暨南大学动物细胞工程

动物细胞工程

第一章

概念：

动物细胞工程：是指以动物细胞、细胞器或早期胚胎为研究对象，应用细胞生物学和分子生物学原理和方法，对其进行培养、繁殖、人工操作等，使其产生人们所需的生物学特征，获得人类所需的生物产品、创造新的细胞类型或动物品种的一门综合科学。

生物工程：人们运用现代生物科学、工程学和其他基础学科的知识，按照预先的设计，对生物进行控制和改造或模拟生物及其功能，用来发展商业性加工、产品生产和社会服务的新兴技术领域

动物细胞工程包含哪些内容

动物细胞培养技术

干细胞工程

动物细胞融合

单克隆抗体制备

染色体工程

基因打靶与转基因动物

生殖细胞工程

胚胎工程

第二章

概念：

细胞培养：是指细胞在体外条件下的生长，在细胞培养的过程中，细胞不再形成组织

组织培养：是指组织在体外条件下的保存或生长，此时可能有组织分化并保持组织的结构或功能

原代培养：以直接取自生物体细胞．组织或器官开始的培养

传代培养：无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养

细胞系：原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系

细胞株：通过选择法或克隆法形成从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养称为细胞株，从培养代数来讲,可培养到40-50代以上

细胞培养实验室必须的设备有哪些？

1．无菌实验室

①实验准备室②培养体系配制室③培养室④观察室

2．净化台

适用于無菌操作、組织培养之用

3．培养箱和CO2培养箱

①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。②保持培养箱内空气干净。定期消毒（90 ℃，14 h)。③箱

内火菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。

4．倒置显微镜

5．液氮罐

盛装－196℃的液氮，用来冻存细胞

6．器材的清洗与消毒

7．灭菌、消毒器具

①紫外线直接照射法②干热③湿热消毒④滤过消毒⑤消毒剂⑥煮沸消毒

动物细胞体外培养必要的条件有哪些？

为无菌、生长环境(PH值、温度)和营养

1)温度细胞对低温的耐受性要比对高温的耐受性强些，低温下会使细胞生长代谢速率降低；一经恢复正常温度时，细

胞会再行生长。若在40℃左右，则在几小时内细胞便会死亡。因此高温对细的威胁甚大。

2)气体细胞的生长代谢自然离不开气体，容器空间中的O2及CO2足以保证细胞体内的代谢活动的进行，但作为代谢

产物的CO2在培养环境中还有另外一个重要作用，即调节PH的作用。

3)PH值细胞培养的PH最适为7.2一7.4间，当PH低于6.0 或高于7.6时，细胞的生长会受到影响，甚至导致死亡。

但是，多数类型的细胞对偏酸性的耐受性较强，而在偏碱性的情况下则会很快死亡。

4)营养在保证细胞渗透压的情况下，培养液里的成分要满足细胞进行糖代谢、脂代谢、蛋白质代谢及核酸代谢所需要

的各种组成，如包括十几种必需氨基酸及其它多种非必需氨基酸、维生素、碳水化合物及无机盐类等。

传代培养和原代培养的实验过程（原代培养没找到呀呀）

细胞的冻存与复苏的过程，细胞冻存液细胞的冻存和复苏的原则“缓冻速融”

冻存：

1 显微镜下观察培养细胞

2 制备细胞悬液（同贴壁细胞传代）

3 细胞悬液转入15mL离心管中，离心 1200rpm 5min

4 去上清

5 加入细胞冻存液（培养基中含10% DMSO （二甲亚砜），20-50%小牛血清）

6 放置室温冻存盒中，封闭严实

7 置-80 ℃冰箱过夜

8 转入液氮中（－196℃）

复苏：

1 从液氮中取出冷冻管（如为安瓶或无螺帽冷冻管，应防突然爆裂而伤皮肤和眼睛）

2 立即放入37℃水浴中，振荡，使之尽快融化（1～2分钟），如不是螺旋盖冷冻管，则要用镊子夹住冷冻管，防止水进入而造成污染。

3 将细胞悬液转入10 mL 预热的培养液中，混悬，离心洗涤，1200rpm，5min。

4 去上清，加入培养液，调细胞浓度为1～2×10

5 /mL

5转入细胞培养瓶中培养

细胞培养过程中的主要污染类型有哪些？如何预防和防治污染？

污染类型：细菌、真菌、病毒或细胞均可导致培养物污染。生物的组织材料、操作者自身、培养基、各种器皿、甚至环境均可引起污染。

预防和防治：显著污染的标志是培养基pH值的迅速改变、细胞外形模糊、甚至出现漂浮的集落。

1)组织出现污染，可加青霉素200U/mL、链霉素200U/mL、和制霉素100U/mL。

2)卡那霉素（100U/mL）是支原体药物，可抑制其感染，但不能根除。

对实验室工作者说来更严重的一种污染乃是其他细胞的交叉污染。

3)在任何时间，在一个工作区中决不能有一种以上的细胞系的细胞同时存在。

4)一种细胞系的细胞所用的培养基、器皿、移液管等决不能为另一种细胞系的细胞所移用。

5)一旦在同质的细胞群中出现不同形态的集落，则应怀疑是否发生了细胞污染，应用染色体组型及同功酶组型鉴定。细胞传代培养实验过程有那些？应该注意些什么问题？

细胞生长曲线分哪些时期

游离期细胞接种后在培养液中呈悬浮状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。

贴壁期细胞附着于底物上，游离期结束。细胞株平均在10分钟—4小时贴壁。

潜伏期此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。

对数生长期细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。

停止期（平台期）细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂。