融合标签蛋白亲和纯化填料

实验结果：
1） 蛋白浓度：
标准品浓度 （mg/mL）
0 0.625 1.25
OD 值 0
0.05 0.152
稀释后浓度 （mg/mL）
实际浓度 （mg/mL）
总蛋白量（mg）
2.5 5
样品名称 1/10 His 原 液 1/10 His 滤 液 His 洗脱液
0.29 0.61
0.012 0.099667774 0.996677741 9.96677741
3） 染胶结果： 上样顺序： 1—分子量标记； 2—重组蛋白细菌裂解液原液 10uL； 3—重组蛋白细菌裂解液滤液 10uL； 4—重组蛋白细菌裂解液 His 洗脱液（8.31）15uL 5—重组蛋白细菌裂解液 His 洗脱液（9.3） 15uL
其他：
1）His-tag Antibody, Agarose（ICP1310）
使用本品可以高效快速的分离，纯化，浓缩含 His 标签的蛋白和残基，纯化的 蛋白浓度高，特异性好，纯化过程简便易操作，一步纯化，节省试验时间、、、
实验步骤： 1. Anti-His Agarose 装柱 100uL，0.05M Hcl 洗柱子，PBSt 洗至中性； 2. Tag 重组细菌裂解液离心取上清，用蒸馏水稀释 5 倍，过 His Agarose； 3. PBSt 洗柱子 3mL，蒸馏水洗柱子 3mL，300uL 0.05M Hcl PBSt 溶液洗脱，收集 300uL 洗脱液，10uL 饱和碳酸钠中和，洗脱液测 ELISA； 4. 取原液、滤液及洗脱液加入 5*loading buffer，煮沸 5 分钟，离心上样电泳。
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2）DYKDDDDK-tag Antibody, Agarose（ICP1315）
3）HA-tag Antibody, Agarose（ICP1305）
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标签蛋白亲和纯化介质
随着基因工程下游的技术的日益发展。基因重组蛋白的分离纯化技术越来越显 示出其重要性，在重组蛋白的纯化过程中，研究人员常常利用各种融合表达的亲 和标签来纯化所表达的蛋白质，这样纯化相对比较容易，即便如此，由于蛋白的 多样性，重组蛋白的的纯化还是比较复杂而专业的工作，尤其对于不熟悉的研究 者来说，它还有可能成为一个瓶颈。
加拿大 Immunechem(ICP)公司开发了一种高质量高效的亲和纯化介质（抗 His/ HA /DYKDDDDK Tag 亲和色谱填料）、
例如： 抗 His tag 亲和填料（His-tag Antibody, Agarose） 产品描述：
保存条件: Store product at –20 oC. Three years from date of shipping
His 融合蛋白是目前最常见的表达方式，而且很成熟，它的优点是表达方便而 且基本不影响蛋白的活性，现在通用的做法是用镍柱亲和纯化，虽然是通用的方 法，但是不可避免的是它也有缺点，使用过镍柱纯化的研究者应该都遇到过蛋白 不溶解，蛋白不挂柱，蛋白难洗脱，电泳杂带多，特异性差等问题，并为此焦头 烂额，荒废不少的时间与精力，所以开发一种新的高效高质量的纯化介质是大家 一直以来的追求。
上样：
1：分子量标记；
2：重组细菌裂解液原液 10uL；
3：重组细菌裂解液滤液 10uL；
4：重组细菌裂解液Hale Waihona Puke Baidu脱液 5uL；
5：重组细菌裂解液洗脱液 15uL； 6：重组细菌裂解液洗脱液 25uL。.
抗体：Anti-His HRP 1:2000 in 0.5%脱脂奶+TBSt， 室温孵育 2h； 曝光 30 分钟，显影 10 秒。
偶联密度: 10 mg anti-His tag Antibody /mL
吸附能力: >2 mg/Ml 应用范围: IP
本产品将亲和纯化的抗 His 标签抗体通过共价键定向偶联到琼脂糖珠，利用抗 原抗体高度专一特异性结合力，快速的从样品液中俘获 His 标签蛋白，然后使用 平衡缓冲液将不结合的杂志清洗掉，再用洗脱液洗脱结合在填料上的 His 标签蛋 白，洗脱结束后，用平衡缓冲液平衡亲和柱即可重复使用。
抗体
HRP
1:2000
洗脱液稀释度
His 洗脱 液
1/3 2.511
1/9 2.593
1/27 2.439
1/81 1.997
1/243 1.175
1/729 0.604
1/2187 0.335
0 0.108
2） WB 实验结果：
SDS-PAGE: 12%
跑胶: 70 伏，145 分钟
半干转膜：90mA， 45 分钟
0.013 0.107973422 1.079734219 1.079734219
0.035 0.290697674
0.09011627894
0.7
y = 0.1204x
0.6
R2 = 0.9965
0.5
0.4
系列1
0.3
线性 (系列1)
0.2
0.1
0
0
1
2
3
4
5
6
1） ELISA 实验结果：
Anti-His