液相色谱柱维护保养及仪器冲洗 2

液相色谱柱维护保养及仪器冲洗

注意:每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书.

色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后，一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督。

总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料；另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好。对于具体的色谱柱，下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项，以便使用者参考。

对于未启用的新的色谱柱，先用甲醇或乙腈以小流速（０．2mｌ/min缓慢升高到0。５ml/min)不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上，流速调为１．0 ｍｌ／min冲洗色谱柱6０分钟,然后不断降低有机相的比例（如80%、5０％、10%甲醇或乙腈）各冲洗至少3０分钟。若色谱柱暂时不用，则将色谱柱保存在高比例有机相中(如８0%甲醇或乙腈，或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中)；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂(将缓冲盐溶液换成水）冲洗色谱柱１５分钟,然后再换成流动相进行样品分析。

样品分析完后，色谱柱维护与保养方法:

流动相中若含酸、碱、盐类物质，则要先用１0％甲醇或乙腈冲洗,1。0ml/ｍiｎ的流速冲洗至少30ｍin，再用80％甲醇或乙腈冲洗至少３０miｎ,柱子保存在80％甲醇或乙腈里(具体问题具体分析，洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存的是高有机相，第二天用之前一定要用高水相过渡一下，再换成流动相）.如柱子长时间未用,则柱子保存在100％的甲醇或乙腈里。

对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等，柱子应采用梯度洗脱，一般用乙腈—水系统(水:９０-10；乙腈：10-９０）冲洗时间要稍长些,然后保存于9０％乙腈。

需要特别强调的是,目前所有的C１8柱均不能用纯水进行长时间(1小时以上）冲洗,除非有专门耐水的专用柱，否则，用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷，损坏色谱柱。

大多数反相色谱柱的pＨ稳定范围是2~８,有的pH稳定范围会宽，具体pＨ稳定范围参照色谱柱说明书,当分析条件的pH值偏小或偏大时,可选择ｐH稳定范围宽的柱子进行分析，否则,会损坏色谱柱。

在每次进行样品分析时，要保证流动相(包括盐、缓冲盐、酸等)与色谱系统及柱内的保存液要互溶,如不能互溶,则需要用一定比例的有机溶剂（不低于1０%)或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡，否则,流动相中的盐会在系统与柱内析出，影响样品分析或损坏柱子。

硅胶柱、正相手性色谱柱【包括AＳ－H、AＤ-H、OD—H系列，5DＭB、5TBB 系列，OA系列（如OA—３１00、ＯA-3300）】

对于未启用的新的色谱柱,在保证系统是正相的情况下,可先用异丙醇小流速（流速为０.１～0.3ml/min)冲洗色谱柱约１５分钟,然后换上正相流动相平衡进行色谱分析。

硅胶柱及正相手性柱不能过水相(对于seｐax系列的硅胶柱，可以过低比例的水相(有机相不低于50%)）,接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相【如是不含盐的反相溶液(如水/乙腈；水/甲醇)，先用异丙醇冲洗所有管路,然后用正相流动相冲洗所有管路，最后再接上色谱柱；若反相流动相中含有缓冲盐（如缓冲盐/乙腈;缓冲盐/甲醇),先用纯水冲洗HＰLC系统，然后用异丙醇冲洗所有管路,最后用正相流动相冲洗,再接上色谱柱.】使用结束后,先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱，再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱，（或者直接用正己烷-异丙醇(90:１0)冲洗,并保存在正己烷-异丙醇(９0:１0)中)．如长时间未用,则保存在正己烷中。

需要特别强调的是,冲洗硅胶柱时,不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱,只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱（对于sｅｐａｘ系列的硅胶柱可以用不低于50%有机相冲洗色谱柱),最后保存在纯的有机溶剂中。

在进行样品分析前,一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶，如不互溶,则需要用异丙醇过度,否则,会影响色谱系统与损坏柱子。

反相手性色谱柱(如:CＨIＲAＬCEL OＺ-3R):同Ｃ18柱

阴离子柱和阳离子柱:

目前常见的阴子柱有waterｓIＣ－PakＴM ａnion，阳离子柱有磺酸基阳离

子柱与waｔers阳离子交换柱(钙型）.

对于waterｓＩＣ-Ｐak TM ａnｉon 和ｗａters阳离子交换柱（钙型)，新柱子使用前用高纯水小流速(0。2ml／mｉn缓慢升高到0。５ｍl/min）冲洗约30分钟，然后再换成流动相平衡色谱柱。在冲洗色谱柱之前,要保证整个色谱系统为纯水相。

对于磺酸基阳离子柱（含有硅胶基柱的)，使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30分钟,然后高纯水替换系统冲洗，然后接上色谱柱。

分析完样品后，对于watｅrs IＣ－PakＴMａnion和waｔeｒs阳离子交换柱（钙型）用高纯水冲洗色谱柱,色谱柱最后保存在纯化水中.对于磺酸基阳离子柱，用50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱30分钟，最后保存在甲醇或乙腈中(参照柱子说明书)。冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整。

需要特别强调的是ｗaｔers ＩＣ－Pak TM anioｎ和watｅrs阳离子交换柱(钙型)是不能过有机相(纯有机溶剂或有机溶液），否则会损坏色谱柱。

氨基柱、氰基柱、苯基柱及C８柱

目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱基本都是使用反相系统,其操作方法与维护保养与C18相同.

对于新碰到的别的型号的色谱柱,如本规程没有说明时，要参照色谱柱说明书具体问题具体分析.

液相仪器的冲洗

1、冲洗色谱系统(具体情况具体分析，可针对缓冲盐浓度较高的流动相）

一般做完试验冲洗完色谱柱后,换上两通，将各通道放于1０%乙腈中冲洗至少3０分钟（若原色谱系统中流动相含盐,则用高纯水(有时候用温水效果更好）冲洗至少30分钟后再用10%乙腈冲洗）.若仪器长时间不用,则将仪器保存于８0％乙腈中。

2、清洗进样针、柱塞杆

洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂(如该样品在70%甲醇中溶解,则洗针液应选择７0％甲醇或更高比例的甲醇);清洗柱塞杆的溶剂(为了清洗流动相中析出的盐）,一般选择低比例的有机相,如1０%甲醇或乙腈。

3、仪器的钝化

色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路（包括进样器和检测池)若被污染，系统应做清洗和钝化处理。

一般采用30％磷酸水溶液作为清洗剂，用6moｌ／Ｌ硝酸作为钝化剂,先清洗再钝化。清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢．钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜。

30％磷酸水溶液制备：取８5%浓磷酸３5mｌ与65ｍl水混匀。

6moｌ/L硝酸的制备：取浓硝酸40mｌ与60ml水混匀。

方法:将色谱柱取下，用两通连接进样器和检测器,将所有吸滤头放入高纯水中，以1。0ml/mｉn流速过渡（至少30分钟)，待管路中有机溶剂洗脱干净;再换用30%磷酸清洗系统(约45分钟），再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7（用ｐＨ试纸测试),清洗完成;然后换用６mol／L硝酸冲洗系统(约45分钟)，再换高纯水冲洗，直至出口水pH值约为6～7，钝化完成。用纯甲醇过渡,浸润泵头及管路，备用.