抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义

抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA)检测及临床意义

――间接荧光免疫(ＩIF)方法(欧盟)

一、ANCA概念及分类

抗中性粒细胞胞浆抗体就是一种以中性粒细胞与单核细胞胞浆成份为靶抗原得自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病得诊断与鉴别诊断具有重要得意义,已成为自身免疫性疾病得一项非常重要得常规检测项目。

目前,已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为AＮCA得靶抗原,蛋白酶3(ＰR3),髓过氧化物酶（ＭPO），人白细胞弹性蛋白酶（HＥＬ），乳铁蛋白(LＦ）,组织蛋白酶G（Cath G),杀菌/通透性增强蛋白(BPI），人溶酶体相关膜蛋白2 (H —ＬＡMP2),溶菌素(LYS）,天青杀素，防御素，烯醇化酶,葡萄糖醛酸酶。

根据乙醇固定得中性粒细胞基质片中,可以区分两种不同得荧光模型：

一种胞浆型(c—AＮCA),就是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中得颗粒型荧光,细胞核无荧光。在乙醇与甲醛固定得中性粒细胞片中,其荧光模型表现相同。其主要得靶抗原就是蛋白酶3(PR3)。

另一种就是核周型（p—ANＣA）,就是围绕中性粒细胞细胞核周围得平滑带状荧光。由多种抗原引起,主要靶抗原就是髓过氧化物酶(ＭPO）,人白细胞弹性蛋白酶(HEL）,乳铁蛋白（ＬF),组织蛋白酶G(Cath Ｇ),杀菌/通透性增强蛋白(BPI),人溶酶体相关膜蛋白2 (H—LＡMP2）,溶菌素(LYS)等。不同抗体在乙醇与甲醛固定得中性粒细胞片中,其荧光模型表现有所不同.抗MPO抗体产生得ｐ－ＡNCA因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定得中性粒细胞中出现得c—ＡNＣＡ类似故叫甲醛抗性得p—ＡＮCA。而其她非ＭＰO抗体不与甲醛固定得中性粒细胞反应,无荧光表现,这种类型又称为甲醛敏感得p—AＮCA。故根据乙醇与甲醛固定得中性粒细胞片表现,可初步判定ANCA得靶抗原ＰＲ3，MPＯ，非MPO三类。

二、ＡＮＣA得检测

间接荧光免疫方法就是检测ＡNCA得参考方法或者标准方法,至今也就是最

常用得经典方法。ＩＩF就是区分ｃ-ANCA与ｐ-ANCA得基础,有较高敏感性,可半定量,但IＩF测定得就是总ANCＡ，不能准确区分靶抗原，需特异性得检测方法作为补充。

由于多种免疫性疾病患者存在ANA,用IＩF法检测ＡNCA时,会产生干扰实验结果得判断。为避免干扰现象,采用了四基质联合得检测即:乙醇固定得粒细胞;甲醛固定得粒细胞;Ｈeｐ—2（人喉癌细胞）细胞;猴肝细胞。基质片各细胞分布及意义如表一所述。ＡNCＡ荧光模型及表现如表二所述。

表一:四联基质片分布及意义

表二：ANＣＡ荧光模型及表现

三、注意事项

为提高对疾病诊断得特异性，检测时应注意以下问题

１、检测AＮCA，一般建议同时做ＩIＦ初筛与确认实验,以提高AＮCＡ得临床应用价值,不做单独初筛或单独确认实验，以免降低对疾病诊断得特异性。

2、不能仅检测抗PR3与MPＯ两种特异性抗体,而不检测,这样容易限制ANCA对疾病诊断得特异性。

３、用IIF检测时，仅使用乙醇固定得粒细胞片,这样不能严格排除ANA得干扰，容易出现假阳性。

四、临床意义

(一)AＮCA与原发性小血管炎

韦格纳肉芽肿（WG），显微多动脉炎(ＭPＡ）,坏死性新月体性肾小球肾炎（NCGN）与变应性肉芽肿性血管炎（ＣSS）等等原发性系统性小血管炎得发病与ANCA密切相关,临床上已将上述疾病统称为ＡNCＡ相关小血管炎。AＮＣA，特异性PＲ3抗体与抗MPＯ抗体得检测已成为原发性小血管炎得敏感特异得血清学检测项目。

