花青素提取

桑椹酒渣中花青素提取

1材料与方法

1.1材料

桑椹果酒酒渣。

1.2试剂药品

试验所用95%乙醇、浓盐酸、30%过氧化氢、Na2SO3等试剂均为分析纯。

1.3主要仪器

电子分析天平、分光光度计、旋转蒸发仪、酸度计、高速冷冻离心机、电热恒温水浴锅等。

1.4方法（稀HCl+95%乙醇提取）

样品称量，用提取剂提取，过滤（减压过滤/板框过滤），所得的提取液按一定比例稀释（pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀）释后在分光光度计上测出OD值，以OD值代表桑椹红色素的含量。

1.4.1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较

分别以75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。

1.4.2不同物料与提取剂之比对花青素提取的影响（此时用提取效果最好的提取剂）。

1.4.3温度对提取效果的影响

以最佳结果作为桑椹提取剂，分别于60、50、40、30、20℃下提取1h。

1.4.4提取时间对提取效果的影响

每隔20分钟取样测得OD值。

1.4.5正交实验

1.4.6得率试验

称取一定量样品，经提取后。提取液经旋转蒸发仪蒸发，真空干燥，求得率。

方法一稀HCl+95%乙醇提取

1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较

固定浸提温度、提取时间、液料比，分别85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）为提取剂进行浸提试验，色

素提取液分别采用pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀释一定倍数(吸光值在0.2~0.8之间)，将稀释液静置15min，分别测定两种样品稀释液ODλmax和700nm处的吸光值A。按公式计算桑椹花色苷含量，分析提取溶剂对花色苷提取量的影响。

注：ODλmax的确定分别以85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。

2不同物料与提取剂之比对花青素提取的影响（此时用提取效果最好的提取剂）。

分别称取2.0g酒渣，按液料比5、10、15、20、25、30加入相应体积的浸提溶剂，在40℃下避光提取2h后，抽滤、离心(3000rpm，10min)。取1mL清液，用pH 1.0和pH 4.5的缓冲溶液稀释(吸光值在0.2～0.8之间)，分别测定两种样品稀释液在ODλmax和700nm处的吸光值A，按公式计算花色苷含量，并对液料比作图，分析液料比对色素提取量的影响。

3温度对提取效果的影响

分别称取2.0g酒渣置入5个50mL的三角瓶中，各加入浸提溶剂，搅拌5 min，用封口膜将瓶口密封并用铝箔纸包裹好以避光。分别置于30℃、40℃、50℃、60℃、70℃的恒温水浴上提取2h后，抽滤、离心(3000rpm，10min)。取1mL上清液，用pH 1.0和pH 4.5的缓冲液稀释(吸光值在0.2～0.8之间)，分别测定两种样品稀释液在ODλmax和700nm处的吸光值A，按公式计算花色苷含量，并对温度作图，分析温度对色素提取量的影响。

4提取时间对提取效果的影响

每隔30分钟取样测得OD值。用pH 1.0和pH 4.5的缓冲液稀释(吸光值在0.2～0.8之间)，分别测定两种样品稀释液在ODλmax和700nm处处的吸光值A，按公式计算花色苷含量，并对时间作图，分析提取时间对色素提取量的影响。

5桑椹红色素酸性乙醇溶剂提取条件的正交试验

根据单因素试验的结果，选取L9(34)正交试验表，以浸提溶剂中乙醇浓度、浸提时

间、浸提温度、液料比为因素，安排4水平做正交试验，以确定提取的最佳条件。

方法二超声波辅助提取桑椹红色素

1超声波功率对红色素提取的影响

精确称取2.0g桑椹酒渣若干份，按液料比？分别加入？提取液，在30℃温度下，分别以200～700 W超声功率萃取20min。抽滤、离心得到色素粗提液，用pH1.0和pH4.5缓冲液稀释(吸光值控制在0.2～0.8之间)，分别测定两种样品稀释液在ODλmax和700nm处的吸光值A，按公式计算花色苷含量，并对超声功率作图，分析功率对色素提取量的影响。

2超声温度对色素提取量的影响

精确称取2.0g桑椹酒渣若干份，按液料比？分别加入？提取液，以？W超声功率分别在20～60℃温度下萃取20min。抽滤、离心得到色素粗提液，用pH1.0和pH4.5缓冲溶液稀释(吸光值在0.2～0.8之间)，分别测定两种样品稀释液在ODλma x和700nm姗处的吸光值A，按公式计算花色苷含量，并对超声温度作图，分析温度对色素提取量的影响。

3超声时间对色素提取量的影响

精确称取2.0g桑椹酒渣若干份，按液料比？分别加入？提取液，在？℃温度下，以？W 超声功率分别萃取5、10、15、20、25、30min。抽滤、离心得到色素粗提液，用pH1.0和pH4.5缓冲溶液稀释(吸光值在0.2～0.8之间)，分别测定两种样品稀释液在ODλmax和700nm处的吸光值A，按公式计算花色苷含量，并对超声时间作图，分析时间对色素提取量的影响。

4桑椹红色素超声波辅助提取条件的正交试验

根据单因素试验的结果，选取L9(34)正交试验表，以超声功率、超声温度、超声时间为因素，安排3水平做正交试验，以确定提取的最佳条件。

方法三微波辅助提取桑椹红色

选择微波辅助提取温度30℃、40℃、50℃、60℃、70℃ , 以微波功率500W、600W、700W、800W、900W,微波辐射时间2S、4S、6S、8S、10S以及液料比10:1、20:1、30:1、40:1、50:1为单因素考察因素.

选择其中重要的3因素进行正交实验。

最后HPLC分析：

将三种方法所得到的产品进行HPLC分析，看其活性物质是否有变化，主要是后面两种方法是否对活性物质改变。