液相连电化学检测器常见问题解答
高效液相色谱仪使用中常见问题及对策
高效液相色谱仪使用中常见问题及对策高效液相色谱（HPLC）作为一种分离技术和方法，目前已经发展到一个全新的阶段。
高精度的输液泵，应用广泛的色谱分离柱，低噪音、高灵敏度的各种检测器和功能强大的数据处理软件系统的出现，都推动了液相色谱技术的迅猛发展。
液相色谱仪正以它分辨率高、分析速度快和应用广泛的优点倍受仪器分析工作者的青睐，广泛地应用于医药卫生、环境监测、食品检测等领域。
作者本人从事液相色谱分析工作二十多年，应用HPLC技术在血药浓度、生物胺、核苷酸、蛋白质浓度测定等实际工作中，积累了许多的方法和经验，在这里与大家交流，希望能对同行们有所帮助和借鉴，共同促进液相色谱分析技术的发展。
1高效液相色谱仪的基本工作原理高效液相色谱仪如图1所示，是由溶液贮器、高压泵、进样系统、色谱分离柱、检测器和数据处理系统几部分组成。
高压泵从溶液贮器中抽走流动相，流经整个仪器系统，形成密闭的液体流路。
样品通过进样系统注入色谱分离柱，在柱内进行分离。
柱流出液进入检测器，使已被分离的组分逐一被检测器收集，并将响应值转变为电信号后经放大被数据处理系统记录色谱峰，通过数据处理系统对记录的峰值进行存储和计算[1]。
液相色谱仪是依靠色谱柱进行分离的。
研究证明：物质的色谱过程是指物质分子在相对运动的两相（液相和固相）中分配“平衡”的过程。
液相色谱是以具有吸附性质的硅胶颗粒为固定相，各种洗脱液为流动相。
当液体样品在载体流动相的推动下，在液-固两相间作相对运动时，由于各组分在两相中的分配系数（K）不同，则使各自的移动速度不同，即产生差速迁移。
各组分在两相间经过多次分配，从而达到使混合物分离的目的。
上式反映了物质在两相中进行吸附、解吸、再吸附、再解吸…过程中，由于在两相中浓度的不同，而存在分配系数上的差异。
既然分配系数及其差异是引起组分在液相色谱柱分离的根本原因，那么，必然地也会同色谱理论中可测宏观量之间存在着某种定量关系，事实上，色谱理论中通常用容量因子k’的概念来反映物质在两相中的分配关系：k’值可以非常方便地表达组分在两相的分配，又很容易从色谱实验数据中直接测得，是色谱理论中重要的基本参数之一[2]。
电化学实验中容易出现的问题和解决方法
电化学实验中容易出现的问题和解决方法我折腾了好久电化学实验，总算找到点门道。
这电化学实验啊，可真不是那么好搞的，里面容易出的问题老多了。
就说电极那块吧，电极表面要是不干净啊，这实验数据就完全没法看。
我试过好多方法清洗电极，要是普通的脏东西，拿个柔软的布蘸点专门的清洁剂，轻轻擦一擦，就有点像咱们擦眼镜那个感觉，得小心翼翼的，不然容易把电极弄坏喽。
但要是有那种顽固的污染物，单纯这么擦就没有用了。
我就尝试用化学浸泡的方法，就像泡茶一样，把电极泡在特定的溶液里面一会儿。
可是这个溶液浓度和浸泡时间可得把握好喽，我一开始没经验，浓度调太高，泡的时间又太长，结果电极被腐蚀了一部分，实验老是失败。
后来经过好多次尝试，才找到比较合适的浓度和浸泡时长。
还有电解液的问题。
我在制备电解液的时候啊，量取试剂就很容易出错。
有一次微分了刻度，多取了一些试剂，结果导致电解液的浓度配错了，实验结果特别奇怪。
从那以后我就养成个习惯，量取试剂的时候，眼睛死死盯着刻度，还多量几次确保无误。
而且配电解液时搅拌也是个讲究事儿啊，我一开始就随便搅搅，发现电解液各处浓度好像不太均匀，就像一杯咖啡没搅好，底下很甜上面没味似的。
后来我就知道要用稳定的速度搅拌足够长的时间，比如搅拌个三五分钟不等，而且搅拌棒的速度不能太快也不能太慢，太快容易溅出来，太慢就混合不均匀了。
还有实验装置的连接部分，我总是会遇到接触不良的情况。
就像那种插头没插紧一样，松松垮垮的。
比如说导线和电极夹子之间，稍微没夹好，信号传输就不稳定。
我试过好多次，用镊子轻轻调整夹子的位置，确保夹子紧紧地夹住导线，并且在实验过程中还不时去检查看看有没有松动。
在测量数据的时候也容易出岔子。
仪器有时候会受到外界干扰。
有一回在实验室人多的时候做实验，附近有好多仪器在工作，我的电化学测试仪数据就跳动得特别厉害，就像有人在旁边蹦跶捣乱一样。
后来发现是周围仪器产生的磁场或者电场干扰了，之后我做实验就挑人少的时候，远离其他大型仪器去测量，数据就稳定多了。
液相色谱仪常见故障分析及解决要点
液相色谱仪常见故障分析及解决要点液相色谱仪作为一种常用的分析仪器，经常会遇到一些故障。
以下是液相色谱仪常见故障的分析及解决要点：1.噪声增加：可能原因：进样器泄漏、柱床固定不良、柱床老化、流体系统不稳定等。
解决方法：检查进样器和柱床的连接，更换柱床，检查流体系统并重新校准。
2.峰形畸变：可能原因：柱床老化、进样器问题、流体系统堵塞等。
解决方法：更换柱床、清洗进样器、检查流体系统并进行维护。
3.基线漂移：可能原因：溶剂质量不纯、流体系统不稳定、进样器问题等。
解决方法：更换纯净溶剂、检查流体系统并重新校准、清洗进样器。
4.压力异常：可能原因：流体系统堵塞、泵的柱床老化、柱床压力限制等。
解决方法：清洗流体系统、更换柱床、检查柱床的压力限制。
5.进样器问题：可能原因：进样器泄漏、进样器柱床老化、进样器阀门不灵活等。
解决方法：检查进样器的连接，更换进样器柱床，润滑进样器阀门。
6.柱温控制问题：可能原因：柱温控制器故障、柱床老化、温度传感器问题等。
解决方法：更换柱温控制器、更换柱床、校准温度传感器。
7.柱床老化：可能原因：使用时间过长、样品残留、溶剂残留等。
解决方法：更换柱床、进行柱床维护、清洗柱床。
8.溶剂选择错误：可能原因：溶剂质量不纯、溶剂选择不适合分析物等。
解决方法：更换纯净溶剂、重新选择合适的溶剂。
9.柱床堵塞：可能原因：样品残留、溶剂残留、柱床老化等。
解决方法：清洗柱床、更换柱床、进行柱床维护。
10.柱床压力限制：可能原因：柱床老化、流量设置不合理等。
解决方法：更换柱床、重新设置流量。
在解决液相色谱仪常见故障时，需要注意以下要点：确定故障现象，并记录下来，有助于分析和解决问题。
了解仪器的正常工作原理，对比故障现象，定位故障的可能原因。
逐一排除故障可能原因，一步一步进行检查和测试，从最简单的可能原因开始排除。
如果无法解决故障，及时向仪器供应商或相关专家咨询，并提供详细的故障描述和测试结果。
定期进行仪器的维护和保养，包括清洗柱床、更换柱床、校准流量和温度等。
史上最全液相常见问题及解决方法
史上最全液相常见问题及解决方法压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。
从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。
A、没有压力显示，没有流动相流动原因解决方法1、电源问题 1、接通电源，开机2、保险丝被烧坏 2、更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败3、a、采取恰当的设定b、修理或更换控制器4、柱塞杆折断 4、更换柱塞杆5、泵头内有空气 5、溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足 6、a、补充流动相 b、更换入口滤头7、单向阀损坏 7、更换单向阀8、漏液 8、拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示原因解决方法1、仪表损坏 1、更换仪表2、压力传感器损坏 2、更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高 1、调整流速设定2、柱前筛板堵塞 2、a、在允许情况下反冲色谱柱 b、更换筛板 c、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀3、a、使用恰当的流动相 b、冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当 