药敏试验
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代号 P-G ERY 抗生素 青霉素G 青霉素 红霉素 纸片 含药量 10IU 15IU 10IU 抑菌环直径（ 抑菌环直径（mm） ） 耐药 ≤20 ≤13 ≤12 中介 21～28 ～ 14～22 ～ 13～14 ～ 敏感 ≥29 ≥23 ≥15 ≥8 ≥8 相应的MIC（µg/ml） （ 相应的 ） 耐药 敏感 ≤0.1 ≤0.5 ≤4
(二)培养基和抗菌药物纸片 1．抗菌药物纸片 选择直径为 ． 选择直径为6.35mm， ， 吸水量为20µl的专用药敏纸片，用逐 的专用药敏纸片， 吸水量为 的专用药敏纸片 片加样或浸泡方法使每片含药量达规 定要求。含药纸片密封贮存于 ℃ ℃ 定要求。含药纸片密封贮存于2℃-8℃， 且不超过1周 且不超过 周。 2．培养基 水解酪蛋白（M-H）培养基是 ． 水解酪蛋白（ ） 兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培 养基， ℃保存。 养基，4℃保存。
实验六 抗 菌 药 物 敏 感 性 试 验
Antimicrobial Sensitivity Test
意义： 意义：
可预测抗菌药物治疗的效果， 敏感” ① 可预测抗菌药物治疗的效果， “敏感”治疗可能 有 效；“耐药” 可能失败； 耐药” 可能失败； 指导临床医生合理选择抗生素，AST的结果为 的结果为“ ② 指导临床医生合理选择抗生素，AST的结果为“耐 药”，则应更换药物； 则应更换药物； 提供所选择药物的依据； ③ 提供所选择药物的依据； 监测耐药性，分析耐药菌变迁， ④ 监测耐药性，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染 病流行病学， 病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行
3. 接种：将试验菌株在普通琼脂上划线培养，挑取 接种：将试验菌株在普通琼脂上划线培养， 4～5个形态特征一致的菌落接种于无菌 ～ 个形态特征一致的菌落接种于无菌 个形态特征一致的菌落接种于无菌M-H肉汤 肉汤 中培养8h，用生理盐水调节菌液浓度使其为 中培养 ，用生理盐水调节菌液浓度使其为0.5 麦氏标准管浊度（ × 麦氏标准管浊度（1×108CFU/mL)，然后再用生 ， 理盐水稀释10倍 理盐水稀释 倍，在15min内用定量接种器吸取 内用定量接种器吸取 1～2µL接种于制备好的 ～ 接种于制备好的M-H琼脂表面。并做好 琼脂表面。 接种于制备好的 琼脂表面 标记，标明接种点的位置。 标记，标明接种点的位置。首先接种无药对照平 皿，随后从最低药物浓度开始依次接种不同浓度 的药物平皿。接种后的平皿在室温下静置，待接 的药物平皿。接种后的平皿在室温下静置， 种点水份被琼脂吸收再将平皿反转， 种点水份被琼脂吸收再将平皿反转，于37℃培养 ℃ 18～24h。 ～ 。
二、稀释法：琼脂稀释法 稀释法：
将药物混匀于琼脂培养基中， 将药物混匀于琼脂培养基中，配制含不同 浓度药物平板， 浓度药物平板，使用多头接种器接种细 菌，经孵育后观察细菌生长情况，以抑 经孵育后观察细菌生长情况， 制细菌生长的琼脂平板所含药物浓度测 得MIC。 MIC。 MIC： MIC：稀释法所测得的某抗菌药物能抑制 被检菌肉眼可见生长的最低浓度
琼脂稀释法具体实验步骤： 琼脂稀释法具体实验步骤： 1. 抗菌药物储备液的配制：将各种抗菌药物制备 抗菌药物储备液的配制： 成琼脂稀释法试验需要的药物浓度。 成琼脂稀释法试验需要的药物浓度。 2. 含药琼脂培养皿的制备：将灭菌熔化的 含药琼脂培养皿的制备：将灭菌熔化的M-H 琼脂在水浴中平衡至48～50℃，培养皿置超净 琼脂在水浴中平衡至 ～ ℃ 台上。 台上。将稀释好的中间浓度的抗菌药物溶液 2mL与18mL M-H琼脂混匀，立即倒入培养皿 与 琼脂混匀， 琼脂混匀 中，培养基厚度约4mm。待培养基冷却并使 培养基厚度约 。 琼脂表面的水份蒸发干后备用。 琼脂表面的水份蒸发干后备用。
