾病风险。
血浆维生素A的测定
2) 血样分离：专人负责及时处理血样，项目要求取 全血，分离血清、红细胞，并置于储存管中，贴 （写）好编号。同时，将放置储存管的各冷冻盒 上的标签填写完整。
血样分离
全 程 注 意 避 光
空腹静脉血
4ml 真空பைடு நூலகம்血管 取全血做血红蛋白
放置30分钟，离心
分装4管血清 （500微升） 1管血凝块
分装到冻存盒内
我国学生贫血及微量营养素营养 状况评价
主要内容
1.血红蛋白测定（调查点现场测定）
2.维生素A营养状况评价 3.维生素D营养状况评价
采血现场部分
现场实验室必须具备的基本条件,仪器设备 与材料
取血材料：
采血针 4ml负压真空管 测血红蛋白的5ml塑料试管 测血红蛋白用试剂、标准、质控、盲样 试管架 取血红蛋白血样10ul毛细管（进口） 取试剂用取样器（或移液管，洗耳球） 分装血清的滴管、冻存管、冻存盒 其它：止血带、消毒碘酒、酒精棉球及塑料袋及必 备的抢救用品
警告线
T- 8 %T 105.8
最大允许线 1 2 次数
3
4
5
6
7
8
在每批样品测定时, 至少测定三次质控样品，分别在测定 过程的前、中、后,每测定一次质控样品,将测定值点在上 述质控图的相应位置上,用垂直线连接,再用红点标出垂线 的中点(代表重复测定的均值)并用细线将相邻红点连接起 来.
贫血的判断标准
必须在当天完成样品测试。
血红蛋白测定的质量控制
血红蛋白测定的参考方法 -HicN分光光度法,是由
ICSH 推荐的参考方法 , 其本身有参考标准品 , 并有严
格规定标准化的方法 , 因此对血红蛋白测定的标准
化 , 对统一测定结果并使测定水平与国际标准接近 ,
都是有利条件。
质控物的使用：
质控物 ( 定值 ) 均要求随每批样品同时测定。即把 质控物当作一个样品来测定,具体步骤如下： (1) 先将装有溶血液的安瓶充分混匀 , 用酒精棉球 消毒后打开。
（3）骨质疏松
缺乏与过量的危害： （二）过量 钙吸收增加导致的高钙血症、高钙尿症，钙沉积在 心脏、血管、肺和肾小管等软组织，出现肌肉乏力、关节 疼痛、弥漫性骨质脱矿化以及一般定向能力障碍等；还可 能引起体重下降和心律不齐；严重的可导致心脏和肾脏软 组织钙化 2013版“中国居民膳食营养素参考摄入量”建议我国 1岁以下儿童可耐受最高摄入量（UL）为20μ g/d，4-7岁 UL为30μ g/d,7岁-11岁UL为45μ g/d,成人UL为50μ g/d。
血浆维生素D的测定
放射免疫法(RIA) 酶联免疫法（ELISA） 化学发光免疫分析(CLIA) 电化学发光免疫分析（ECLIA） 液质联用（LC-MS）
酶联免疫法（ELISA）

酶免疫分析法具有设备操作简单、无污染等优点， 缺点： 灵敏度不足、 抗体之间的交叉反应导致特异性不足。
静 脉 取 血
10 微升毛细管取抗凝血，吸满血后,用卫生 纸擦净管壁外余血(不能用棉球或滤纸擦)。 置于盛有2.5ml试剂的5ml试管中,混匀，放 置至少15分钟后比色（注意避免太阳光直 射）。
比 色
于540nm波长下, 以试剂调零点,先测定标
准管光密度, 作为该次测量的工作标准。
然后依次测定样品管的光密度。
10μ l微量毛细管
一次性5ml塑料试管
试剂(文齐氏液)
仔细阅读试剂说明书。 文齐氏液 (Hb 试剂 ) 一般为浓缩 50 倍的贮 备液,用时稀释50倍即可。 如: 配制500ml工作液时,取贮备液10ml,加 蒸馏水至500ml混匀即可。
氰化血红蛋白标准液
每支标准约 10ml, 安瓶打开后，应用封瓶纸 封好，放入冰箱以备下次再用。
儿童（6-11岁）
小计 男 女 青少年（12-17岁） 小计 男 女 青年（18-44岁） 小计 男 女 中年（45-59岁）
小计 男 女
老年（≥60岁） 小计 男 女
17.6 13.1 21.1
19.6 18.3 20.9
25.0 20.6 28.0
31.6 34.1 31.3
9.4 7.3 11.5
疏松。
（1）儿童佝偻病:佝偻病儿童主要表现为低钙血症、牙齿萌出 延迟、骨骼生长障碍、骨骼不能正常钙化、变软、易弯曲、畸 形，贫血和易患呼吸道感染。典型的骨骼病变为骨骼畸形，特 别是在膝、腕、踝等部位以及与肋软骨关节功能有关的一些变 化。“念珠肋”是佝偻病患儿肋骨和胸廓畸形的常见表现。 （2）骨质软化症
3、血液样品的储存、运送 血液样品应保存于-70oC冰箱。
1）现场样品保存： 如条件有限，可暂时放入-20oC冰箱 2）样品运输：必须保证运输途中不化冻。建议用干冰运输； 若无干冰，请将冰排预先在-20oC 冰箱冻2天，样品与冰 排比例为1：1装入冷藏保温箱，并用宽胶带纸将箱口封 好，以最快的速度运送至有-70oC冰箱保存条件的（检测 实验室)实验室
维生素D营养状况评价
维生素D的营养状况评价
（1）通常报道的正常范围是20-150nmol/L(8-60 ng/ml ) 低于25nmol/L(10ng/ml )为维生素D缺乏 （2）维生素D中毒时25-(OH)D3浓度可在 375nmol/L(150ng/ml ) 以上。
缺乏与过量的危害：
（一）缺乏：在儿童称为佝偻病，成人则称为骨质软化症和骨质