4、选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏 5、清洗或更换进样阀6、柱温过低 6、提高温度7、控制器失常 7、修理或更换控制器8、保护柱阻塞 8、清洗或更换保护柱9、在线过滤器阻塞 9、清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低原因解决方法1、流速设定过低 1、调整流速2、系统漏液 2、确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当 3、选择恰当的色谱柱4、柱温过高 4、降低温度5、控制器失常 5、维修或更换控制器E、压力不断上升原因解决方法1、见列表C 1、见列表CF、压力降为零原因解决方法1、见列表A、B 1、见列表A、BG、压力不断下降，但不回零原因解决方法1、见列表D 1、见列表DH、压力波动原因解决方法1、泵中有气体 1、a、溶剂脱气 b、从泵中除去气体2、单向阀损坏 2、更换单向阀3、泵密封损坏 3、更换泵密封4、脱气不充分4、a、溶剂脱气b、改变脱气方法（使用在线脱气法等）5、系统漏液 5、确定漏液位置并维修6、使用梯度洗脱 6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。
液相常见问题及解决方法
液相常见问题及解决方法问题1：液相困扰人群广泛且珍贵液相是化学实验中常见的一种分析技术，它广泛应用于各个领域。
然而，在进行液相分析时，常常出现一些问题，影响了实验结果的准确性和稳定性。
以下是液相常见问题及解决方法的一些示例：问题1.1：样品制备不足导致分析结果不准确•问题描述：样品制备不足是液相实验中常见的问题之一。
样品制备不足可能导致分析结果偏低或波动大，影响实验结果的可靠性。
•解决方法：1.确保样品制备过程中的各个步骤严格按照标准操作进行，避免操作失误。
2.采用适当的提取方法和提取溶剂，确保样品中目标成分的充分提取。
3.样品制备前要进行充分的前处理，如过滤和稀释等，以避免可能影响分析的干扰物质。
问题1.2：柱寿命短导致分离效果下降•问题描述：在液相分析中，柱寿命是一个重要的指标。
柱寿命短可能导致分离效果下降，分析结果不准确。
•解决方法：1.使用高质量的液相色谱柱，选择具有较长寿命的柱材料和填料，以提高柱寿命。
2.避免使用过高的流速和压力，以减少对柱的损伤。
3.注意样品的准备和预处理，以减少对柱的污染。
问题1.3：溶剂残留影响结果准确性•问题描述：溶剂残留是液相实验中常见的问题之一。
溶剂残留可能会干扰分析结果，影响结果的准确性。
•解决方法：1.在制备溶剂和洗涤溶剂时，选择纯度高、溶剂残留低的溶剂。
2.采用适当的溶剂饱和度和流速，以避免溶剂残留的问题。
3.在分析前，进行合适的样品预处理，如蒸发浓缩和固相萃取等，以减少溶剂残留的影响。
问题2：常见的仪器故障及解决方法液相实验中，仪器故障是常见的问题之一。
仪器故障可能导致实验无法进行或结果不可靠。
以下是常见的仪器故障及解决方法的示例：问题2.1：泵压不稳定导致结果波动大•问题描述：泵压不稳定是液相实验中常见的问题之一。
泵压不稳定可能导致分析结果波动大，影响分析结果的可靠性。
•解决方法：1.检查液相泵的密封件是否正常，是否需要更换。
2.确保供液系统中的气泡被完全排除，以避免泵压波动。
液相常见问题及解决方法的重新叙述
液相常见问题及解决方法的重新叙述液相常见问题及解决方法的重新叙述在分析化学和相关实验室工作中，液相色谱法（Liquid Chromatography, LC）是一种常见的技术。
液相色谱法在分离、纯化和定量分析溶液中各种化学物质方面发挥了重要的作用。
然而，液相色谱法的运行过程中可能遇到一系列常见问题。
本文将深入探讨这些问题的根源，并提供解决方法，以帮助读者更好地理解和解决实验中的困扰。
在进行液相色谱实验中，常见问题包括但不限于：峰形异常、峰分离不佳、峰异常增宽或改变、基线扰动、背景噪声等。
这些问题可能导致结果的不准确性和可靠性下降，因此需要及时解决。
以下是这些问题可能的根源和解决方法的详细讨论：1. 峰形异常峰形异常可能包括前峰展宽、尾峰畸变或裂峰等，这些问题可能与样品、色谱柱或流动相有关。
首先，需要检查样品是否存在溶解度或稳定性问题，并尝试调整浓度或使用合适的溶剂。
其次，可能是色谱柱出现了问题，可以尝试更换色谱柱或清洗柱后再次使用。
最后，如果问题仍然存在，可能需要调整流动相的配比或流速。
2. 峰分离不佳峰分离不佳可能是由于样品混杂物过多引起的。
在这种情况下，应该考虑调整样品预处理方法，如提取、洗脱或稀释，以减少混杂物的影响。
另外，可能需要优化流动相的组成和梯度程序，以改善分离效果。
3. 峰异常增宽或改变峰异常增宽或改变可能与色谱柱老化或样品组分变化有关。
如果色谱柱使用时间较长或峰形发生变化，可能需要更换柱子。
另外，需要检查样品是否发生了化学变化或降解，并在必要时进行适当的样品处理和分析条件优化。
4. 基线扰动基线扰动可能是由于流动相中有气泡、杂质或水平调节问题引起的。
首先，需要检查流动相中是否存在气泡，并排除气泡的干扰。
其次，可能需要过滤流动相以去除杂质。
最后，检查液相色谱仪的水平调节，确保仪器平稳运行。
5. 背景噪声背景噪声可能是由于仪器故障、流动相污染或采样问题引起的。
在这种情况下，需要检查仪器的状态，并进行必要的维护和校准。
安捷伦液相色谱使用问题与解决方案 Agilent LC 问题与答案
安捷伦液相色谱使用问题与解决方案 Agilent LC 问题与答案1 如何成为真正的液相高手1。
一定要珍惜仪器厂商提供的各种培训，因为他们的培训很有针对性，而且很专业。
2 。
要多做，液相是一个比较复杂的系统，在做样的过程中，总会遇到各种问题，通过自己的大脑解决问题，慢慢积累就会穴道很多东西。
其次要敢于动手，不要总担心会把仪器弄坏，拆仪器的时候细心一点就好了，记着各个部件的顺序，连接方式。
动手次数多了，成功的机会就多了，也就更有信心了。
3。
要看一些相关理论的书籍，要了解一些关于液相的分离原理，如何优化色谱系统和峰形，能够自己解决一些分离的问题。
这样才是一个液相高手。
如果只是会很熟练的使用工作站和维修仪器，排除故障，我觉得这只是一个操作高手，而不是一个真正的液相高手。
2 新装82341 GPIB 板，如何与ChemStation 通讯?在 LC ChemStation CD-ROM 中有安装说明，还包括驱动程序安装信息。
请在Windows® Explorer 中查看子目录： \Manuals\Installation\LC Systems。
您在此处可找到《安装手册》，其中包含有关如何安装 GPIB 板以及如何调用驱动程序的逐步操作说明。
3 为什么进样后在工作站在线图谱上看不到红色开始线？ChemStation 软件有一个“在线图谱”窗口，在此窗口中可显示从所连接的检测器接收到的所有信号。
当进样样品时，会在“在线图谱”窗口中显示一条竖直的红色“开始线”。
这条红色线标志着启动该软件进行原始数据的收集。
如果不显示这条红色线，则不会收集数据。
如果不显示“开始线”，请检查检测器上的遥控电缆（如果是 1050 或 1090 系列液相色谱仪的话）。
如果缺少遥控电缆，则需要进行安装。
如果安装了模-数转换箱或板 (35900 ADC)，则需要从模-数转换设备到液相色谱仪拉一根遥控电缆。
检查所有的 CAN 电缆，确保它们都连接到 1100 系列液相色谱仪上4 完美的波长如何选择做一个新的方法，关键是选择好的仪器条件，更关键的是波长正确。
液相连电化学检测器常见问题解答