（二）微量稀释法实验步骤： 微量稀释法实验步骤： 1. 将纯化的细菌接种肉汤，置37℃培养箱中培 将纯化的细菌接种肉汤， ℃ 养16-24h。 。 2. 按照测定的 按照测定的CFU值将菌液稀释到 值将菌液稀释到107CFU/ml 值将菌液稀释到 3. 在微量平板 在微量平板1-12孔加无菌肉汤 孔加无菌肉汤100µl。 孔加无菌肉汤 。 4. 第1孔中加 孔中加100µl药物原液 药物原液2560µg/ml倍比稀 孔中加 药物原液 倍比稀 释到10孔 孔稀释好后吸100µl弃去。 弃去。 释到 孔，第10孔稀释好后吸 孔稀释好后吸 弃去
5. 11孔为不加菌液对照，12孔为不加药物对照 孔为不加菌液对照， 孔为不加药物对照 孔为不加菌液对照 6. 在1-10孔、12孔中各孔加 孔中各孔加5µl 107CFU/ml的 孔 孔中各孔加 的 菌液 7. 在微量振荡器上振荡，37℃培养箱中培养 在微量振荡器上振荡， ℃ 24-48h 8. 观察结果：培养后 观察结果：培养后24h记录 记录MIC，培养后 记录 ， 48h记录 记录MBC 记录 注意：每种药物作两个重复 注意：
4. 用镊子蘸取 用镊子蘸取95%乙醇并通过火焰，待 乙醇并通过火焰， 乙醇并通过火焰 烧干后再蘸取乙醇重复上述操作， 烧干后再蘸取乙醇重复上述操作，共三 次即可达到灭菌的效果。待冷却后， 次即可达到灭菌的效果。待冷却后，用 此无菌镊子夹取不同药敏纸片， 此无菌镊子夹取不同药敏纸片，按一定 间隔贴在平板的不同区域，即两纸片间 间隔贴在平板的不同区域， 距不小于24 距不小于 mm，纸片距平板边缘不小 ， 于15mm。 。 5. 35℃温箱培养18～24h观察结果。 ℃温箱培养 ～ 观察结果。 观察结果
（四）结果判断和报告 用精确度为1mm的游 用精确度为1mm的游 1mm 标卡尺量取抑菌圈直径。 标卡尺量取抑菌圈直径。 根据NCCLS标准， 根据NCCLS标准，作出 NCCLS标准 “敏感”、“耐药”和 敏感” 耐药” “中介”的判断。 中介”的判断。
几种抗生素抑菌环解释标准及相应的最低抑菌浓度
（三）试验步骤 三 1.用接种环分别在琼脂平板上挑取形态相似 用接种环分别在琼脂平板上挑取形态相似 的大肠杆菌菌落4～ 个 接种于3～ 的大肠杆菌菌落 ～5个，接种于 ～5mL肉 肉 汤管中 2.35℃温箱培养2～8h，与标准比浊管比较， ℃温箱培养 ～ ，与标准比浊管比较， 若菌液浓度太浓时， 若菌液浓度太浓时，可用肉汤或生理盐水 稀释至与0.5麦氏标准比浊管浊度 麦氏标准比浊管浊度相同 稀释至与 麦氏标准比浊管浊度相同 3.在15min内，用无菌棉签蘸取菌液，并在管 在 内 用无菌棉签蘸取菌液， 壁上挤去多余的菌液后涂布于M-H琼脂平 壁上挤去多余的菌液后涂布于 琼脂平 板上（注意：涂布要均匀、致密）， ），待干 板上（注意：涂布要均匀、致密），待干
二、稀释法：肉汤稀释法 稀释法：
（一）常量稀释法实验步骤： 常量稀释法实验步骤： 1. 取无菌小试管10支排于试管架，于第一管加入 取无菌小试管 支排于试管架， 支排于试管架 MH肉汤 肉汤1.9ml，2～10管各加 管各加1ml。 肉汤 ， ～ 管各加 。 2. 于第一管加入稀释好的 于第一管加入稀释好的2560µg/mL的药物原液 的药物原液 0.1ml，混匀后取1ml加入第 管，依次对倍 ，混匀后取 加入第2管 加入第 稀释，自第 管吸出 管吸出1ml弃去，第10管为对照 弃去， 稀释，自第9管吸出 弃去 管为对照 管。各管中的药物终浓度为128、64、32、 各管中的药物终浓度为 、 、 、 16、8、4、2、1、0.5µg/mL。 、 、 、 、 、 。
无菌肉汤100uL 菌液5uL 无菌肉汤 菌液 倍比稀释
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三、E 试 验
（一）原理 5mm×50mm的无孔试剂载体 的无孔试剂载体， E试条是一条 5mm×50mm的无孔试剂载体，一 面固定有预先制备的， 面固定有预先制备的，浓度呈连续指数增长稀释 抗生素，另一面有读数和判别的刻度。 抗生素，另一面有读数和判别的刻度。将E试条放 在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜， 在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕 试条明显可见椭圆形抑菌圈， 试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交 点的刻度浓度即为抗生素抑制细菌的最低浓度。 点的刻度浓度即为抗生素抑制细菌的最低浓度。
