铜绿假单胞菌的分类鉴定
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粗糙型(麦康凯平板)
菌落中央凸起 边缘扁平 表面粗糙
生物学特性
大肠型(麦康凯平板)
菌落圆形凸起 似大肠埃希菌菌落
细小,无光泽 半透明菌落
侏儒型(麦康凯平板)
生化特性
氧化酶:+ 葡萄糖的氧化(O/F):O 枸橼酸盐利用:+ 精氨酸双水解:+ 明胶液化:+ 硝酸盐还原:+ 乙酰胺酶:+ 吲哚试验:-
最终鉴定
吲哚试验:选取可疑菌落的纯培养物接种于蛋白胨 水,培养8h-24h后,加Kovacs(靛基质)试剂约3mm 高,如若在液层界面发生红色,即为阳性反应。 42℃生长试验:选取纯被检物,接种于普通琼脂斜 面培养基上,于42℃培养4h,铜绿假单胞菌能生长为 阳性反应。
血清学鉴定
血清群鉴定:取洁净玻片,滴加多价O血清于玻片, 再接种此菌的纯培养物少许混匀,2min观察凝集现象, 鉴定。 血清学分型:按血清分型试剂盒操作说明进行操作: 将待检测菌在LB琼脂培养基中过夜培养,取少许与 30μL阳性血清混合,一分钟观察结果。 判定标准:有凝集块出现,且生理盐水空白对照组 不凝集者为阳性。
初步鉴定
选出可疑菌落
金属光泽、β-溶血、产绿色素、特殊气味等
初步鉴定
➢染色镜检:取可疑菌落,进行革兰氏染色、镜检。 ➢氧化酶试验:挑取可疑菌落于滤纸片上,滴加一 滴新配制的5%二甲基对苯二胺试剂,15-30min内, 出现红色至紫红色,为阳性;若不变色,为阴性。
初步鉴定
➢绿脓菌素试验:选取可疑菌落2-3个,置于绿脓菌 素测定用培养基,于37℃培养24h,加入氯仿、色素 后,再加入盐酸 ,上层稀盐酸液内出现红色为阳性, 表示菌落中含有绿脓菌素。
药敏试验
扩散法(K-B法)
➢选用抗菌药物,对分离的细菌进行敏感性试验: ➢药敏片:庆大霉素、环丙沙星、头孢噻肟、链霉素、 恩诺沙星、诺氟沙星、头孢哌酮、青霉素; ➢根据抑菌圈的大小判断病原菌对药物的敏感程度。
生物学特性
形态:革兰氏阴性杆菌, 菌体长短不一 ;单端单鞭 毛;动力阳性;无芽胞。 特性:专性需氧;生长 温度范围是25℃~42℃, 最适生长温度35℃,4℃不 生长。
生物学特性
抗原性: O抗原
H抗原 粘液抗原 R抗原 菌毛抗原
产生荧光素和水溶性的绿脓素,培养物呈蓝 绿色。
生物学特性
在血平板上形成大而扁平、湿润、有金属 光泽、蓝绿色、透明溶血环菌落,有生姜 味; 在普通平板、血平板、麦康凯平板上可形 成5种不同形态的菌落
微生物学检验
检验程序
脓液 痰 尿液等
分离培养
直接涂片、革兰染色、镜检
(血平板、麦康凯)
35℃ 18-24h
可疑菌落(金属光泽、β-溶血、产绿色素、特殊气味)
初步鉴定
革兰阴性 杆菌,氧 化酶阳性
菌落特征 气味 绿脓素
最终鉴定
色素 鉴定
生化 反应
42℃ 生长
分型 (血清学
噬菌体)
药敏试验
报告
试验材料
➢典型型 ➢粘液型 ➢侏儒型 ➢粗糙型 ➢大肠菌样型
生物学特性
典型型(麦百度文库凯平板)
菌落呈灰绿色,大小 不一,扁平湿润,边缘 不规则呈伞状伸展, 表面常可见金属光泽。
生物学特性
典型型(普通平板)
产绿脓素 琼脂染成黄绿色
生物学特性
菌落光滑凸起 成粘液状
粘液型(麦康凯平板) 粘液型(血平板)
生物学特性
病料:痰液标本 试剂:氧化酶纸片,明胶、革兰染色液、药敏 纸片、无菌生理盐水及生化管配套试剂等 培养基:普通平板、血平板、麦康凯平板、半
固体培养基、非发酵菌微量生化管等 其它 :显微镜、培养箱、小试管、载玻片、
接种针、接种环、酒精灯、火柴、平皿等
分离培养
标本采集:脓液、浓痰(无菌拭子) 痰液标本的前处理 加入等量的PH 7.6 的1% 胰酶溶液,放置35℃、 90 min使痰液均质化。 直接涂片,革兰氏染色,镜检 分别接种普通平板、血平板和麦康凯平板,培 养18—24h ,进一步进行鉴定。
铜绿假单胞菌的分离及鉴定
组员:张冲 郭泽 王平
铜绿假单胞菌
实验目的
了解铜绿假单胞菌的微生物学特性 掌握微生物实验技术基本原理及操作 熟悉铜绿假单胞菌的分离鉴定程序及
方法
概述
铜绿假单胞菌惯称绿脓杆菌,为革兰 氏阴性杆菌,属假单胞菌属。它在自然界 分布甚广,空气、水、土壤中均有存在, 在潮湿处可长期生存,对外环境的抵抗力 比其他菌强,抗干燥的能力也强。
最终鉴定
明胶液化试验:选取可疑菌落的纯培养物,穿刺 接种于明胶培养基内,37℃培养24h,取出后放入 冰箱10-30min,如若溶解,即试验呈阳性;如凝固 不溶,试验呈阴性。 硝酸盐还原试验:选取可疑菌落的纯培养物,接 种于硝酸盐培养基,置于37℃培养24h,如若培养 基中的小倒管内有气体,试验呈阳性。