植物细胞组织培养的基本技术(总结版)

本章主要内容

●商业性组织培养实验室和小工厂的设计与主要设备

●培养基及其配制

●外植体的选择与培养

●试管苗的驯化与移载

第一节商业性组织培养实验室和小工厂

的设计与主要设备

●培养皿的清洗；

●培养基的配制、分装和高压灭菌；

●无菌操作——材料的表面灭菌和接种；

●将培养物放到培养室培养；

●试管苗的驯化、移栽和初期管理。

(一)、洗涤室(cleaning room)

●洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。

●室内配备：

●大型水槽，最好是白瓷水槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶。上下水道要畅通。

●备有塑料筐，用于运输培养器皿。

●备有干燥架，用于放置干燥涮净的培养器皿。

(二)、准备室(repairing room)

●完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。准备室要求明亮、通风。

●如果房间较多，可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。洗涤室专门负责试管苗出瓶与

培养器皿的清洗工作；配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。

(三)、缓冲室

●进入无菌室前要在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。

●应当在此室内安装灭菌用的紫外灯。控制无菌室及培养室的配电板等。

(四)、无菌操作室(transfering room)

●接种室是进行植物材料的分离接种及培养物转移的一个重要操作室。其无菌条件的好坏

对组织培养成功与否起重要作用。

●配置：

●在工作方便的前提下，接种室宜小不宜大，一般7-8m2，要求地面、天花板及四壁

尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。

●接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1-2盏紫外线灭菌灯，用以照射

灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对

流。

(五)、培养室(culturing room)

●培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、

数目、及其他附属设备而定。

●设计原则：

●充分利用空间和节省

●能源

●高度比培养架略高为

●宜

●周围墙壁要求有绝热

防火的性能。

(五)、培养室(culturing room)

●培养架大多由金属制成。

●规格：

●一般设5层，最低一层离地高约10 cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左

右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，如采用40W日光灯，则长1.3 m，30 W 的长1m，宽度一般为60cm。

●培养室最重要的因子是温度，一般保持在20-27℃左右，具备产热装置，并安装窗式或

立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70％-80％为好，可安装加湿器。

●控制日光照时间可安装定时开

关钟，一般需要每天光照10-16h。也有的需要连续照明。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。

(六)、驯化室

●驯化室要求清洁无菌，配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器、光照调节装置、

通风口以及必要的杀菌剂。

(七)、温室

●应配有空调机、通风口、加湿器、恒温恒湿控制装置、喷雾装置、光照调节装置以及必

要的杀菌杀虫装置及相应药剂。

二、仪器设备和器皿用具

●常见仪器设备

●1、超净台

●2、无菌箱

●3、空调机

●4、除湿机

●5、恒温箱

●6、烘箱

●7、高压灭菌锅

●8、冰箱

●9、电子分析天平和托盘天平

●10、显微镜及解剖镜

●11、水浴锅

●12、摇床与转床

●13、磁力搅拌器

●14、电蒸馏水器

●15、酸度计

●16、离心机

1、超净台和无菌箱

●1、超净台，优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，准备时间短。开机10分钟

即可操作，可进行长时间使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需要经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。

●2、无菌箱，在投资少的情况下，可以用接种箱来代替超净台。接种箱依靠密闭、药剂

熏蒸和紫外灯照射来保证内部空间无菌。但操作活动受限制，准备时间长，工作效率低。

工作原理

●超净台功率在145-260W左右，它装有小型鼓风机，使空气穿过一个前置过滤器，在这

里把大部分空气尘埃先过滤掉，然后再使空气穿过一个细致的高效过滤器，它除去了大于0．3um的尘埃、细菌和真菌孢子等，最后以较洁净的气流吹到工作台面。超净空气的流速为每分钟24-30m，这已足够防止附近空气袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯对器械等的灼烧消毒。在这样的无菌条件下操作，就可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。

●根据风幕形成的方式，超净台可分为水平式和垂直式二种型号。

（二）各类玻璃器皿

1、培养器皿

2、分注器

3、离心管

4、刻度移液管

5、细菌过滤器

6、实验器皿

1、培养器皿

●1、培养器皿：在组织培养中配制培养基和进行培养需大量的玻璃器皿。要求由碱性溶

解度小的硬质玻璃制成，以保证长期贮存药品及培养的效果；培养用的还要求透光度好，能耐高压高温，能方便放入培养基和培养材料的器皿，根据培养的目的和要求，可以采用不同种类、规格的玻璃器皿。其中以试管、三角瓶、培养皿等使用较多。

●最常使用的是