药敏试验常用方法： 药敏试验常用方法：
1. 纸片扩散法（Disk Diffusion Test）： 纸片扩散法（ ）： Kirby-Bauer法（K-B纸片琼脂扩散法）和 法 纸片琼脂扩散法） 纸片琼脂扩散法 直接纸片药敏法 2. 稀释法（Dilution Test）： 稀释法（ ）： 琼脂稀释法和肉汤稀释法 3. 抗生素浓度梯度法 试 验（E-test） 抗生素浓度梯度法-E ）
一、纸片扩散法
（一）试验原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种 测试菌的琼脂平板上， 测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药 物吸收琼脂中水分， 物吸收琼脂中水分，溶解后不断向纸片周 围扩散形成递减的梯度浓度。 围扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围 抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制， 抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制， 从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。 从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的 敏感程度，并与该药对测试菌的MIC MIC呈负 敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负 相关关系，即抑菌圈愈大，MIC值愈小 值愈小。 相关关系，即抑菌圈愈大，MIC值愈小。
3. 另设测试菌生长对照管一支不含药物。将已调 另设测试菌生长对照管一支不含药物。 节好的待测菌悬液0.1mL加入各含药管内， 加入各含药管内， 节好的待测菌悬液 加入各含药管内 使每mL含细菌约 ×105CFU/mL。 含细菌约5× 使每 含细菌约 。 4. 各试管置 ℃孵育 ～24h后观察结果。 各试管置37℃孵育16～ 后观察结果。 后观察结果 5. 质控菌对照按上述操作平行进行。 质控菌对照按上述操作平行进行。 药物储备液、菌液的制备、 药物储备液、菌液的制备、结果判断同琼脂稀 释法。 释法。
（六）质量控制 采用质控标准菌株和测试菌在同一条件下做 药敏试验 目的： 目的： 检查试验条件（如培养基、含药纸片和接 检查试验条件（如培养基、 种菌量） 种菌量）和操作技术等是否合格 质控标准菌株： 质控标准菌株： 大肠杆菌ATCC 25922、粪肠球菌ATCC 大肠杆菌ATCC 25922、粪肠球菌ATCC 29212、金黄色葡萄球菌ATCC 25923等 29212、金黄色葡萄球菌ATCC 25923等
GEN 庆大霉素
（五）药物敏感试验结果解释
“敏感”（susceptible，S）：表示测试菌可被测 敏感” ）：表示测试菌可被测 敏感 ， ）： 定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度 所抑制； 所抑制； ）：表示测试菌不能被在 “耐药”（resistant，R）：表示测试菌不能被在 耐药” ， ）： 体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制， 体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制， 临床治疗无效。 临床治疗无效。 “中介”（intermediate，I）：表示测试菌对常 中介” ， ）：表示测试菌对常 ）： 规用药体液或组织中的药物浓度的反应率低于 敏感株，使用高于正常给药量有疗效 敏感株，使用高于正常给药量有疗效。
4. 结果判读：首先检查不含抗菌药物的对照组平 结果判读： 板，必须每一菌株都有生长。平板放在黑色不 必须每一菌株都有生长。 反光的表面上观察， 反光的表面上观察，记录能完全抑制细菌生长 的抗菌药物的最低抑菌浓度（ 的抗菌药物的最低抑菌浓度（磺胺可见少许散 在细菌生长）。生长稀少或仅有一两个菌落的 在细菌生长）。生长稀少或仅有一两个菌落的 ）。 可忽略不计。如果低浓度药物平皿无菌，高浓 可忽略不计。如果低浓度药物平皿无菌， 度药物平皿却有细菌生长，应重复试验， 度药物平皿却有细菌生长，应重复试验，检查 待测细菌的纯度。 待测细菌的纯度。 5.质量控制：每个琼脂平板应同时接种标准菌株 质量控制： 质量控制 （如大肠杆菌ATCC 25922）作为质控菌。 如大肠杆菌 ）作为质控菌。
