小鼠前脂肪细胞使用说明
小鼠3T3-L1前脂肪细胞培养与诱导分化方法的建立
小鼠 ３ Ｔ ３ 一 Ｌ １ 前脂肪 细胞培 养与诱导分化 方法 的建立
郭秀玲 徐民 岗 张秀丽 师 磊 陈显 久
【 摘
要】 目的 建立小 鼠 ３ Ｔ ３ ． Ｌ １ 前脂肪细胞 的培养及诱导分化为成熟脂肪 细胞 的方法 。 方法
使用含
１ ０ ％胎牛血清（ Ｆ Ｂ Ｓ ） 的高糖 达氏修正伊 氏培养基 （ Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ） Ｆ １ ２ 液体培养基 在体 积分数 ５ ％二氧化碳 （ ｃ ｏ ） 、 ３ ７℃ 条件下 常规培养 ３ Ｔ ３ Ｌ １ 细胞 ， ２ － ３ ｄ 换液 １次 ； 诱导分化 培养基 １培养 ２ ｄ ， 诱 导分化培养基 Ⅱ培养 ２ ｄ ； 基础培 养基培养 ４ ～ ６ ｄ ， １ － ２ ｄ 换液 １ 次。 结果 小 鼠 ３ Ｔ ３ ． Ｌ １ 前脂肪 细胞状态 良好 ， 成铺路石状生长 ， 布满培养 瓶底 ， ３ ｄ 传代 １ 次。 ９ ０ ％以上细胞诱导分化成功 ， 细胞呈 圆形 ， 有大量酯滴 聚集 ， 油红 Ｏ染色呈橘红色 。 结论
ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ａ ｎ ａ ｔ ｍｏ ｓ ｐ ｈ ｅ ｒ ｅ ｗ ｉ ｔ ｈ ５ ％ Ｃ ０， ａ ｔ ３ ７℃． ｄ ｕ ｉ ｒ ｎ ｇ ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｃ ｕ ｂ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｒ ｅ ｐ ｌ ｅ ｎ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ｅ ｖ ｅ ｒ ｙ ２ ｔ ｏ ３ ｄ ａ ｙ ｓ ．
３ Ｔ３ 一 Ｌ １ ｐ ｒ ｅ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ｇ ｒ ｅ ｗ ｉ ｎ ａ ｐ ａ ｖ ｉ ｎ ｇ ｓ ｔ ｏ ｎ ｅ ｆ ａ ｓ ｈ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ａ ｐ ｐ ｅ ａ ｒ ｅ ｄ ｉ ｎ ｇ ｏ ｏ ｄ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ． ｈｅ Ｔ ｓ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｂ ｏ ｔ ｔ ｏ ｍ ｏ ｆ
敲低Stau1后小鼠前脂肪细胞系3T3
敲低Stau1后小鼠前脂肪细胞系3T3⁃L1中FOXP1的表达增加孟轩羽;刘迪晖;蒋硕;关亚群;梁小弟【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2023(43)1【摘要】目的在小鼠前脂肪细胞系3T3-L1分化过程中敲低双链RNA结合蛋白Staufen1(Stau1)后筛选差异表达的基因,分析其生物学功能,并用qPCR验证测序结果。
方法用RNA-seq分析Stau1敲低后基因的转录调控。
构建STAU1 shRNA 并转染3T3-L1细胞,鸡尾酒方法诱导其分化为成熟脂肪细胞,收取0、4 d的细胞设立对照组和STAU1敲低组(各3组生物重复样本)收取12组样品的细胞基因芯片信息,以变化倍数log2(Fold change)>1且校正后的P<0.05作为条件筛选Stau1敲低的细胞与对照组样本间的差异表达基因,进行基因本体论(GO)及代谢通路分析(KEGG通路数据库),qPCR验证差异表达的基因。
荧光素酶报告基因实验验证SATU1与叉头盒蛋白P1 FOXP1 mRNA 3′UTR上Staufen1结合位点(SBS)存在结合。
结果较对照组STAU1敲低细胞组中共筛选出差异表达基因588个,其中上调406个、下调182个。
差异表达基因主要参与的生物学过程中脂代谢、炎性反应因子,主要富集的信号通路有糖代谢和能量代谢相关通路。
敲低Stau1后FOXP1表达升高5.3倍,软件预测FOXP1 mRNA 3′UTR含有STAU1结合位点,荧光素酶报告基因验证了FOXP1 mRNA 3′UTR含有STAU1结合位点。
结论推测STAU1能够与FOXP1 mRNA上的STAU1结合位点结合并促进其降解。