HPLC中电化学检测器使用时的常见问题解答一,如果基线噪音大或发生漂移(不稳)该怎样处理.基线噪音大或飘移一般与高背景本底电流有关,而使背景电流变大的因素很多.下面例举一些有可能引发HPLC-ECD系统背景电流变大的因素.而除了大的背景电流外还有别的因素可引起噪音.千万记住,下面例举的因素仅是一部分可能的因素,而且电化学电池本身不会产生特别的背景电流.背景电流是因分析条件,系统性能,已使用电化学电池的时间长短和处理电化学电池方法的不同而产生.引发高本底电流的一般因素:水!HPLC-ECD系统中使用的水非常关键,要求每厘米的阻抗必须大于或等于18 兆欧姆.因而建议水要进一步的纯化,通过一种被称作洗水的过程.(参考ESA的技术说明"Wat er Polishing"文件目录号:70-1668)制备样品或制作流动相时使用了不纯(或被污染)的化学药品.样品本身也许就是污染源.氧化铝或在萃取时带入的杂质有可能会进入HPLC系统,从而污染色谱柱和电极.流动相中的电化学活性试剂(如:EDTA,TEA).EDTA 是流动相中经常使用的一种试剂,用于螯合氧化的金属离子,可降低本底电流.在电势大于400毫伏时,这种化合物(EDTA)具有很高的电化学活性.如果工作电势大于400毫伏,流动相中就不能再使用EDTA而应改用柠檬酸盐来代替.TEA(三乙醇胺)是用来改善色谱峰的峰形.这种添加剂会含有电化学活性的杂质,在高电势时这种杂质会发生特别的氧化反应.因此要用最小量的TEA,典型的用量小于100 L/L或者对HPLC的色谱柱没有活性的用量.系统中的不锈钢管可能被腐蚀.进入系统的污染物或腐蚀处的脏物可能引起电化学电池受污染(淤塞)或本底电流变大.建议用不锈钢管的用户需定期钝化系统管路或者换用PEEK管.PEEK管可直接从ESA购买.如果脉冲阻尼器破裂,会有污染物进入系统,导致增大背景电流或压力升高.其它引起噪音或漂移的来源:泵头里有溶解于流动相中气体.泵压的波动通常与此有关.要确保流动相被很好的脱气.把泵停下来,等压力下降后,然后把泵清洗(purge)30秒.流动相在进入系统使用前要脱气(详情见下面的第6点)电化学电池中有溶解在流动相中的气体.要确保流动相被充分脱气.带清洗头的电化学电池(如:5014B和5041型电化学电池)在使用前可能没有被很好的清洗.安培法电化学电极(如:5040和5041型电化学电池)有可能在目标电极处有小的泄漏.这主要是由安装垫圈和电极失误造成的.要牢记电极不能装的太紧,同时要确保在装配前所有部件必须完全是干燥的.二,怎样清洗电化学电极参见技术说明"Prolonging Cell Performance"( 文件目录号:70-5017). 它包含文字指导和技术说明以保障电化学电极在最好的状态下工作.三,关闭系统时应注意什么关闭电化学电极的电势. 用适当的洗液清洗整个系统(看下面的注意).在电化学电极关闭和泵中的液体停止流动时,并非系统中的所有设备都必须得断电.如果系统需长期存放建议断掉所有设备的电源.注意:对于HPLC-ECD系统,设备的断电程序因其需停机时间长短不一而不同. 下面是不同情况下合理的断电程序四,停机一晚上非梯度系统--如果每天都在用此系统,应让ECD系统一直开着.在此情况下,关掉电化学电极并让流动相以0.1mL/min 的低流速循环(看下面的第4点).梯度系统--对于梯度系统你不能再循环.而应使A和B各以50%的量组成流动相并使其总流速为0.025mL/min运行系统, 流动相排到废液中.五,长期停机彻底冲洗系统以洗掉盐类物质.建议使用的冲洗剂应与实验时用的流动相一致,只是不再含有缓冲剂或盐类添加剂(如有机溶液和水).注意!如果水或低浓度的有机溶液留在HPLC系统中时间很长有可能发生霉变并导致别的一些问题.对于硅填料的反向柱,水可能导致在线柱停留20到30分钟不能被使用.在冲洗完盐后,建议用柱子的生产厂家推荐的保存液再冲洗柱子,然后取出柱子并盖好盖子以防柱子变干.如果存放时间超过几个月,系统也应封存好.注意:大部分EC应用的缓冲液盐浓度在50-100mM.如果没有流动,便有盐在HPLC系统中沉淀.此沉淀能引起高的背压和鬼峰及其它问题. 另外,没有有机溶液(如:甲醇)的水性溶液易长菌.为防止长菌,ESA推荐使用有杀菌作用的试剂如MB(产品号:70-1025).六, 为什么要用孔径为0.22 m的尼龙过滤器过滤流动相和样品使用孔径为0.22 m的过滤器有两个主要原因.第一个原因是要滤去流动相中微粒以减少柱子的堵塞机会.第二个原因是库仑电化学电池里的工作电极是由多孔石墨制成的.石墨孔径大约为0.2 m.为防止多孔石墨被微粒堵塞我们强力推荐使用孔径为0.22 m 的过滤器.另外,过滤器要放在电化学电池的前面,为保护电化学电池一定要在线过滤.过滤器不是很贵,如果被堵住很容易被更换.过滤器架子(产品号: 70-0893)石墨过滤膜(用于进样器前)(产品号: 70-0898)Peek过滤膜(用于进样器后)(产品号:70-3824)七,可以让加电势的状态处于"On"一晚上吗只要HPLC-ECD 系统中的流动相(包含缓冲盐)一直处于流动状态是可以的.一些用户让系统运行,这取决于系统所需的平衡时间.若系统一直在运行,那么在跑样品前不需要平衡时间.然而,如果晚间泵出了故障,而电势依然加在没有流动相流动的电化学电极上,必然会损坏电化学电极.请注意,如果对灵敏度的要求不高,如果所需平衡时间很短,在不运行系统时,最好关掉电化学电极或者使加在其上的电势为0 mV .这样通过减少电化学电极的工作时间和工作电流就可有效延长电化学电极的寿命,尤其是需要运行在高电势的情况下更应如此.八, 当我的基线以周期性的方式发生波动时我该怎么做当基线以周期性的方式波动时此基线可描绘成锯齿状.人们经常会将噪音问题归罪于电化学电池.而事实上EC 电化学电池很少引起这种周期性的噪音.大多数情况是这种噪音是由泵的问题引起的.可以通过测量锯齿波噪音的峰头和峰谷(或两峰头) 间的距离来检测这种噪音是否由泵引起.先测出峰间距(设为D1),再把液相流速降为原来的一半后再测出峰间距(设为D2),如果D2与D1接近两倍关系,就可断定是泵出了问题.引发泵产生这种噪音的因素有很多,下面是四个最易产生的因素:1.止回阀堵塞---参考泵的使用手册2.泵头中有气体---灌注和清洗(purge)泵系统,赶出其中的气体3.堵住了流动相的入口或管子入口4.泵的局限性**注意:由于在设计上不同泵产生无脉动基线的能力不同,在进行高灵敏度测量时一定要注意.电化学检测器比紫外检测器对噪音更敏感,故适用于紫外检测器的无脉冲基线的泵并不一定能适用于具有高灵敏度的EC检测器的应用.为尽量减小基线波动噪音,应在泵后装一个脉冲阻尼器,使基线更平稳.小心!在装脉冲阻尼器之前一定要先询问泵的生产厂商.有些泵是不能装脉冲阻尼器的.九,PH值会对电化学电极的响应有什么影响在大多数情况下,低pH值(酸性环境)将能有效阻止有些分析物质被氧化.在低pH值环境,测量时物质氧化所需的电势会比中性或碱性环境高.反过来也是对的,高的pH 值或(碱性环境)将有利于分析物质的氧化.注意:在大多数情况下低pH 值环境是用来防止分析物质(如:儿茶酚胺)自氧化.千万记住,选择不同的pH值将会影响化学分离,尤其是用色谱柱洗脱时的顺序.一般来讲不要太注重pH值对电极较高响应的影响,而应保证在自氧化最小的情况使被分析物质得到有效分离.建立伏安曲线(CV 曲线)将有助于优化分析物质的响应.本文档的#8问题包含有关伏安曲线的信息.十,我怎样确定能产生最大响应的最佳电势注意:这一过程假设色谱条件不会变(如:能达到物质分离的一个稳定的色谱方法).这一过程也要求操作者拥有电化学理论知识,懂得伏安曲线和操作Couloc hem的基本知识.可参考Coulochem II操作手册中6.3,6.4a,和6.4b有关动态伏安曲线的情况.1.根据待分析物的情况设置HPLC-EC系统2.打开电化学电极,给电极加电势并要比文献提供的待分析物所需电势高出100 mV并让它平衡3.给没有最优化的通道加电势到-200mV(记住每次只能优化一个电极.设定电极的电势为-200mV,基本可以消除正在该电极上氧化的物质)4. 做一次已知浓度的标准物质的进样.注意:标准物应是浓缩的(如:柱内有10到50 ng),但不要在或靠近检测器的检测限进行测定. 