(二)培养基和抗菌药物纸片 1．抗菌药物纸片 选择直径为 ． 选择直径为6.35mm， ， 吸水量为20µl的专用药敏纸片，用逐 的专用药敏纸片， 吸水量为 的专用药敏纸片 片加样或浸泡方法使每片含药量达规 定要求。含药纸片密封贮存于 ℃ ℃ 定要求。含药纸片密封贮存于2℃-8℃， 且不超过1周 且不超过 周。 2．培养基 水解酪蛋白（M-H）培养基是 ． 水解酪蛋白（ ） 兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培 养基， ℃保存。 养基，4℃保存。
实验六 抗 菌 药 物 敏 感 性 试 验
Antimicrobial Sensitivity Test
意义： 意义：
可预测抗菌药物治疗的效果， 敏感” ① 可预测抗菌药物治疗的效果， “敏感”治疗可能 有 效；“耐药” 可能失败； 耐药” 可能失败； 指导临床医生合理选择抗生素，AST的结果为 的结果为“ ② 指导临床医生合理选择抗生素，AST的结果为“耐 药”，则应更换药物； 则应更换药物； 提供所选择药物的依据； ③ 提供所选择药物的依据； 监测耐药性，分析耐药菌变迁， ④ 监测耐药性，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染 病流行病学， 病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行
3. 接种：将试验菌株在普通琼脂上划线培养，挑取 接种：将试验菌株在普通琼脂上划线培养， 4～5个形态特征一致的菌落接种于无菌 ～ 个形态特征一致的菌落接种于无菌 个形态特征一致的菌落接种于无菌M-H肉汤 肉汤 中培养8h，用生理盐水调节菌液浓度使其为 中培养 ，用生理盐水调节菌液浓度使其为0.5 麦氏标准管浊度（ × 麦氏标准管浊度（1×108CFU/mL)，然后再用生 ， 理盐水稀释10倍 理盐水稀释 倍，在15min内用定量接种器吸取 内用定量接种器吸取 1～2µL接种于制备好的 ～ 接种于制备好的M-H琼脂表面。并做好 琼脂表面。 接种于制备好的 琼脂表面 标记，标明接种点的位置。 标记，标明接种点的位置。首先接种无药对照平 皿，随后从最低药物浓度开始依次接种不同浓度 的药物平皿。接种后的平皿在室温下静置，待接 的药物平皿。接种后的平皿在室温下静置， 种点水份被琼脂吸收再将平皿反转， 种点水份被琼脂吸收再将平皿反转，于37℃培养 ℃ 18～24h。 ～ 。
二、稀释法：琼脂稀释法 稀释法：
将药物混匀于琼脂培养基中， 将药物混匀于琼脂培养基中，配制含不同 浓度药物平板， 浓度药物平板，使用多头接种器接种细 菌，经孵育后观察细菌生长情况，以抑 经孵育后观察细菌生长情况， 制细菌生长的琼脂平板所含药物浓度测 得MIC。 MIC。 MIC： MIC：稀释法所测得的某抗菌药物能抑制 被检菌肉眼可见生长的最低浓度
琼脂稀释法具体实验步骤： 琼脂稀释法具体实验步骤： 1. 抗菌药物储备液的配制：将各种抗菌药物制备 抗菌药物储备液的配制： 成琼脂稀释法试验需要的药物浓度。 成琼脂稀释法试验需要的药物浓度。 2. 含药琼脂培养皿的制备：将灭菌熔化的 含药琼脂培养皿的制备：将灭菌熔化的M-H 琼脂在水浴中平衡至48～50℃，培养皿置超净 琼脂在水浴中平衡至 ～ ℃ 台上。 台上。将稀释好的中间浓度的抗菌药物溶液 2mL与18mL M-H琼脂混匀，立即倒入培养皿 与 琼脂混匀， 琼脂混匀 中，培养基厚度约4mm。待培养基冷却并使 培养基厚度约 。 琼脂表面的水份蒸发干后备用。 琼脂表面的水份蒸发干后备用。
（二）微量稀释法实验步骤： 微量稀释法实验步骤： 1. 将纯化的细菌接种肉汤，置37℃培养箱中培 将纯化的细菌接种肉汤， ℃ 养16-24h。 。 2. 按照测定的 按照测定的CFU值将菌液稀释到 值将菌液稀释到107CFU/ml 值将菌液稀释到 3. 在微量平板 在微量平板1-12孔加无菌肉汤 孔加无菌肉汤100µl。 孔加无菌肉汤 。 4. 第1孔中加 孔中加100µl药物原液 药物原液2560µg/ml倍比稀 孔中加 药物原液 倍比稀 释到10孔 孔稀释好后吸100µl弃去。 弃去。 释到 孔，第10孔稀释好后吸 孔稀释好后吸 弃去