【总页数】7页(P130-136)【作者】孟轩羽;刘迪晖;蒋硕;关亚群;梁小弟【作者单位】新疆医科大学基础医学院机能中心;新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室【正文语种】中文【中图分类】R34【相关文献】1.稳定敲低NLRP3基因的小鼠巨噬细胞系的建立与鉴定2.gAd对3T3 L1脂肪细胞肉碱酯酰转移酶1表达的影响3.敲低S100A4表达对胶质瘤细胞系SNB19侵袭和迁移的影响4.精氨酸甲基转移酶CARM1 shRNA慢病毒表达质粒的构建及稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系的建立5.肥胖患者脂肪组织STAU1表达变化及其在脂肪间充质干细胞成脂分化中的作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
3T3-L1 细胞说明书
小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1说明书目录号：SCSP-5038细胞名称：3T3-L1细胞描述：这株细胞是3T3（Swiss albino）通过克隆分离而得到的能连续传代的亚株，表达insulin受体。
当细胞从快速分裂到汇合和接触抑制状态的过程中，细胞会经历脂肪前向脂肪的转化。
培养基中的高血清含量会增加脂肪的积累。
检测表明鼠痘病毒（ectromelia virus，ECTV）阴性。
小鼠品系：Swiss albino细胞来源：2018年引进生物安全等级：BSL-1完全培养液配方：见下方备注批次/冻存日期：详见冻存管/培养瓶标识参考传代周期：3天左右参考传代比例：1:2-1:4参考换液频率：每周2次冻存液：完全培养液95%，DMSO5%细胞状态：成纤维细胞，贴壁生长。
支原体检测结果：阴性STR鉴定结果：①该株细胞DNA进行小鼠细胞STR分型结果显示，扩增后图谱清晰，分型结果良好：1-1：10,15；1-2：13；2-1：9；3-2：14；4-2：19.3；5-5：13,15；6-4：15.3；6-7：12, 15；7-1：25.2,29；8-1：15,16；11-2：15；12-1：19；13-1：15.1；15-3：20.3；17-2：12,15；18-3：17,21；19-2：12；X-1：26。
②该株细胞确为小鼠细胞，没有人源细胞污染。
小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1细胞照片参考文献：备注：1.小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1完全培养液配方（100ml）：DMEM(Invitrogen11960044)87mlNewborn calf serum(Ausbian)10mlGlutamax（invitrogen35050061）1mlNon-essential Amino Acids,100⨯(Invitrogen11140050)1mlSodium pyruvate100mM Solution（invitrogen11360070）1ml不可使用胎牛血清（FBS）2.该细胞起始接种密度应在3⨯103/cm2，并且在细胞达到80%融合或者密度介于5⨯104-6⨯104/cm2时传代，避免细胞完全融合。
脂肪酸对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及OLR1基因转录表达的作用
脂肪酸对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及OLR1基因转录表达的作用孙超;刘春伟【摘要】[目的]研究短链和长链饱和脂肪酸,对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及脂代谢新因子氧化型低密度脂蛋白受体1(OLR1)转录表达的影响.[方法]分离培养小鼠前体脂肪细胞,用适宜浓度乙酸钠、硬脂酸钠和p38MAPK通路抑制剂处理,通过细胞计数检测处理24和48 h时相关基因mRNA的表达量.[结果]乙酸钠处理组小鼠脂肪细胞数量随处理时间延长显著下降(P<0.05),硬脂酸钠处理组对小鼠细胞数量无显著影响(P>0.05);乙酸钠和硬脂酸钠均显著上调PPARγ2、C/EBPα和OLR1 mRNA的表达(P<0.05);p38MAPK抑制剂能显著抑制PPARγ2和OLR1 mRNA 的表达(P<0.05),但对C/EBPα tuRNA表达无显著影响.