以你认为能产生最大响应的电势跑一下此标准物将是非常重要的.5.调整Coulochem上的增益或R值使你感兴趣的峰落在你所选范围的70~ 80%的区域内注意:调整增益使峰变大并易观察但不能超出量程范围.一旦增益或R值被设定,那么在整个过程中它们都得保持不变对库仑阵列电化学检测器(CoulArray)来说,会自动调节量程范围,所以无需选择.6.接下来,加电势到感兴趣电极,并且电势值要比前面进样时低50mV.让基线稳定下来并使检测器自动归零.7.一旦基线稳定下来就可以进标准样.确保色谱图是完整的和可以接受的.记录最终的高度和面积.8.每次把电势减少50mV重复上面的6和7直到看不见峰高和峰面积为止.9.以峰高为Y 轴,所加电势为X轴,分别画出每种化合物的变化曲线.10.在您的方法中,当电势增加时,峰高和峰面积已达到最大,增加电势不会再增加峰高和峰面积时,应选择能达到最大面积时所需的最低电势作为工作电势(如:如果获得最大峰响应的电势为450, 500 and550mV, 选择400mV为工作电势).十一,对于我的电化学电极,pH操作范围应是多少对于大部分情况,操作环境的pH范围在1-12都不会损坏电化学电池或其部件.但是,当使用极端pH时,一定要多加注意.要意识到pH呈碱性和大的背景电流同时作用将损坏电化学电池.还有,色谱柱对pH值的限制要求也要特别注意.一定要确保色谱柱适于你的pH环境,否则,不适宜的pH将使色谱柱的填料有可能进入测量系统污染或损坏电化学电极.十二,多久更换一次过滤膜理想的色谱条件下过滤膜是不需要更换的,然而在实际中因其被堵塞,是一定要定期更换的.更换频率视流动相和样品中的颗粒物质进入系统的情况而定.压力的增大提示我们,或许是应换过滤膜的时候了. 建议每天使用系统时都要做压力变化的日志.要检查系统压力开始升高是否是系统上的第一个过滤膜引起的.等待压力的下降.在系统内还有压力时不要拆除HPLC 系统.断开过滤器后面的管道,让流动相流过过滤器.记录此时的压力后拆除过滤器,再记录压力值,然后用前面的记录值减去此值.如果差值大于8-10 bar(或100 psi),就应换掉这个过滤膜.用同样的方式检查其它的过滤膜.注意!拆除过滤器前,一定要确保电化学电池被断开和系统压力低于10 bar.如果过滤膜需更换的频率过于频繁,就要对系统进行进一步的检查.可根据下面的方法确定堵塞过滤膜的颗粒来源.如果泵后面的过滤膜需经常更换,说明流动相(包括长菌)或泵的密封圈有可能出了问题;如果进样器后面的过滤膜需经常更换,说明样品有可能有问题;如果柱子后面的过滤膜需经常更换,说明问题可能出自柱子.虽然记住这些将会得到解决问题的很好指导,但也不是绝对的.当处理HPLC 系统的压力问题时,一定要充分做好系统分析和逻辑思考,尽量想到各方面的可能性.十三,我能用硝酸清洗电化学电极吗不建议用硝酸清洗电化学电极.只有在其它方法处理不再有效时,才用硝酸做电化学电极的最后一次清洗. 决不能让色谱柱接触硝酸.有关电化学电极的清洗说明请参见Coulometric Sensor Technical Note文献号:70-1989.当用硝酸处理电化学电极时决不能给其施加电势.用硝酸清洗电化学电极将使电化学电极的所有保修为无效.可用6N硝酸来清洗或钝化EC-HPLC系统的不锈钢件.有关用硝酸清洗电化学电极的指导说明可参见Coulochem II 操作手册的8.5部分. 如果用硝酸钝化HPLC系统中的不锈钢件, 可参见Coulochem I I 操作手册的4.3部分.十四,阀门的故障处理造成两次进样所得的峰响应不太一致的原因可能是因进样方法或进样器有问题.。
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法
每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！------ 一定得做！新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。
卡套柱的安装（不加预柱）1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套（见左图）3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。
不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。
卡套柱的安装（加预柱）1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯（见左图）3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4．将"子弹头"预柱放入卡套片内5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端7．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱）注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。
1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
液相色谱使用中的常见细节问题 液相色谱常见问题解决方法
液相色谱使用中的常见细节问题液相色谱常见问题解决方法液相色谱对于多数人来说都是很好上手的仪器了，但是就算是用过几年、阅历丰富的分析员都会习惯于一些错误的操作（师傅教错了？），常常导致一些仪器故障。
便利快捷的分析过程当然紧要，但是为了多做样品而疏忽了一些必不可少的步骤，往往得不偿失，哪些操作不能做？哪些懒儿不能偷？那些小概率的故障师傅没教怎么办？液相使用过程中有哪四大关键因素要注意？本文一一告知你哦！流动相不过滤。
由于尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。
流动相在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可接受Millipore滤膜（0.2m 或0.45m）等滤器。
泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。
输液泵的滤器应常常清洗或更换。
使用后没有适时清洗泵流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。
假如将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。
因此，必需泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇—水）。
流动相走空。
泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，zui终产生漏液。
没有流动相流出，又无压力指示怎么办？可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量（如5ml/min）下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮忙抽出气体。
另一个可能原因是密封环磨损，需更换。
压力和流量不稳了？原因可能是气泡，需要排出；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。
有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或繁殖的微生物部分堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）内快速除去微生物，或将盐溶解，再立刻清洗。
高效液相色谱常见故障及解决方案
系统泄漏
检查并进行维修
现象 判断
