总蛋白试剂盒双缩脲比色法标准操作程序

总蛋白试剂盒（双缩脲比色法）标准操作程序
1. 摘要
本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中的总蛋白含量。

2. 适用范围
程序适用于AU5811自动生化分析仪检测人血清或血浆中的总蛋白含量。

3. 职责
使用AU5811自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法
上海科华生物工程股份有限公司生产的总蛋白试剂盒采用的是双缩脲比色法。

5. 原理
蛋白质中的肽键在碱性条件下，与铜离子反应生成紫红色络合物，并且引起550nm 处吸光度的上升。

由于反应所产生的化合物在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 550nm 处吸光度的变化值与样本中总蛋白的含量成正比。

紫红色络合物蛋白质中的肽键碱性条件−−−→−++2u C
6. 仪器
AU5811自动生化分析仪
7. 试剂
7.1 试剂来源：
上海科华生物工程股份有限公司提供
7.2 试剂瓶内主要成分：
测定：酒石酸钾钠≥5g/L
试剂：硫酸铜≥2g/L 、碘化钾≥1g/L 、NaOH ≥30g/L
校准品：白蛋白 （含量见瓶签）
7.3 试剂稳定性：
未打开试剂在2-8℃避光保存可至失效期。

校准品使用后应密封保存，以免液体挥发。

8. 标准品和质量控制
8.1 校准程序：
使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：
使用罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml
去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

8.3质控数据管理：
按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。

8.4质控判断规则：
按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》
8.5室间质评：
分别参加河北省室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。

9.标本
9.1标本要求：
新鲜无溶血现象的血清，血浆可用肝素或EDTA抗凝。

样本于2-8℃避光保存，可稳定7天，或可冰冻保存，但不能反复冻融。

9.2标本拒收：
由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请单不符状况，一律要求重新留取标本。

9.3标本处理：
收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。

10.测定程序：
10.1分析参数：
详见参数表。

10.2操作步骤：
签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。

10.3获取结果：
在AU5811仪器上或AU5811传送的中文系统电脑上查找相应结果。

10.4结果报告：
对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。

可报告的结果直接发报告，
对不可报告结果进行复检后发报告。

11.计算
标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。

无需手工计算，每个标本的结果自动打印。

12.废液处理
参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。

13.操作性能：
13.1可报告范围：
-100gL；若样本含量超过线性范围，请用生理盐水稀释样本后再测定，结果乘以稀释倍数；
线性相关系数r应不小于；
线性相对偏差应在±15%的范围内。

13.2特异性/干扰：
样本中Vc≤4g/L,血红蛋白≤3g/L,胆红素≤171mol/L对测定结果的影响可忽略。

13.3精密度：
批内精密度 CV≤6%；
批间相对极差≤6%
13.4准确度：
用质控品做样本，其测定结果应在该批质控品规定的范围内。

13.5分析灵敏度：
测定本试剂盒内所附校准品（50g/L），其吸光度变化值应在之间。

14.注意事项：
14.1试剂盒仅用于体外诊断。

14.2使用试剂时请根据实际使用量多少，将试剂倒入干净容器内再测定，其余试剂盖紧
后放回冰箱。

14.3如试剂变浑浊，或以纯化水作空白，试剂在550nm处吸光度大于，请勿使用。

14.4测定结果仅作为各种疾病的临床辅助诊断依据。

14.5本试剂中具有一定腐蚀性，应避免与皮肤及粘膜。

如不慎接触，应用大量清水冲洗，
如误服，应立即上医院诊治。

15.参考范围：
静卧时：60-78g/L;
走动后：64-83g/L;各实验室应建立自己的参考值范围。

16.临床意义：
总蛋白系白蛋白及球蛋白之和，其临床意义决定于白、球蛋白的变化。

增高可见于各种原因失水所致血液浓缩（如腹泻、呕吐、休克、高热），引起球蛋白单克隆或多克隆性增高的疾病（见球蛋白项）；降低见于各种原因引起的血清蛋白质丢失和摄入不足，以及蛋白质合成障碍（见白蛋白项）。

临床上，总蛋白往往和白蛋白一起作为肝硬化的辅助诊断指标。

17.支持性文件：
17.1AU5811自动生化分析仪使用说明书。

17.2AU5811自动生化分析仪分析参数。

17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。

18.参考文献
,.,。