[结论]乙酸钠可抑制前体脂肪细胞的增殖,但乙酸钠和硬脂酸钠均能促进前体脂肪细胞的分化;OLR1基因在前体脂肪细胞分化过程中通过p38MAPK通路发挥作用,且脂肪酸对前体脂肪细胞分化及OLR1转录表达的影响与p38MAPK通路密切相关.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2009(037)003【总页数】6页(P1-6)【关键词】脂肪酸;前体脂肪细胞;OLR1;p38MAPK【作者】孙超;刘春伟【作者单位】西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】Q291;Q786肥胖主要由机体脂肪代谢失衡造成，是Ⅱ型糖尿病的主要诱因[1]。
有研究表明，肥胖与心血管病的发生关系密切[2]。
动物体脂肪过度沉积不仅降低畜产品质量,而且威胁人类健康,已成为动物生产领域亟待解决的问题。
近年来,人们试图从分子水平阐明动物脂肪沉积调控的机制,并希望将其应用于肥胖症的防治。
TL诱导分化成熟脂肪细胞方案
TL诱导分化成熟脂肪细胞方案为了诱导分化成熟脂肪细胞，需要采取一系列措施来模拟体内脂肪细胞的发育过程。
下面是一个基于胎儿稳定细胞株人类成熟脂肪细胞系（ST-13）的方案，在富含小鼠成年体内碎屑坏死和抗生素的DMEM培养基中进行诱导分化。
1.培养脂肪前体细胞：将ST-13细胞接种于DMEM培养基中，并在37℃、5%CO2的条件下培养。
培养基需添加10%胎牛血清（FBS）和生长因子（如胰岛素、肾上腺皮质激素等），以促进细胞增殖和生长。
2. 诱导分化：当细胞生长到80%的密度时，将培养基更换为富含诱导因子的培养基，如胰岛素、胰高血糖素苷（IBMX）和去氧皮质酮（Dex）等。
让细胞在这样的培养基中继续培养48小时。
3.培养终分化脂肪细胞：将细胞培养基更换为富含10%FBS和高浓度胰岛素的DMEM培养基。
这样的培养条件可以帮助细胞继续分化成完全成熟的脂肪细胞。
4. 油红O染色：使用油红O染色方法来检测分化程度。
将细胞固定在4% paraformaldehyde中，然后用60%异丙醇洗涤。
将油红O溶液添加到细胞上，染色20分钟后洗涤。
观察细胞内的红色油滴，这是脂肪细胞特有的特征。
5.RT-qPCR：利用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）来测量脂肪细胞特异基因表达水平。
收集分化脂肪细胞，提取总RNA，并合成cDNA。
使用特异性引物检测目标基因的表达水平，如脂肪细胞标记基因PPARγ和C/EBPα等。
6.蛋白质免疫印迹：用免疫印迹方法检测特定蛋白质的表达水平。
收集分化脂肪细胞，提取蛋白质，并进行电泳分离。
将蛋白质转移到聚丙烯酰胺凝胶上，然后用特异性抗体检测目标蛋白质的表达水平。
7. 脂肪细胞代谢测定：应用适当的测定方法来评估脂肪细胞代谢特性。
例如，使用改良的AdipoRed（泛素酯类）试剂，它可以选择性地结合脂肪细胞中的甘油三酯，以测定细胞的脂肪含量。
8. 细胞迁移和侵袭实验：测量分化脂肪细胞的迁移和侵袭能力，以评估其功能。
3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化方法优化的初步探讨
3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化方法优化的初步探讨赵蕾;郑美丽;杨梅;钟久昌;杨新春【摘要】目的观察不同诱导剂对3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化的作用.方法在经典鸡尾酒诱导剂成分基础上,根据不同诱导剂成分,将3T3-L1前体脂肪细胞分为4组:(1)对照组;(2)罗格列酮干预组;(3)吲哚美辛干预组;(4)罗格列酮和吲哚美辛联合干预组.在诱导前体脂肪细胞分化过程中,通过显微镜观察细胞形态学变化、油红O染色以及检测胞内和胞外三酰甘油含量,评价各组成脂效率.结果罗格列酮和吲哚美辛单独干预组及联合干预组前体脂肪细胞诱导过程中更早出现脂滴,且形成的脂滴也较对照组多,而油红O染色进一步证实以上结果.采用Image Pro Plus 6.0软件统计经油红O染色后的脂滴,单个脂滴的平均直径、平均面积以及最大直径,罗格列酮干预组和联合干预组均大于对照组,而吲哚美辛干预组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).