流动相脱气不够 充分
保留时
间不断 变化
室温变化
柱恒温箱设置有 误
故障排除
清洗溶剂贮液瓶、清 洗溶剂入口过滤器、 使用HPLC级试剂 使用柱温箱、将系统 置于恒温、空气对流 小的环境
设置正确的温度
现象
10.基线漂移
判断 系统不稳或没有 达到平衡
室温不稳
基线漂
移
流动相污染或分
检查泵入口管路
关掉仪器，检查干扰 是否来自于外部
三、从数据结果中分析
1.定量结果
现象 判断
样品预处理时样 品降解或混入杂 精密度 质 降低 保留时间改变， 峰形不正常
检测器响应故障
故障排除
用标准品对照、检查 样品处理过程，换新 样品 见“峰形不正常”的 故障排除方法
检查检测器
现象 判断
故障排除
峰积分不正确 重新设置参数
检测池被污染或
无规则 基线噪 系统内有气泡 音
检测器内有气泡
检测器灯能量不 足
故障排除
维修或更换混合器
用甲醇或其他强极性 的溶剂冲洗流通池 用强极性的溶剂清洗 系统 清洗检测器，在检测 器后面安装背景压力 调节器
更换灯
现象
12.规则基线噪音
判断
流动相、检测器 或泵内有气泡
规则基 室温不稳 线噪音
流动相回收使用
用标准品对照、检查 样品处理过程，换新 样品
样品密封保存在适当 的温度下
现象 判断
故障排除
准确度 样品前处理不当 检查样品的处理过程 降低 内标物配置不当 配置新的内标物
现象
2.定性结果
判断
改变保留时间 峰不能 分辨 数据处理装置的
高效液相色谱仪使用遇到的问题及对策
高效液相色谱仪使用遇到的问题及对策1高效液相色谱仪的基本工作原理高效液相色谱仪是由溶液贮器、高压泵、进样系统、色谱分离柱、检测器和数据处理系统几部分组成。
高压泵从溶液贮器中抽走流动相，流经整个仪器系统，形成密闭的液体流路。
样品通过进样系统注入色谱分离柱，在柱内进行分离。
柱流出液进入检测器，使已被分离的组分逐一被检测器收集，并将响应值转变为电信号后经放大被数据处理系统记录色谱峰，通过数据处理系统对记录的峰值进行存储和计算。
2输液泵的常见故障及对策输液泵/高压泵是保证HPLC系统流路畅通、流量精确和压力稳定的重要仪器部件，目前多用往复式恒流柱塞泵，主要由柱塞杆、密封垫圈和两个单向阀组成，用马达带动凸轮驱动柱塞杆作吸液和排液的往复运动。
常分为单柱塞泵、并联柱塞泵、串联柱塞泵和柱塞隔膜泵等类型。
流动相混合方式分为低压混合和高压混合。
常见泵的故障主要有以下几种，并提供解决的办法。
2．1单向阀故障由于球与阀座密封不严，液体倒流，造成压力不稳，甚至球与阀座粘在一起阻死。
密封不严主要是污染或气泡引起，球与阀座粘连也是由于污染和磨损造成。
为避免单向阀中的宝石球和阀座被污染，流动相应使用HPLC级的溶剂，并且配好的流动相一定要用0．45u 滤膜过滤和脱气。
如果泵被微粒污染，可分别用水、甲醇、异丙醇、二氯甲烷依次冲洗。
冲洗时应打开泄液阀，最后再用所用的溶液冲洗整个系统。
气泡进入阀中会紧贴在阀体的一侧，使宝石球难返回到阀座，引起倒流，泵的压力和流速会明显改变。
此时，应立即打开泄液阀，大流量（2ml/min）冲洗泵，直至排除液为直线型。
因为甲醇可润湿泵内壁，挤出气泡，故也可使用脱过气的甲醇冲洗泵。
长期不用的泵或新装的泵头应该用甲醇赶气泡。
泵进气泡也可在泵头上排气泡，即用扳手固定住进气泡的泵头，拧开输出管道的压帽，手动泵送液，可见到气泡从孔中挤压出来，直至无气泡排出将压帽拧紧[3]。
采取上述办法仍不能使压力稳定，应考虑是否密封垫坏了？或单向阀磨损、球不光滑等，需更换部件。
高效液相色谱法常见故障排除
高效液相色谱法常见故障排除所长办公室文毅日前，本人参加了高效液相色谱维修、维护及常见故障排除的培训班，现将培训内容总结如下，希望对大家的实际工作有所帮助！一、检测器常见故障排除1、基线噪声·检测池窗口污染：用强溶剂冲洗检测池；卸下检测池，拆开清洗或更换池窗石英片。
·样品池中有气泡：突然加大流量赶出气泡；在检测池出口端加一反压（0.2-0.3MPa）连一个0.3mm×1～2m的不锈钢管，以增大池内压（增加压力不要过大，防止检测池石英片碎裂）。
·检测器或数据采集系统接地不良：拆去原来的接地线，重新连接。
·检测器光源故障：检查氘灯或钨灯设定状态；检查灯使用时间、灯能量、开启次数；更换氘灯或钨灯。
·液体泄露：拧紧或更换连接件。
·很小的气泡通过检测池：流动相要仔细脱气；加大检测池的背压；系统检漏；有微粒通过检测池，清洗检测池；检查色谱柱出口筛板。
2、基线漂移·检测池窗口污染：同基线噪声描述。
·色谱柱污染或固定相流失：更换色谱柱或使用保护柱。
·检测器温度变化：系统恒温。
·光源故障：更换氘灯或钨灯。
·原先的流动相没有完全除去。
·溶剂储液瓶污染：清洗溶剂瓶，用新流动相平衡系统。
·强吸附组分从色谱柱中洗脱：在下一次分离之前用强洗脱能力的溶剂冲洗色谱柱；使用溶剂梯度。
3、工作站上出现大的尖峰·检测池内有气泡通过：溶剂脱气并彻底冲洗系统；检查连接系统是否漏液。
·记录仪或检测器接地不良：消除噪声来源；确保良好接地。
·样品溶解不彻底。
4、负峰·检测器输出信号的极性相反。
·样品的吸收小于流动相，流动相不纯。
·样品溶剂干扰。
·示差折光检测器中样品的折射率较低。
·进样中带入气泡。
5、鬼峰或假峰·进样阀或注射器污染·样品溶剂与流动相不同·样品中有空气·流动相中杂质引起·在线过滤器或过滤沉子污染·溶剂储液瓶污染6、工作站不回零⑴记录仪或工作站信号阶梯式上升·检测器的输出范围设定不当：重新设定检测器的输出范围。
高效液相色谱仪检测器的故障排除
高效液相色谱仪检测器的故障排除高效液相色谱仪（HPLC）是现代分析化学中常用的一种分离技术，它通过分离样品中的化合物并采集数据来分析和确定它们的成分。
HPLC系统由多个部分组成，其中检测器是其中一个主要部分。
然而，由于使用寿命、错误操作或其他原因，检测器可能会导致问题或故障。
因此，了解HPLC检测器的常见问题和解决方法非常重要。
故障1：检测器灵敏度降低如果HPLC检测器的灵敏度降低，可以从以下几个方面来排查故障：1.检查流量：确保流量是正确的，因为低流量可能会使灵敏度降低。
2.检查泵：如果泵压力不够，可能会导致流量降低，从而影响灵敏度。
检查泵的相关参数是否正确。
3.检查透镜：透镜污垢可能影响灵敏度。
清洁透镜并使用相应的清洁工具。
4.更换柱：如果柱上的杂质或化合物过多，可能会影响灵敏度。
更换柱子或好好清洗。
故障2：检测器基线不稳HPLC检测器的基线不稳可能会导致灵敏度分析误差。
以下是排除这种问题的诸多方法：1.调试消除氧化物：如果液相色谱中的溶解氧含量过高，则可能导致检测器基线波动。
使用氮气或氦气除去氧气。
2.重新校准检测器：重新校准检测器可以消除基线不稳的问题。
3.检查增益通道：增益通道可以有助于确定分析结果。
确保增益通道设置正确。
4.检查积分时间：积分时间过长或过短可能会导致基线不稳。
根据实验需要更改积分时间。
故障3：检测器信号无法输出如果HPLC检测器的信号无法正常输出，可能是由以下原因导致：1.检查连接：连接从检测器到计算机的电缆可能松动。
松动连接会导致信号无法输出。
2.检查电缆：需要检查电缆本身是否损坏或老化。
3.检查计算机设置：检查数据系统是否设置正确。
故障4：检测器信号异常HPLC检测器的信号异常可能会导致实验结果不准确。
以下是检查信号异常的一些方法：1.检查波形：检查波形是否正常或者是否出现跳跃。
2.检查阻塞：检查柱是否堵塞，发现堵塞需要更换柱。
3.检查管路：检查固定管路是否出现松动等不正常情况。
液相常见问题及解决方法
液相常见问题及解决方法液相技术是化学和生物学研究中常用的分离和纯化方法。
然而，在液相实验中，常常会遇到各种问题。
本文将介绍液相实验中常见的问题及其解决方法，帮助读者更好地进行实验。
1. 样品溶解不彻底问题描述：在液相实验中，有时样品无法完全溶解，导致分析结果不准确或无法得到预期的结果。
解决方法： - 加热：将样品加热到适当温度，有助于提高溶解度。
