免疫组织化学

病原体的检测 细胞增殖和凋亡的研究 细胞周期和信号转导的研究
IHC for CD20
Cytokeratin Expression in Normal Tissues
Cytokeratin Expression in Cancers
Vimentin Expression in Normal Tissues
http://en.wikipedia.org/wiki/Immunohistochemistry
http://ask.bbioo.com/special/experiment/immuno histochemistry.htm
一抗的正确选择与使用

首选单克隆抗体
高特异性 高亲和性 交叉反应少
简便 特异性高 每种标记抗体只 能检测一种抗原

敏感性高 每种标记抗 体能检测多 种抗原
双重或多重标记
Tumor – Double label • MultiCytokeratin (m), ABC Kit, Vector® NovaRED™ HRP substrate (red). • CD34 (m), ABC-AP Kit, BCIP/NBT AP substrate (blue).
生物素－亲和素系统与免疫组化技术

标记亲和素－生物素技术（LSAB） 桥式亲和素－生物素技术（BAB） 亲和素－生物素－过氧化物酶技术 （ABC）

链酶亲和素－生物素技术（S-P）
亲和素和链酶亲和素比较
分子量 亲和素 链酶亲和 素 67000 6000 等电点 10.0－10.5 6.0－6.5 非特异性 吸附 高 低
免疫组织化学基本实验流程
组织细胞标本
抗原修复
阻断内源性 过氧化物酶
滴加二抗
滴加特异性一抗
正常血清封闭
滴加三抗
显色
复染
封片
生物素－亲和素系统 (BAS)

生物素（biotin)-亲和素(avidin)主要作用原理
1.B-A的高度亲和力可相互连接形成稳定的复合物 2.B通过单一的生化反应结合大分子 eg Ab 3.A可与不同的标记物结合 eg 酶 荧光素

抗原抗体反应 标记化学反应 呈色化学反应
免疫化学应用
免疫印迹法
用一张膜即可获得多种 蛋白的表达信息，无需 洗膜和重新染色。
免疫化学应用
酶免疫测定法（ELISA）
酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)
免疫化学应用 （FCM）
工作原理：让荧光染色的 细胞在稳定的液流推动装 置作用下通过直径为50100um的小孔并排列成单 行，每个细胞依次而且恒 速通过激光束的照射区， 细胞受激光照射后产生散 射光和荧光。通过检测散 射光可知细胞的体积，检 测荧光可知细胞DNA或 RNA的含量。根据所规定 的参量可把指定的细胞亚 群从整个群体中分选出 来，以进一步研究分析。
Markers for Breast Cancers
PR
ER
HER-2 量子点双重 免疫荧光 HER-2+ER
Proliferation and Apoptosis
Mouse anti-PCNA (PC10) stained colonic mucosa
Tunel assay
IHC内容


抗原提取和纯化
http://www.ihcworld.com/introduction.htm
http://www.immunoportal.com/
http://www.immunohistochemistryprotocols.com/
http://www.protocolonline.org/prot/Immunology/Immunohistochemistry/index.html
Vimentin- Gastric carcinoma
Metastasis Detection
A lymphatic node containing micrometastatic colon carcinoma identified by cytokeratin antibody and consecutive immunohistochemical detection.
6.原位杂交技术
免疫酶组织化学技术

通过结合剂将酶结合至免疫球蛋白分子上形成稳定的酶标记 抗体 常用的酶 A:显色底物DAB-----棕黄色 B:显色底物AEC-----砖红色

1.辣根过氧化物酶(HRP)
2.碱性磷酸酶(AP) 显色底物:BCIP/NBT----蓝黑色
直接法与间接法比较

免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体并纯化

将显色剂与抗体结合形成标记抗体 组织、细胞材料的制备 免疫组织化学染色 结果观察以及定量分析
IHC分类

根据反应的层次
1.直接法 2.间接法

根据标记物
1.免疫荧光组织化学技术 2.免疫酶组织化学技术 3.免疫金银组织技术 4.免疫电镜技术 5.双重或多重免疫荧光或酶组织化学技术
IHC 特点

结构、功能、代谢相结合——原位检测 可确定和观察组织、细胞内化学成分和性质的变化 可达到方法统一、定性可靠、定位准确，且能相对 定量

高度的敏感性和特异性
Hale Waihona Puke Baidu
IHC应用

肿瘤诊断、鉴别诊断及肿瘤预后
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区分病变性质 确定肿瘤组织起源 确定肿瘤转移及范围 指导肿瘤临床治疗
正确使用 保存

二抗的正确选择与使用

种属来源要匹配 eg:一抗:鼠抗人PCNA 注意抗体的同种型和亚型 eg:一
抗:IgG1


正确使用
免疫组化标本种类

组织标本 石蜡切片 冰冻切片

细胞标本 细胞爬片 组织印片 细胞涂片
S-P法原理示意图
链酶亲和素
过氧化物酶
生物素
生物素化二抗
特异性一抗
待测抗原
非生物素－亲和素系统与免疫组化技术
Envision Method PV Method

Envision Method
HRP-IgG conjugate
http://www.histochem.net/
相关网页
免疫组织化学
Immunohistochemistry,IHC
概述

概念：IHC是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内 的抗原（或抗体）的分布进行定位、定性、定量检测， 经过组织化学呈色反应在组织原位显示抗原（或抗 体），如各种蛋白质、多肽、磷脂和多糖等成分的一门 新技术。 基本原理
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Tonsil – Triple label • CD3 (m), ABC Kit, DAB HRP substrate (brown). • CD20 (m), ABC Kit, Vector® SG HRP substrate (blue/gray). • Multi-Cytokeratin (m), ABC Kit, Vector® VIP HRP substrate (purple).