三酰甘油含量检测,胞外三酰甘油含量4组比较,差异无统计学意义,但胞内三酰甘油含量联合干预组高于对照组[(0.77±0.07) mmol/g vs (0.19±0.02) mmol/g,P＜0.05].结论优化经典鸡尾酒诱导方法,在原成分基础上加用过氧化物酶体增生因子活化γ型受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR-γ)激动剂罗格列酮,可显著提高3T3-L1前体脂肪细胞的诱导效率.【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2019(040)002【总页数】6页(P226-231)【关键词】前体脂肪细胞;3T3-L1;分化【作者】赵蕾;郑美丽;杨梅;钟久昌;杨新春【作者单位】首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020【正文语种】中文肥胖是一项世界性健康难题，往往导致内分泌系统和心血管系统疾病的发生。
3T3-L1脂肪前体细胞
细胞名称3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞，也称3T3-L1脂肪前体细胞
细胞描述3T3-L1是从Swiss-3T3小鼠胚胎中分离克隆的细胞株，该细胞有接触性抑制生长特征且能向脂肪样细胞分化，高血清培养液可促
进细胞脂肪积累等
动物种别小鼠
组织来源胚胎
细胞形态成纤维细胞（长梭形）
培养条件高糖DMEM培养液，含10%胎牛血清和1%青链霉素
High glucose DMEM medium with 10% fetal bovine serum, 100
IU/ml penicillin and 100 g/ml streptomycin in the humidified
atmosphere with 5% CO2 and 95% O2 at 37℃
细胞传代以50 ml细胞培养瓶为例说明：
1．无菌PBS轻轻洗涤细胞1或2次（每次约4 ml PBS）；
2．倒掉PBS后再加入4ml PBS，将细胞培养瓶翻转；
3．加入0.25%胰酶和0.02%EDTA的溶液约1ml，拧紧细胞培养瓶盖，轻轻混匀；
4．在镜下观察细胞形态，当细胞稍稍变圆，轻轻并立即翻转培养瓶，终止消化（消化时间与细胞状态有关）；
5．倒掉胰酶加入适当培养液，轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落分散；
6．细胞悬液一分为二，继续传代培养（避免密度过高导致细胞分化）。
小鼠皮下脂肪细胞使用说明
小鼠皮下脂肪细胞小鼠皮下脂肪细胞产品说明：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠皮下脂肪细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠皮下脂肪细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠皮下脂肪细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠皮下脂肪细胞产品简介：1、产品名称：小鼠皮下脂肪细胞2、组织来源：小鼠脂肪组织3、产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠皮下脂肪细胞简介：小鼠皮下脂肪细胞来源于小鼠脂肪组织，皮下脂肪细胞主要功能：（1）脂肪细胞能储存能量并参与身体代谢。
（2）脂肪细胞分化是一个发展的过程，它对代谢稳态和营养信号很重要。
（3）前脂肪细胞存在于小鼠脂肪组织中，能根据能量的平衡增殖和分化成熟的脂肪细胞。
前体细胞的增殖和分化能够增加脂肪组织的体积。
（4）前脂肪细胞与脂肪分化以及许多生理病理过程密切相关，如脂肪代谢、能量平衡、肥胖、糖尿病、高血脂和乳癌，所以小鼠皮下脂肪细胞对这些疾病的研究提供素材。
小鼠前脂肪细胞的原代培养及鉴定
小鼠前脂肪细胞的原代培养及鉴定【摘要】本文结合文献报道及本课题组实验研究,对小鼠前脂肪细胞的原代培养及鉴定进行了总结。
同时,由于前脂肪细胞的分化与肥胖病的形成有密切的关系,故前脂肪细胞的培养具有很重要的研究意义。
【关键词】前脂肪细胞;原代培养;鉴定脂肪组织在体内有在胞浆内积聚脂滴的成熟脂肪细胞和虽未在胞浆内积聚脂滴但有这种潜能的前脂肪细胞。