- 使用溶剂辅助溶解：使用适当的溶剂辅助样品的溶解。
可以尝试不同比例的混合溶剂。
-超声处理：使用超声波处理仪器进行样品处理，能够增加样品与溶剂之间的接触面积，促进溶解。
- 搅拌：使用磁力搅拌器或振荡器等设备进行搅拌，有助于加速样品与溶剂的混合。
2. 色谱柱压力过高问题描述：在色谱柱操作过程中，发现色谱柱的压力异常高，可能导致柱子破裂或分析结果不准确。
解决方法： - 检查进样量：减少样品进样量，避免过高的样品负荷。
- 检查流速：降低流速，可以减少柱子内部的阻力，从而降低压力。
- 更换柱头过滤器：如果柱头过滤器堵塞，也会导致压力升高。
及时更换过滤器。
- 检查固定相状况：如果固定相老化或受污染，也会导致压力升高。
及时更换固定相。
3. 色谱峰形状异常问题描述：在液相色谱分析中，有时会出现色谱峰形状异常的情况，如尾峰、分离不良等。
解决方法： - 调整流速和梯度程序：适当调整流速和梯度程序可以改善色谱峰形状。
较低的流速和合理的梯度程序可以提高分离效果。
- 更换柱子：如果柱子老化或受污染，也会导致色谱峰形状异常。
及时更换柱子。
- 检查进样量：过高的进样量可能导致色谱峰形状异常。
减少进样量可以改善峰形。
- 检查溶剂：溶剂的质量和纯度也会影响色谱峰形状。
使用高质量和纯度的溶剂。
4. 色谱峰漂移问题描述：在液相色谱分析中，有时会出现色谱峰漂移的情况，即色谱峰位置发生变化。
解决方法： - 检查流速和梯度程序：适当调整流速和梯度程序可以减少色谱峰漂移。
较低的流速和合理的梯度程序可以提高分离效果。
高效液相常见问题及解决
高效液相色谱仪使用中常见问题及解决方法●高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。
●常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。
其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在345kPa 以内或在50PSI（针对Waters高效液相色谱仪）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，1、一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应该分段进行检查。
(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI以下，过滤白头正常，在检查；(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。
安捷伦液相色谱仪常见故障及相应解决方法 液相色谱常见问题解决方法
安捷伦液相色谱仪常见故障及相应解决方法液相色谱常见问题解决方法一、液相色谱仪峰分叉怎么回事？造成这种情况的原因一般是色谱柱被污染，或柱头填料塌陷导致的。
对于*种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
如冲洗后仍旧出峰不佳，则考虑第二种情况。
对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。
去除硬结部分（污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。
柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。
二、如何排出液相色谱仪气泡溢出的故障？流动相内产生都无法清除不断产生的气泡，紧要是由于过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，堵塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。
过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，连续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。
打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。
即可将过滤器清洗干净。
关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。
三、自检时，为什么有时会显现“钨灯能量低”的错误？一般来说，原因是系统中有挡光物，光路偏离，钨灯电源系统或钨灯灯泡已坏。
这时首先要检查光度室是否有挡光物；打开检测器光源室盖，检查氘灯是否点亮；假如氘灯不亮，则关机，更换新氘灯，换时，需注意型号；检查氘灯保险丝，看是否松动、氧化、烧断；假如故障，应立刻更换；再开机重新自检；若仍显现上述故障，则重新安装软件后再进行自检。
安捷伦液相常见问题
安捷伦液相常见问题1.常见⾊谱故障——压⼒波动可能原因：溶剂进⼝过滤芯堵塞；溶剂未脱⽓；泵的密封垫⽼化；出⼝单向阀失效；主动阀失效。
最常见原因：泵内有⽓泡2.常见⾊谱故障——压⼒过低可能原因：溶剂进⼝过滤芯堵塞；连接管路泄漏或其它备件（泵头密封垫）；溶剂或流速改变；主动阀失灵；四元⽐例阀失灵；单向出⼝阀失灵；⾊谱柱失效（固定相流失）。
3.常见⾊谱故障——压⼒过⾼可能原因：柱⼦进⼝过滤芯被污染；PURGE（排⽓）阀过滤芯被污染；⾊谱柱被污染；连接管路，尤其是针座⽑细管堵塞；进样器旋转密封阀被堵塞；进样针或针座被阻塞4.常见⾊谱故障——基线噪⾳是—检测器？基线噪⾳——停泵——噪⾳是否依然存在---否—泵或流动相？其它要考虑的问题：是否改变了流动相的组成？是否改变了检测波长？在你的仪器上使⽤的最后的流动相是什么？流动相是否相溶？流动相是否⼲净？如何排除流动相中的⽓泡？如何排出流动池中的⽓泡？避免流动相中产⽣⽓泡的最佳⽅式是将流动相经脱⽓装置进⾏脱⽓。
如果没有脱⽓装置，则可以在流动相溶剂瓶中通⼊氦⽓进⾏脱⽓。
也可以在检测器的出⼝端加⼀根细管线以调节流动池中的背压，但必须注意不要超过流动池的最⼤压⼒，否则会造成流动池漏液或流动池损坏。
如果流动池中出现⽓泡，则先摘下⾊谱柱，⽤⼀根管线直接将流动相接⼊检测器的⼊⼝。
将异丙醇以较⼤的流速注⼊流动池。
直到基线上看不到⽑刺为⽌。
⽓泡就应该清除掉了。
如何减少基线噪⾳？⽆规律噪⾳可能与污染有关。
请冲洗⾊谱柱，对样品做合适的前处理以避免污染，并使⽤HPLC 级别的溶剂。
连续噪⾳有可能由检测器或泵造成。
要确定问题是否发⽣在检测器还是在泵，请先关泵停掉流量，监测基线。
如果此时基线平稳，则噪⾳可能与泵有关系。
使⽤ChemStation 在线诊断或LC ⼿持控制器检查泵⽅⾯的故障。
如果停泵后噪⾳继续存在，则说明噪⾳与检测器有关。
⾸先，请尝试更换灯。
如果问题依然存在，则请与安捷伦科技公司联系。
高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修
高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修液相色谱仪器是一种广泛应用于化学、生物和医药等领域的分离和分析仪器。
然而，由于长期使用或操作不当等原因，液相色谱仪器可能会出现故障。
本文将介绍一些常见的液相色谱仪器故障，并提供诊断和维修方法。
1. 压力异常当液相色谱仪器出现压力异常时，可能是由于柱堵塞或柱压力不足等原因引起的。
首先，可以检查柱是否堵塞，可以通过更换柱或者清洗柱来解决。
另外，也需要检查柱前的过滤器是否堵塞，如果是，则需要更换过滤器。
2. 泵故障液相色谱仪器的泵可能会出现泵头堵塞或密封件损坏等故障。
当出现这种情况时，需要检查泵头是否堵塞，并清洗或更换泵头。
另外，也需要检查泵的密封件是否完好，如果密封件损坏，则需要更换密封件。
3. 检测器信号异常检测器信号异常可能是由于检测器灯管老化或污染、检测器电路故障等原因引起的。