１、抗PR3抗体

特异性PR3抗体为WG得标志性抗体,抗ＰR3抗体荧光模型以ｃ—AＮCA为主。但以c-ANCA诊断WG特异性为90％,而以抗PＲ3抗体得特异性可超过95％.抗PＲ3抗体在其她得原发性血管炎中业可以检测出来，但阳性率较低。

抗ＰR3抗体敏感度与疾病得活动性及病程有关，在疾病得早期症状不明显时,就可出现阳性。因而抗PR3抗体常作为ＷG得早期诊断、疗效判断、复发估计得指标,对临床治疗有重要得参考价值。

２、抗ＭPO抗体

抗MＰＯ抗体荧光模型以p-ANCA为主,主要与ＭPA、NCGＮ、ＣＳS相关.还可见于其她疾病，如节结性多动脉炎,抗肾小球基底膜肾病,WG，SLE，RA,药物诱导得狼疮,Feltｙ综合症等。抗体滴度与疾病活动性相关，可用于早期诊断、疗效判断、复发估计得指标,对临床治疗有重要得参考价值。

抗ＭPO抗体阳性高度提示坏死性血管炎或特发性NCGN,对诊断原发性小血管炎得特异性达到99%.因而每一个不明原因得血管炎或肾小球肾炎得患者，都应该检测ANCA。

表三:AＮCA与原发性小血管炎

（二)ANCＡ与药物诱导性血管炎

近年来不断有药物治疗引起得AＮＣＡ阳性得病例报道，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪,普鲁卡因酰胺，青酶胺，美满霉素，她巴唑/甲巯咪唑等。其中报道比较多得就是长期使用丙基硫氧嘧啶引起得ANCA,其特点就是滴度高,抗体谱广（抗原

主要就是ＭPO，也可同时伴有或单独出现其她靶抗原,如PＲ３，LF，Cath Ｇ，BPI,LＹS等)。

药物诱导性血管炎患者临床表现与原发性血管炎类似,停止丙基硫氧嘧啶用药后,临床症状好转,ＡＮCA可转阴。因此,长期使用丙基硫氧嘧啶治疗过程中，应定期检测ANCA,及早发现药物诱导性血管炎。

(三)ＡＮＣA与其她疾病

除原发性血管炎外，其她一些疾病中也可出现ＡNCA，主要为p—ＡNCA,其靶抗原并非PR，ＭＰO,而就是LF，Ｃath G,BＰI,LYＳ等

1、慢性炎症性肠病(CIBD)

CIＢD就是一种消化系统得自身免疫性疾病,包括溃疡性结肠炎（UＣ）,克罗恩病(CD)两种。以往得CIＢD诊断依赖X线检查，内窥镜及组织学诊断,缺乏有效得试验室指标。近年来研究发现UＣ病人血清中ANCＡ阳性率为60-80％，而C Ｄ患者得阳性率为１0－20%,多为p—ANCA,相关靶抗原有ＢＰI等。滴度与疾病得活动度与病程无关。因为p—ANＣA在ＵC阳性率高,CD阳性率低,故可作为两者得鉴别诊断及UC早期诊断指标。

２、结缔组织病

在结缔组织病中,ANCA阳性主要见于SLE与ＲA,其她结缔组织病中少见。但文献报道在SLE与ＲA阳性率差异特别大（1６－６9%)，这可能与使用方法,抗原基质片及工作人员水平有很大关系。

ＳLE中ANCＡ阳性可能与慢性炎症反应有关,如动脉炎，浆膜炎与CRP增加等。有报道抗ＭPＯ抗体与RA得关节外损害及血管损害有关。

3、自身免疫性肝病

在自身免疫性肝病中,也可检测到p—ANCＡ。在原发性硬化性胆管炎(PSC)患者中，p-ANＣA阳性率高达7０—８0%，就是该病重要得血清学指标.

4、其她疾病