5. 11孔为不加菌液对照，12孔为不加药物对照 孔为不加菌液对照， 孔为不加药物对照 孔为不加菌液对照 6. 在1-10孔、12孔中各孔加 孔中各孔加5µl 107CFU/ml的 孔 孔中各孔加 的 菌液 7. 在微量振荡器上振荡，37℃培养箱中培养 在微量振荡器上振荡， ℃ 24-48h 8. 观察结果：培养后 观察结果：培养后24h记录 记录MIC，培养后 记录 ， 48h记录 记录MBC 记录 注意：每种药物作两个重复 注意：
4. 用镊子蘸取 用镊子蘸取95%乙醇并通过火焰，待 乙醇并通过火焰， 乙醇并通过火焰 烧干后再蘸取乙醇重复上述操作， 烧干后再蘸取乙醇重复上述操作，共三 次即可达到灭菌的效果。待冷却后， 次即可达到灭菌的效果。待冷却后，用 此无菌镊子夹取不同药敏纸片， 此无菌镊子夹取不同药敏纸片，按一定 间隔贴在平板的不同区域，即两纸片间 间隔贴在平板的不同区域， 距不小于24 距不小于 mm，纸片距平板边缘不小 ， 于15mm。 。 5. 35℃温箱培养18～24h观察结果。 ℃温箱培养 ～ 观察结果。 观察结果
（四）结果判断和报告 用精确度为1mm的游 用精确度为1mm的游 1mm 标卡尺量取抑菌圈直径。 标卡尺量取抑菌圈直径。 根据NCCLS标准， 根据NCCLS标准，作出 NCCLS标准 “敏感”、“耐药”和 敏感” 耐药” “中介”的判断。 中介”的判断。
几种抗生素抑菌环解释标准及相应的最低抑菌浓度
（三）试验步骤 三 1.用接种环分别在琼脂平板上挑取形态相似 用接种环分别在琼脂平板上挑取形态相似 的大肠杆菌菌落4～ 个 接种于3～ 的大肠杆菌菌落 ～5个，接种于 ～5mL肉 肉 汤管中 2.35℃温箱培养2～8h，与标准比浊管比较， ℃温箱培养 ～ ，与标准比浊管比较， 若菌液浓度太浓时， 若菌液浓度太浓时，可用肉汤或生理盐水 稀释至与0.5麦氏标准比浊管浊度 麦氏标准比浊管浊度相同 稀释至与 麦氏标准比浊管浊度相同 3.在15min内，用无菌棉签蘸取菌液，并在管 在 内 用无菌棉签蘸取菌液， 壁上挤去多余的菌液后涂布于M-H琼脂平 壁上挤去多余的菌液后涂布于 琼脂平 板上（注意：涂布要均匀、致密）， ），待干 板上（注意：涂布要均匀、致密），待干
二、稀释法：肉汤稀释法 稀释法：
（一）常量稀释法实验步骤： 常量稀释法实验步骤： 1. 取无菌小试管10支排于试管架，于第一管加入 取无菌小试管 支排于试管架， 支排于试管架 MH肉汤 肉汤1.9ml，2～10管各加 管各加1ml。 肉汤 ， ～ 管各加 。 2. 于第一管加入稀释好的 于第一管加入稀释好的2560µg/mL的药物原液 的药物原液 0.1ml，混匀后取1ml加入第 管，依次对倍 ，混匀后取 加入第2管 加入第 稀释，自第 管吸出 管吸出1ml弃去，第10管为对照 弃去， 稀释，自第9管吸出 弃去 管为对照 管。各管中的药物终浓度为128、64、32、 各管中的药物终浓度为 、 、 、 16、8、4、2、1、0.5µg/mL。 、 、 、 、 、 。
无菌肉汤100uL 菌液5uL 无菌肉汤 菌液 倍比稀释
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三、E 试 验
（一）原理 5mm×50mm的无孔试剂载体 的无孔试剂载体， E试条是一条 5mm×50mm的无孔试剂载体，一 面固定有预先制备的， 面固定有预先制备的，浓度呈连续指数增长稀释 抗生素，另一面有读数和判别的刻度。 抗生素，另一面有读数和判别的刻度。将E试条放 在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜， 在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕 试条明显可见椭圆形抑菌圈， 试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交 点的刻度浓度即为抗生素抑制细菌的最低浓度。 点的刻度浓度即为抗生素抑制细菌的最低浓度。
药敏试验常用方法： 药敏试验常用方法：
1. 纸片扩散法（Disk Diffusion Test）： 纸片扩散法（ ）： Kirby-Bauer法（K-B纸片琼脂扩散法）和 法 纸片琼脂扩散法） 纸片琼脂扩散法 直接纸片药敏法 2. 稀释法（Dilution Test）： 稀释法（ ）： 琼脂稀释法和肉汤稀释法 3. 抗生素浓度梯度法 试 验（E-test） 抗生素浓度梯度法-E ）