当出现这种情况时，可以先清洗检测器灯管或更换灯管；同时，也需要检查检测器电路是否正常，如果电路故障，则需要修复或更换电路。
总的来说，液相色谱仪器的故障诊断和维修需要具备一定的专业知识和技能。
在进行维修前，建议先查阅液相色谱仪器的使用说明书，了解其工作原理和结构，以便更好地诊断和解决故障。
同时，定期对液相色谱仪器进行维护和保养，可以有效地减少故障的发生，延长仪器的使用寿命。
液相色谱仪器（HPLC）是一种高效、精确的分析仪器，在化学、生物、药学等领域都有着广泛的应用。
然而，由于长期使用、操作不当或者设备老化等原因，液相色谱仪器也会出现各种故障。
在这种情况下，对仪器进行准确的故障诊断，并采取适当的维修措施，是保障仪器正常运行的关键之一。
4. 色谱柱问题液相色谱仪器中的色谱柱是重要的部件，若出现问题则会导致分离效果下降。
柱子可能会发生堵塞、损坏或老化，而影响分离效果。
如果怀疑柱子的问题导致了色谱仪器的故障，第一步就是检查柱子的状态。
可以通过更换柱子或者清洗柱子来解决这一问题。
此外，也要检查柱前的过滤器是否正常运行，如果过滤器故障，也会影响色谱仪器的运行。
液相常见问题15小问！
液相常见问题15小问！食品实验室服务1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?关于漂移问题①温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定②流动相发生変化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定②泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。
③流动相不合适,解決办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合2.为何会基线漂移原因①柱温波动。
(即使是很小的温度变化都会引起基线波动。
通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。
)②流动相不均匀。
(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。
)③流通池被污染或有气体④检测器出口阻塞。
(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)⑤流动相配比不当或流速变化⑥柱平衡慢,特別是流动相发生变化时⑦流动相污染、变质或由低品质溶剂配成⑧样品中有强保留的物质(高K值)以头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。
⑨使用循环溶剂,不提倡。
未调整检测器。
⑩检测器没有设定在最大吸收波长处。
解决方法①控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器。
②使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。
流动相在使用前进行脱气,使用中使用在线脱气或氦气脱气。
③用甲醇或其他强极性溶剂中洗流通池。
如有需要,可以用1N的的酸,(不要用盐酸）。
④取出阻塞物或更换管子。
参考检测器手册更换流通池窗。
⑤更改配比或流速。
为避兔这个问题可定期检查流动相组成及流速。
⑥用中等强度的溶剂进行冲洗。
更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
使用离子对试剂、缓冲盐更应注意平衡柱。
⑦检查流动相的组成。
使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。
⑧改变分析条件。
使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。
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HPLC中电化学检测器使用时的常见问题解答一,如果基线噪音大或发生漂移(不稳)该怎样处理.基线噪音大或飘移一般与高背景本底电流有关,而使背景电流变大的因素很多.下面例举一些有可能引发HPLC-ECD系统背景电流变大的因素.而除了大的背景电流外还有别的因素可引起噪音.千万记住,下面例举的因素仅是一部分可能的因素,而且电化学电池本身不会产生特别的背景电流.背景电流是因分析条件,系统性能,已使用电化学电池的时间长短和处理电化学电池方法的不同而产生.引发高本底电流的一般因素:水!HPLC-ECD系统中使用的水非常关键,要求每厘米的阻抗必须大于或等于18 兆欧姆.因而建议水要进一步的纯化,通过一种被称作洗水的过程.(参考ESA的技术说明"Wat er Polishing"文件目录号:70-1668)制备样品或制作流动相时使用了不纯(或被污染)的化学药品.样品本身也许就是污染源.氧化铝或在萃取时带入的杂质有可能会进入HPLC系统,从而污染色谱柱和电极.流动相中的电化学活性试剂(如:EDTA,TEA).EDTA 是流动相中经常使用的一种试剂,用于螯合氧化的金属离子,可降低本底电流.在电势大于400毫伏时,这种化合物(EDTA)具有很高的电化学活性.如果工作电势大于400毫伏,流动相中就不能再使用EDTA而应改用柠檬酸盐来代替.TEA(三乙醇胺)是用来改善色谱峰的峰形.这种添加剂会含有电化学活性的杂质,在高电势时这种杂质会发生特别的氧化反应.因此要用最小量的TEA,典型的用量小于100 L/L或者对HPLC的色谱柱没有活性的用量.系统中的不锈钢管可能被腐蚀.进入系统的污染物或腐蚀处的脏物可能引起电化学电池受污染(淤塞)或本底电流变大.建议用不锈钢管的用户需定期钝化系统管路或者换用PEEK管.PEEK管可直接从ESA购买.如果脉冲阻尼器破裂,会有污染物进入系统,导致增大背景电流或压力升高.其它引起噪音或漂移的来源:泵头里有溶解于流动相中气体.泵压的波动通常与此有关.要确保流动相被很好的脱气.把泵停下来,等压力下降后,然后把泵清洗(purge)30秒.流动相在进入系统使用前要脱气(详情见下面的第6点)电化学电池中有溶解在流动相中的气体.要确保流动相被充分脱气.带清洗头的电化学电池(如:5014B和5041型电化学电池)在使用前可能没有被很好的清洗.安培法电化学电极(如:5040和5041型电化学电池)有可能在目标电极处有小的泄漏.这主要是由安装垫圈和电极失误造成的.要牢记电极不能装的太紧,同时要确保在装配前所有部件必须完全是干燥的.二,怎样清洗电化学电极参见技术说明"Prolonging Cell Performance"( 文件目录号:70-5017). 它包含文字指导和技术说明以保障电化学电极在最好的状态下工作.三,关闭系统时应注意什么关闭电化学电极的电势. 用适当的洗液清洗整个系统(看下面的注意).在电化学电极关闭和泵中的液体停止流动时,并非系统中的所有设备都必须得断电.如果系统需长期存放建议断掉所有设备的电源.注意:对于HPLC-ECD系统,设备的断电程序因其需停机时间长短不一而不同. 下面是不同情况下合理的断电程序四,停机一晚上非梯度系统--如果每天都在用此系统,应让ECD系统一直开着.在此情况下,关掉电化学电极并让流动相以0.1mL/min 的低流速循环(看下面的第4点).梯度系统--对于梯度系统你不能再循环.而应使A和B各以50%的量组成流动相并使其总流速为0.025mL/min运行系统, 流动相排到废液中.五,长期停机彻底冲洗系统以洗掉盐类物质.建议使用的冲洗剂应与实验时用的流动相一致,只是不再含有缓冲剂或盐类添加剂(如有机溶液和水).注意!如果水或低浓度的有机溶液留在HPLC系统中时间很长有可能发生霉变并导致别的一些问题.对于硅填料的反向柱,水可能导致在线柱停留20到30分钟不能被使用.在冲洗完盐后,建议用柱子的生产厂家推荐的保存液再冲洗柱子,然后取出柱子并盖好盖子以防柱子变干.