成熟的脂肪细胞呈圆形,前脂肪细胞呈梭形,成熟的脂肪细胞失去分裂及增殖的能力,而前脂肪细胞则有分裂和增殖的能力。
由于前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化能力的特异化了的前体细胞,与肥胖有着非常密切的关系,笔者参照多本参考书及有关文献报道,在科研中对前脂肪细胞的培养及鉴定方法进行了验证和比较,结合本课题组反复的实践对其进行了总结,拟为进一步研究奠定基础。
由于小鼠的取材比较方便,而且关于小鼠前脂肪细胞的培养研究得比较多,故本课题组所采用的前脂肪细胞均取自小鼠。
1.材料与方法1.1实验材料:实验选用体重为18-22g的4周龄昆明种雄性小鼠。
由成都中医药大学实验动物中心提供。
动物在实验前适应性驯养1周,动物房温度和湿度分别维持在20℃和70%左右。
实验药品主要有F12培养基、胰酶(Trypsin)、小牛血清、二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(MTT)、油红O等。
实验主要使用仪器设备包括二氧化碳培养箱、超净工作台、倒置相差显微镜等。
1.2实验方法:1.2.1小鼠前脂肪细胞的取材及原代培养:小鼠前脂肪细胞的培养方法,参照杨建梅等所发表文献 [1-3] 及《体外培养的原理与技术》 [4] 、《组织培养技术及其在医学研究中的应用》 [5] 等书所载方法进行培养。
1.2.1.1断脊髓处死雄性小鼠,在培养室无菌条件下解剖小鼠,剪取小鼠附睾附近的脂肪组织,放入培养皿中的D-Hanks液中,反复洗涤之后,用剪刀充分剪碎,将组织移入离心管。
1.2.1.2用吸管加入适量0.25%胰酶在37℃条件下消化(消化时间根据具体情况而定),离心后,收集沉底的细胞,在离心管内加入适量含20%小牛血清的F12培养液,用吸管混匀后吸取细胞及培养液经筛网过滤入另一离心管,上清及漂浮的脂肪组织弃去不用。
对小鼠前脂肪细胞(3T3-L1)的电化学检测
对小鼠前脂肪细胞（3T3-L1）的电化学检测实验目的：主要目的是建立一种可以对细胞生长分裂进行实时监测的电化学系统，利用细胞在电极表面生长分裂导致电阻的变化来显示细胞的生长情况。
这是一张手绘简易图：片子的基材是硅，铜作为电极材料镀在硅表面约有1um左右的厚度，中间的圆结构是一个叉子电极，由左右两根铜丝引出与工作电极，对电极和参比电极相连（对电极和参比电极在同一侧）。
将96孔酶标板的底面去掉，将管壁用胶水粘贴在圆面边缘，形成一个chip-combination。
目的是能够加入培养液，在圆电极表面培养贴壁细胞。
电极表面电阻的大小变化应该是可以反映细胞在电极表面的贴壁程度的，据此利用输出的电信号来判断细胞生长情况。
实验设计：1.chip-combinations 的制作将裁掉底面的96孔酶标板的孔一个个分开，浸没于75%的酒精中过夜消毒。
然后和芯片一起于紫外下照射30min。
在无菌操作台中，将少量的胶水涂抹到培养孔的底面边缘，粘合到铜电极表面（注意保持叉子电极表面洁净，不要让胶水粘到圆面上）。
待胶水完全干凅后，将chip-combinations置于紫外下照射20min。
2.空白检测标记12个chip-combinations，分别加入200ulDMEM，检测不培养细胞时的阻抗值。
移除DMEM，酒精清洗后风干并在紫外下照射20min。
3.3T3-L1细胞获取和计数将复苏后培养在培养皿中3-4天的3T3-L1细胞从培养箱中取出。
移除旧的培养液，将2ml 旧的培养液加入15ml离心管中用作终止消化作用。
加入5mlPBS,洗掉培养皿中残余的培养基，反复2次。
培养皿中加入4ml胰酶开始消化细胞，作用约2min左右。
在显微镜下观察细胞消化的情况。
当大部分细胞开始悬浮，不再是贴壁状态时，将2ml旧的培养液加入培养皿中，轻微摇晃培养皿以终止消化作用。
用枪头剧烈地吹打培养皿底部，将残余的贴壁细胞洗下来。
将消化的细胞转移至15ml离心管中。
小鼠内脏脂肪细胞使用说明
小鼠内脏脂肪细胞小鼠内脏脂肪细胞产品说明：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠内脏脂肪细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠内脏脂肪细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠内脏脂肪细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠内脏脂肪细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。