一、纸片扩散法
（一）试验原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种 测试菌的琼脂平板上， 测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药 物吸收琼脂中水分， 物吸收琼脂中水分，溶解后不断向纸片周 围扩散形成递减的梯度浓度。 围扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围 抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制， 抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制， 从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。 从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的 敏感程度，并与该药对测试菌的MIC MIC呈负 敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负 相关关系，即抑菌圈愈大，MIC值愈小 值愈小。 相关关系，即抑菌圈愈大，MIC值愈小。
3. 另设测试菌生长对照管一支不含药物。将已调 另设测试菌生长对照管一支不含药物。 节好的待测菌悬液0.1mL加入各含药管内， 加入各含药管内， 节好的待测菌悬液 加入各含药管内 使每mL含细菌约 ×105CFU/mL。 含细菌约5× 使每 含细菌约 。 4. 各试管置 ℃孵育 ～24h后观察结果。 各试管置37℃孵育16～ 后观察结果。 后观察结果 5. 质控菌对照按上述操作平行进行。 质控菌对照按上述操作平行进行。 药物储备液、菌液的制备、 药物储备液、菌液的制备、结果判断同琼脂稀 释法。 释法。
（六）质量控制 采用质控标准菌株和测试菌在同一条件下做 药敏试验 目的： 目的： 检查试验条件（如培养基、含药纸片和接 检查试验条件（如培养基、 种菌量） 种菌量）和操作技术等是否合格 质控标准菌株： 质控标准菌株： 大肠杆菌ATCC 25922、粪肠球菌ATCC 大肠杆菌ATCC 25922、粪肠球菌ATCC 29212、金黄色葡萄球菌ATCC 25923等 29212、金黄色葡萄球菌ATCC 25923等
GEN 庆大霉素
（五）药物敏感试验结果解释
“敏感”（susceptible，S）：表示测试菌可被测 敏感” ）：表示测试菌可被测 敏感 ， ）： 定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度 所抑制； 所抑制； ）：表示测试菌不能被在 “耐药”（resistant，R）：表示测试菌不能被在 耐药” ， ）： 体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制， 体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制， 临床治疗无效。 临床治疗无效。 “中介”（intermediate，I）：表示测试菌对常 中介” ， ）：表示测试菌对常 ）： 规用药体液或组织中的药物浓度的反应率低于 敏感株，使用高于正常给药量有疗效 敏感株，使用高于正常给药量有疗效。
4. 结果判读：首先检查不含抗菌药物的对照组平 结果判读： 板，必须每一菌株都有生长。平板放在黑色不 必须每一菌株都有生长。 反光的表面上观察， 反光的表面上观察，记录能完全抑制细菌生长 的抗菌药物的最低抑菌浓度（ 的抗菌药物的最低抑菌浓度（磺胺可见少许散 在细菌生长）。生长稀少或仅有一两个菌落的 在细菌生长）。生长稀少或仅有一两个菌落的 ）。 可忽略不计。如果低浓度药物平皿无菌，高浓 可忽略不计。如果低浓度药物平皿无菌， 度药物平皿却有细菌生长，应重复试验， 度药物平皿却有细菌生长，应重复试验，检查 待测细菌的纯度。 待测细菌的纯度。 5.质量控制：每个琼脂平板应同时接种标准菌株 质量控制： 质量控制 （如大肠杆菌ATCC 25922）作为质控菌。 如大肠杆菌 ）作为质控菌。