如果存放时间超过几个月,系统也应封存好.注意:大部分EC应用的缓冲液盐浓度在50-100mM.如果没有流动,便有盐在HPLC系统中沉淀.此沉淀能引起高的背压和鬼峰及其它问题. 另外,没有有机溶液(如:甲醇)的水性溶液易长菌.为防止长菌,ESA推荐使用有杀菌作用的试剂如MB(产品号:70-1025).六, 为什么要用孔径为0.22 m的尼龙过滤器过滤流动相和样品使用孔径为0.22 m的过滤器有两个主要原因.第一个原因是要滤去流动相中微粒以减少柱子的堵塞机会.第二个原因是库仑电化学电池里的工作电极是由多孔石墨制成的.石墨孔径大约为0.2 m.为防止多孔石墨被微粒堵塞我们强力推荐使用孔径为0.22 m 的过滤器.另外,过滤器要放在电化学电池的前面,为保护电化学电池一定要在线过滤.过滤器不是很贵,如果被堵住很容易被更换.过滤器架子(产品号: 70-0893)石墨过滤膜(用于进样器前)(产品号: 70-0898)Peek过滤膜(用于进样器后)(产品号:70-3824)七,可以让加电势的状态处于"On"一晚上吗只要HPLC-ECD 系统中的流动相(包含缓冲盐)一直处于流动状态是可以的.一些用户让系统运行,这取决于系统所需的平衡时间.若系统一直在运行,那么在跑样品前不需要平衡时间.然而,如果晚间泵出了故障,而电势依然加在没有流动相流动的电化学电极上,必然会损坏电化学电极.请注意,如果对灵敏度的要求不高,如果所需平衡时间很短,在不运行系统时,最好关掉电化学电极或者使加在其上的电势为0 mV .这样通过减少电化学电极的工作时间和工作电流就可有效延长电化学电极的寿命,尤其是需要运行在高电势的情况下更应如此.八, 当我的基线以周期性的方式发生波动时我该怎么做当基线以周期性的方式波动时此基线可描绘成锯齿状.人们经常会将噪音问题归罪于电化学电池.而事实上EC 电化学电池很少引起这种周期性的噪音.大多数情况是这种噪音是由泵的问题引起的.可以通过测量锯齿波噪音的峰头和峰谷(或两峰头) 间的距离来检测这种噪音是否由泵引起.先测出峰间距(设为D1),再把液相流速降为原来的一半后再测出峰间距(设为D2),如果D2与D1接近两倍关系,就可断定是泵出了问题.引发泵产生这种噪音的因素有很多,下面是四个最易产生的因素:1.止回阀堵塞---参考泵的使用手册2.泵头中有气体---灌注和清洗(purge)泵系统,赶出其中的气体3.堵住了流动相的入口或管子入口4.泵的局限性**注意:由于在设计上不同泵产生无脉动基线的能力不同,在进行高灵敏度测量时一定要注意.电化学检测器比紫外检测器对噪音更敏感,故适用于紫外检测器的无脉冲基线的泵并不一定能适用于具有高灵敏度的EC检测器的应用.为尽量减小基线波动噪音,应在泵后装一个脉冲阻尼器,使基线更平稳.小心!在装脉冲阻尼器之前一定要先询问泵的生产厂商.有些泵是不能装脉冲阻尼器的.九,PH值会对电化学电极的响应有什么影响在大多数情况下,低pH值(酸性环境)将能有效阻止有些分析物质被氧化.在低pH值环境,测量时物质氧化所需的电势会比中性或碱性环境高.反过来也是对的,高的pH 值或(碱性环境)将有利于分析物质的氧化.注意:在大多数情况下低pH 值环境是用来防止分析物质(如:儿茶酚胺)自氧化.千万记住,选择不同的pH值将会影响化学分离,尤其是用色谱柱洗脱时的顺序.一般来讲不要太注重pH值对电极较高响应的影响,而应保证在自氧化最小的情况使被分析物质得到有效分离.建立伏安曲线(CV 曲线)将有助于优化分析物质的响应.本文档的#8问题包含有关伏安曲线的信息.十,我怎样确定能产生最大响应的最佳电势注意:这一过程假设色谱条件不会变(如:能达到物质分离的一个稳定的色谱方法).这一过程也要求操作者拥有电化学理论知识,懂得伏安曲线和操作Couloc hem的基本知识.可参考Coulochem II操作手册中6.3,6.4a,和6.4b有关动态伏安曲线的情况.1.根据待分析物的情况设置HPLC-EC系统2.打开电化学电极,给电极加电势并要比文献提供的待分析物所需电势高出100 mV并让它平衡3.给没有最优化的通道加电势到-200mV(记住每次只能优化一个电极.设定电极的电势为-200mV,基本可以消除正在该电极上氧化的物质)4. 做一次已知浓度的标准物质的进样.注意:标准物应是浓缩的(如:柱内有10到50 ng),但不要在或靠近检测器的检测限进行测定. 以你认为能产生最大响应的电势跑一下此标准物将是非常重要的.5.调整Coulochem上的增益或R值使你感兴趣的峰落在你所选范围的70~ 80%的区域内注意:调整增益使峰变大并易观察但不能超出量程范围.一旦增益或R值被设定,那么在整个过程中它们都得保持不变对库仑阵列电化学检测器(CoulArray)来说,会自动调节量程范围,所以无需选择.6.接下来,加电势到感兴趣电极,并且电势值要比前面进样时低50mV.让基线稳定下来并使检测器自动归零.7.一旦基线稳定下来就可以进标准样.确保色谱图是完整的和可以接受的.记录最终的高度和面积.8.每次把电势减少50mV重复上面的6和7直到看不见峰高和峰面积为止.9.以峰高为Y 轴,所加电势为X轴,分别画出每种化合物的变化曲线.10.在您的方法中,当电势增加时,峰高和峰面积已达到最大,增加电势不会再增加峰高和峰面积时,应选择能达到最大面积时所需的最低电势作为工作电势(如:如果获得最大峰响应的电势为450, 500 and550mV, 选择400mV为工作电势).十一,对于我的电化学电极,pH操作范围应是多少对于大部分情况,操作环境的pH范围在1-12都不会损坏电化学电池或其部件.但是,当使用极端pH时,一定要多加注意.要意识到pH呈碱性和大的背景电流同时作用将损坏电化学电池.还有,色谱柱对pH值的限制要求也要特别注意.一定要确保色谱柱适于你的pH环境,否则,不适宜的pH将使色谱柱的填料有可能进入测量系统污染或损坏电化学电极.十二,多久更换一次过滤膜理想的色谱条件下过滤膜是不需要更换的,然而在实际中因其被堵塞,是一定要定期更换的.更换频率视流动相和样品中的颗粒物质进入系统的情况而定.压力的增大提示我们,或许是应换过滤膜的时候了. 建议每天使用系统时都要做压力变化的日志.要检查系统压力开始升高是否是系统上的第一个过滤膜引起的.等待压力的下降.在系统内还有压力时不要拆除HPLC 系统.断开过滤器后面的管道,让流动相流过过滤器.记录此时的压力后拆除过滤器,再记录压力值,然后用前面的记录值减去此值.如果差值大于8-10 bar(或100 psi),就应换掉这个过滤膜.用同样的方式检查其它的过滤膜.注意!拆除过滤器前,一定要确保电化学电池被断开和系统压力低于10 bar.如果过滤膜需更换的频率过于频繁,就要对系统进行进一步的检查.可根据下面的方法确定堵塞过滤膜的颗粒来源.如果泵后面的过滤膜需经常更换,说明流动相(包括长菌)或泵的密封圈有可能出了问题;如果进样器后面的过滤膜需经常更换,说明样品有可能有问题;如果柱子后面的过滤膜需经常更换,说明问题可能出自柱子.虽然记住这些将会得到解决问题的很好指导,但也不是绝对的.当处理HPLC 系统的压力问题时,一定要充分做好系统分析和逻辑思考,尽量想到各方面的可能性.十三,我能用硝酸清洗电化学电极吗不建议用硝酸清洗电化学电极.只有在其它方法处理不再有效时,才用硝酸做电化学电极的最后一次清洗. 决不能让色谱柱接触硝酸.有关电化学电极的清洗说明请参见Coulometric Sensor Technical Note文献号:70-1989.当用硝酸处理电化学电极时决不能给其施加电势.用硝酸清洗电化学电极将使电化学电极的所有保修为无效.可用6N硝酸来清洗或钝化EC-HPLC系统的不锈钢件.有关用硝酸清洗电化学电极的指导说明可参见Coulochem II 操作手册的8.5部分. 如果用硝酸钝化HPLC系统中的不锈钢件, 可参见Coulochem I I 操作手册的4.3部分.十四,阀门的故障处理造成两次进样所得的峰响应不太一致的原因可能是因进样方法或进样器有问题.。