HAmLET诱导小鼠前脂肪细胞3T3-L1成脂分化
HAmLET诱导小鼠前脂肪细胞3T3-L1成脂分化张轶博;钟悦;曾瑞霞【期刊名称】《锦州医科大学学报》【年(卷),期】2022(43)4【摘要】目的肿瘤细胞致死性人α-乳清蛋白(humanα-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAmLET)是一种可以选择性杀伤各种肿瘤细胞的人α-乳清蛋白与油酸的脂蛋白复合物,但其对未分化细胞的作用研究较少,本研究探讨HAmLET对小鼠前脂肪细胞3T3-L1成脂分化的作用及其机制。
方法使用不同浓度HAmLET 作用3T3-L1细胞和肿瘤细胞U87MG 24 h或7 d后通过CCk8实验检测细胞活性,选择合适浓度HAmLET与胰岛素、IBMX、地塞米松三联法诱导3T3-L1细胞成脂分化,12 d后通过油红O染色观察脂肪细胞内脂质聚集及脂滴大小、异丙醇脂质萃取检测脂质含量、Western Blot检测PPARγ的蛋白表达。
结果50、100、200、500μg/mL HAmLET作用3T3-L1细胞24 h后,3T3-L1的细胞活性均显著高于U87MG细胞(P<0.01),而3T3-L1的细胞活性在100和200μg/mL之间显著降低(P<0.01)。
100μg/mL和200μg/mL HAmLET作用3T3-L1细胞7 d后细胞存活率没有明显变化,而100μg/mL组镜下观察到少数3T3-L1细胞体积增大、变圆,胞质内可见脂滴。
油红O染色,相对脂质含量及PPARγ蛋白检测结果显示100μg/m L HAmLET诱导3T3-L1细胞分化12 d后脂质含量水平和PPARγ蛋白表达水平与经典三联法诱导组差异无统计学意义(P>0.05)另外,HAmLET可显著提高诱导细胞中。
结论使用能杀伤肿瘤细胞U87MG细胞浓度的100μg/mL HAmLET可通过激活3T3-L1细胞中PPARγ蛋白表达诱导细胞分化成脂。
【总页数】6页(P14-19)【作者】张轶博;钟悦;曾瑞霞【作者单位】锦州医科大学病原生物学教研室;营口经济开发区中心医院眼科;锦州医科大学人体解剖学教研室【正文语种】中文【中图分类】R363.1【相关文献】1.小鼠3T3-L1前脂肪细胞培养与诱导分化方法的建立2.小鼠前脂肪细胞3T3-L1培养与四联诱导分化方法的探讨3.miR-3077-5P对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化能力的影响4.雷公藤红素对前脂肪细胞3T3-L1成脂分化的抑制作用及其机制5.miR-140-5p对前脂肪细胞3T3-L1成脂分化的机制研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠前脂肪细胞的原代培养及鉴定
［ ］ 奚雁． ２ 川芎嗉治疗糖尿病周 围神经病变４ ６例疗效观察． 中国基层 医 ａ 硫辛酸是一种强大的抗氧化剂， 一 作为丙酮酸脱氢酶和 ａ 一戊二酸脱 药 ， ０ ，：１ ４５ ２ ０７４ ４－ １． ０ 氢酶 一 线粒体酶系复合物的辅助因子起作用。ａ 一硫辛酸降低脂质过氧化， ［ ］ 章晓燕， ３ 刘芳， 伟平． 一 贾 ａ 硫辛酸与糖尿病周围神经病变［ ］ 国外医 Ｊ． 增加神经营养血管的血流量 ， 改善神经传导速度， 增加神经 Ｎ 一 一 Ｔ ａ Ｋ ＡＰ 学： 内分泌分册 ， ０ ， （ ）２２— ６ ． ２ ５２ ４ ： ０ ５ ６ ２３ 酶 活性及保 护血管 内皮功 能等 作用 机 制治疗 糖尿 病 周 围神经 病变 口Ｉ］ 可 ４， ［ ］ 凌丹芸， ４ 汤正义， 王卫庆． 抗氧化荆 ａ 一硫辛酸在糖屎病神经病变治疗 以预 防或治疗 高血糖诱 导 的神经 损 伤 ， 即使 在 血糖 失控 的 糖尿 病 患者 中也 中的作用［］ 世界Ｉ床药物，０５２ （２ ：２ — ２ ． Ｊ． 临 ２０ ，６ １ ）７ ６ ７８ 同样 发挥作用 ； 它的抗氧 化作用表 现在清 除 自由基 ， 合金 属离 子及再 生其 螯 ［ ］ 刘国良， ５ 张海燕， 曹翠平． 一硫辛酸保护 Ｂ细胞治疗神经病交等并发 ａ 他抗 氧化剂 （ 如谷胱 苷肽 、 维生素 Ｅ 维生素 ｃ等 ） ， 、 Ｊ 能显著 改善 Ｄ Ｎ的 临 Ｐ 症的多功能强效氧化应激抑制剂［ ］ 实用糖尿病杂志，０６ １ （ ） Ｊ． ２０ ，２ ６ ： 床症 状和神经 传导 速度 及 氧化 应 激 增加 和 抗氧 化 防 御能 力 下 降之 间 的不 ５ —５ ． ４ ８
