凝聚胺法交叉配血试验

凝聚胺法交叉配血试验操作规程

[目的]

保证交叉配血试验准确，确保临床输血安全。

[适用范围]

XXX医院输血科

[职责]

具有专业技术的工作人员主要负责XXX医院输血标本的交叉配血试验，但只对该单份标本负责。

[相关文件]

试剂采购、保存和使用管理程序

设备采购、使用管理程序

消毒与清洁管理程序

标本采集、运输、保存和报废管理程序

紧急用血管理程序

[相关记录]

仪器设备的采购、使用和维护记录

仪器的温度记录

恒温水温箱的换水和消毒记录

消毒液的配置记录

清洁消毒记录

试剂采购、使用记录

标本交接和报废记录

交叉配血记录

紧急用血记录

[实验原理]

红细胞表面带有大量的负电荷，以避免产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质中时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。

凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞与血清（血浆）中的抗体结合。其次加入的凝聚胺（Polybrene）溶液是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞的Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝集。最后加入的悬浮液（Resuspending）具有中和凝聚胺（Polybrene）阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝集而不会散开，试验结果为阳性。

[仪器器械]

玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。

[试剂]

生理盐水、凝聚胺试剂、Anti-human IgG血清，均为有合格证件的正品。

[试剂保存和稳定性]

1．凝聚胺试剂须保存在2-25℃（其中阴、阳对照血清应储存在2~8℃）。在适当储存条件下有效期24个月。

2．抗人IgG血清低温冰箱保存。复溶后放2—4℃冰箱保存。

3．凝聚胺试剂

①低离子介质溶液（LIM）：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2钠及稳定剂。

②凝聚胺溶液（Polybrene）：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。

③复悬液（Resuspending）：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。

④阳性对照血清：含抗D血清、氯化钠及稳定剂。

⑤阴性对照血清：含AB血浆、氯化钠及稳定剂，不含红细胞血型抗体。[标本收集与处理]

1、受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。

2、2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，先用生理盐水洗涤红细胞3

3

输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。

4、标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。

[实验方法与步骤]

1、分别制备受血者和献血者3~5%的红细胞悬液（取2支使管分别标注为受血者管和献血者管，再分别加入2ml生理盐水，在受血者管加入1滴受血者红细胞，在献血者管加入1滴献血者红细胞，混匀后备用）。

2、取4支使管，分别标注主侧、次侧、阴性对照和阳性对照：

主侧管：先加入2滴受血者血清（血浆），再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液；

次侧管：先加入2滴献血者血清（血浆），再加入1滴受血者2~5%红细胞悬液；

阴性对照管：先加入2滴阴性对照血清，再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液；阳性对照管：先加入2滴阳性对照血清，再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液。

3、混匀后各加入LIM溶液0.65ml，轻轻混匀，于室温下静置1分钟。

4、再各加入2滴Polybrene溶液，轻轻混匀，于室温下静置15秒。

5、用交叉配血专用离心机3400 r/min（相当于1000g离心力）离心10秒，然后倒掉上清液（不要沥干），让管底残留约0.1 ml液体。

6、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。重做后仍然没有凝集现象出现，可能试剂失效。

7、最后各加入2滴Resuspending溶液，轻轻摇动试管并同时目测凝集是否散开，再进一步倒在玻片上用显微镜观察凝集是否散开。如果在60秒内凝集散开，表明是由Polybrene引起的非特异性凝集，配血结果相合；如果凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。

如果想进一步检测Anti-K抗体，则必须继续做辅助性的抗球蛋白试验，步骤如下：

8、再滴入1滴Resuspending溶液。

9、用生理盐水洗红细胞3—5次，并把最后一次上清液完全倒干。

10、滴入2滴Anti-human IgG血清，并混匀。

11、用交叉配血专用离心机3400rpm离心15s.

12、观察有无凝集反应，如果有凝集反应，表示有Anti-K抗体，则必须进一步做抗体冲出试验，供血者的血液不适合病人使用。如果没有凝集反应，为了确保输血的安全性，须再各添加1滴已知致敏性红细胞至所有没有凝集的试管中，混匀，3400rpm 离心1分钟。正常应有2+反应。如果没有凝集反应，可能是假阴性，辅助性抗球蛋白试验必须重做。

[结果判断]

1、ABO同型配血，主侧和次侧均无溶血及凝集表示无输血禁忌，可以输血。

2、如急需输血但一时无同型血液，作异型配血时（指O型血输给A，B或AB型，或A，B型血输给AB型时），主侧无溶血及凝集，但次侧必然有凝集或溶血。

[质量控制与注意事项]

1、在进行交叉配血试验时，一定要严格按操作规程进行，每进行一步操作，必须进行一次核对，防止操作错误，尤其防止主侧和次侧加样加错。操作方法应按规定先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。同时，注意区别凝聚胺所引起的凝集反应。

2、受血者标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。2~5%红细胞悬液要求准确，必要时用生理盐水洗涤红细胞后重新配制。

3、如果主侧发生凝集反应，说明配血不合，不论次侧配血如何都不能输血。如果仅次侧配血发生凝集反应，只有在紧急情况下才有可能考虑是否输血。

4、可以用EDTA抗凝血浆代替血清使用，不能使用溶血标本及含有枸橼酸钠、肝素的抗凝血浆标本。

5、加Polybrene溶液离心去上清后不凝集，可能是标本中含有肝素或其它干扰因子。若病人血清(血浆)含有肝素或其它干扰因子，如洗肾患者，需多加4~6滴Polybrene 溶液以中和肝素或其它干扰因子。

6、红细胞悬液以3~5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显而易误判。

7、未开封的试剂应储存于温度在2~25℃、相对湿度不大于80%、无腐蚀性气体的环境中；已开封的试剂应储存于相对湿度不大于80%、无腐蚀性气体和通风良好的室温环境中；试剂用后应及时拧紧瓶盖保存；未开封试剂的有效期为两年，在有效期内已开封的试剂应在开封后的6个月内使用完。

8、试管，滴管吸头和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

9、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。

10、各种原因引起的红细胞溶解，易误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。

11、中国人极少有Anti-K抗体，但其他人种比例较高，尤其是白种人，所以，当病人是其他人种时，为求安全起见，应加做辅助性抗球蛋白试验。加做辅助性抗球蛋白试验是为了增加检测Anti-K抗体的敏感度，对检测其他的抗体无帮助。所以，除非想进一步检测Anti-K抗体，否则不须做到辅助性抗球蛋白试验。

12、进行交叉配血前逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和