【 摘要】 本文结合文献报道及本课题组实验研究， 对小鼠前脂肪细胞的原代培养及鉴定进行了总结。同时， 由于前脂肪细胞的分化与肥胖病的形成有密 切 的关 系， 前脂肪 细胞的培养 具有很 重要 的研 究意 义。 故 【 关键词】 前脂肪细胞 ； 原代培养； 鉴定 ｄｊ ０ ３６／． ｓ．０６—１５ ．０ ００ ．２ ｏ： ．９９ｊｉ ｎ１０ ９９２ １．９ １４ １ ｓ 文章鳊 号：０６—１５ （００ ０ ２０ ０ １０ ９９ ２ １）一 ９— ４９— ２ 脂肪组织在体 内有在胞浆内积聚脂滴的成熟脂肪细胞和虽未在胞浆内 长基 本规律 的重要方 法 。现 在 ， 数实验 室 利用 培养 板采用 Ｍ Ｔ比色法 大多 Ｔ 积聚脂 滴但有 这种潜 能的前 脂肪 细胞 。成 熟 的脂 肪 细胞 呈 圆形 ， 脂 肪细 测 Ｏ 前 Ｄ值来进行 生长 曲线的绘 制 Ｊ 。 胞呈梭 形 ， 成熟 的脂 肪细胞 失去分裂 及增殖 的能力 ， 前脂肪 细胞 则有 分裂 而 １２２３ 油红 Ｏ染色 提 取 法测 定 细胞 内脂肪 含 量 的动 态变 化 ： 据 ．．． 根 和增殖 的能力 。 由于 前脂 肪细胞 是一类 具有 增殖 和 向脂 肪 细胞分 化能 力 的 Ｒｍｒ 等 方 法动态 测定 ， Ｏ ａ ｌｚ ｅ 以 Ｄ值 表示 ， 画出时 间 一Ｏ Ｄ值 曲线。 １２ ２４ 酶组织 化学 提取 法 测定 前脂 肪细 胞 分化 过程 中的标 志物 一 ． ．． 特异化 了的前体 细胞 ， 与肥胖 有着非 常密切 的关 系 ， 笔者 参照 多本参 考 书及 有关文 献报道 ， 在科研 中对 前脂 肪 细胞 的培 养及 鉴定 方法 进 行 了验证 和 比 甘 油磷酸脱 氢酶 （ Ｐ Ｈ） 量的 动态变化 ：Ｐ Ｈ是前脂 肪细胞分 化 中晚期 ＧＤ 含 ＧＤ 较， 结合本课 题组反 复的实践对 其进行 了总结 ， 进一步研 究奠定基 础 。 拟为 的标志， 根据 Ｓ ａ 等 的方法进行测定， Ｄ值表示， ｔｒ ｕｔ 以Ｏ 画出时问一Ｏ Ｄ值 由于小 鼠的取材 比较 方便 ， 且 关于 小 鼠前 脂肪 细胞 的培 养研 究碍 比 曲线 。 而 较多 ， 教本课题 组所采用 的前脂 肪细胞 均取 自小 鼠。 １３ 统 计方法 ： 数据 均以均数 ４标准差 （ ４ ） ． 实验 － ｘ ｓ 表示 ， － 采用 Ｓ Ｓ１． ＰＳ２ １材料与 方法 ． ０ 软件 进行统 计学分 析。单 因素方差分 析 、 组问差异 分析采用 ｔ 检验 。 １１ 实 验材 料 ： 验选 用体 重为 １ ２ ｇ的 ４周 龄 昆明 种雄 性小 鼠。 ２实验 结果与分 析 ． 实 ８— ２ ． 由成都 中医药大学 实验动 物 中心提 供 。动物 在 实验 前 适应 性 马养 １ ， Ｉ ｆ Ｉ 周 动 ２ １ 原 代培养小 鼠前 脂肪细胞 的增殖过 程 ： ． 物房温度 和湿度分别 维 持在 ２ ￣ ７％ 左 右。 实验 药 品主 要有 Ｆ２培 养 ０Ｃ和 ０ １ ２ １１ 小 鼠前脂 肪细胞 的形态 学观察 ： ．． 接种 消化分离 的细胞 １ 时基 ２小 基 、 酶（ ｒ ｓ ）小 牛血 清 、 甲基 亚砜 （ Ｍ Ｏ） 噻唑 蓝 （ Ｔ ） 油 红 Ｏ 本可 以贴壁 ， 胰 Ｔｙ ｉ 、 ｐｎ 二 ＤＳ 、 Ｍ ｒ、 贴壁后初 为小 圆形 ， 浆 比例较 大（ 图 １ 。培养过程 中始终 核／ 见 ） 等 。实验 主要使用仪 器设备包 括二氧 化碳 培养箱 、 超净 工作 台、 倒置相 差 显 应用含 高血清 （０ ２ ％小 牛血清 ） １ Ｆ２培养液 。２天即可 观察 到细胞 渐成梭形 ， 微镜 等 。 在 ３天左 右此梭形 细胞开始 增殖 ， １ ４— ０天加速 ， 聚集 性生长成放 射状 （ 图 见 １２ 实验方 法 ： ． ２ ， 融合后 生长减慢 。增殖 过程 中 的前脂 肪细 胞使 用油 红 Ｏ完全 不能 ） 细胞 １２ １ 小 鼠前脂 肪细胞 的取材 及原代 培养 ： 鼠前脂肪 细胞 的培 养 方 着色 。２周左右时部 分 细胞 内出现少量脂 滴 ， ．． 小 而这种 自然成 脂分 化的细胞 所 法。 参照杨建梅等所发表文献Ｌ ３及＜ 】 ］ 体外培养的原理与技术＞４、组织培 占 比例较 少。 － ＿ ‘ Ｊ 养技术及其在医学研究中的应用＞ 等书所载方法进行培养。 Ｊ １２ １１ 断脊髓处死雄性小鼠， ．．． 在培养室无菌条件下解剖小鼠， 剪取 小 鼠附睾附近 的脂肪组 织 ， 放人培养 皿 中的 Ｄ—Ｈ ｎｓ 中 ， 复洗 涤之 后 ， ａｋ 液 反 用剪刀 充分剪碎 ， 织移 人离心管 。 将组 １２ １２ 用吸管加 入适 量 ０２％ 胰酶在 ３℃条 件下 消化 （ ．．． ．５ ７ 消化 时间根 据具体情 况而定 ） 离心后 ， 沉底 的细胞 ， ， 收集 在离心 管内加入 适量 含 ２ ％小 ０ 牛血清 的 Ｆ２培养液 ， 吸管混 匀后 吸取 细 胞及 培 养液 经筛 网过滤 入 另一 １ 用 离心管 。 上清及 漂浮 的脂 肪组 织弃去不 用。 １２ １３ 再次离心后 ， 上清 ， ．．． 弃 沉积 的细胞 用 培养 液制 成细 胞悬 液 ， 接 种至培养 板或培养 瓶 中， 根据 实验 需要 高 调整 细 胞 的密 度。 在倒 置显 微 并 镜下观察细胞呈小圆形， ３ｑ ， 置 ７Ｃ 体积分数５ Ｏ 培养箱内培养。 ％Ｃ １２ １４ ４ 后 ， Ｐ Ｓ轻轻洗 去培养板 或培养 瓶 内未粘 附的 物质 ， ．．． ２ ｈ 用 Ｂ 并 更 换培养液 ， 要维持前 脂肪 细胞 的增 殖则 用含 高血 清 （０ 小 牛血 清 ） 如 ２％ 的 Ｆ ２培养 液 ， Ｉ 如实验 的 目的是 研究 前 脂 肪细 胞 的分 化则 可 更换 为 含低 血 清 （０ １％小牛血清） 或无血清的 Ｆ２培养液， １ 以后每２—３ 天换一次培养液。 １２２ 小 鼠前 脂肪细 胞 的鉴定 方法 ： ．． Ｉ２２ １ 细胞形 态学 观察 ： ． ．． 在倒 置显 微 镜 下 ， 态观 察胞 浆 内 出现 脂 动 肪颗 粒的程度 和快慢并 照相 。也可进行 油红 Ｏ染色并 照相 。 １２２ ２ ＭＩ 比色法及生 长曲线 的绘制 ： ． ．． ＇ Ｔ 细胞 生长 曲线是 观察 细胞 生
小鼠3T3-L1前脂肪细胞系的增强绿色荧光蛋白标记
小鼠脂肪干细胞提取方法-概述说明以及解释
小鼠脂肪干细胞提取方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述：随着干细胞研究领域的不断深入，小鼠脂肪干细胞作为一种重要的干细胞资源备受关注。
小鼠脂肪干细胞具有较高的分化潜能和增殖能力，可广泛应用于再生医学、组织工程和疾病治疗等领域。
提取小鼠脂肪干细胞是进行相关研究的基础和关键步骤，因此本文将详细介绍小鼠脂肪干细胞的提取方法及其在研究中的应用。
通过深入探讨小鼠脂肪干细胞的重要性和相关提取方法，旨在为读者提供实用的研究参考和启发，促进小鼠脂肪干细胞研究领域的进一步发展。
1.2 文章结构本文主要分为引言、正文和结论三部分。
在引言部分，将介绍小鼠脂肪干细胞的重要性，并简要阐述文章的结构和目的。
正文部分将详细介绍小鼠脂肪干细胞提取方法，包括提取的步骤、操作注意事项和实验流程。
同时还会探讨小鼠脂肪干细胞在研究中的应用，如在生物医学研究中的作用和潜在应用价值。
在结论部分，将对提取方法的重要性进行总结，并展望小鼠脂肪干细胞研究的未来发展趋势。
最后，对整篇文章进行总结，强调小鼠脂肪干细胞研究的重要性和潜在价值。
1.3 目的小鼠脂肪干细胞作为一种重要的细胞资源，在干细胞研究领域具有广泛的应用价值。
本文旨在探讨小鼠脂肪干细胞的提取方法，为相关研究人员提供可操作的实验指导，推动小鼠脂肪干细胞研究的进展。
同时，通过总结现有提取方法的优缺点，展望未来小鼠脂肪干细胞研究的发展方向，为更深入的研究提供理论基础和实践指导。
通过本文的阐述和分析，旨在促进小鼠脂肪干细胞领域的持续发展，推动干细胞研究的进步。
2.正文2.1 小鼠脂肪干细胞的重要性:小鼠脂肪干细胞是一种来源于小鼠脂肪组织的多能干细胞，具有很高的潜在应用价值。
首先，小鼠脂肪干细胞具有自我更新和多向分化的能力，可以分化成多种细胞类型，如脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，这使得它们在再生医学领域具有重要意义。
其次，小鼠脂肪干细胞来源广泛，并且易于提取和培养，这为研究人员提供了便利。
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小鼠前脂肪细胞
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