细菌的培养及鉴定思路ppt课件

抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
革兰染色程序
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 碘液 1’ 95%乙醇 30” 复红 1’
冲洗
滤纸干燥
油镜观察
革兰染色
成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌 由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密， 故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小， 再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因 此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫 色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量 高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂 为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡 结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈 无色，再经复红等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌 呈红色。
操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰 焰芯
细菌接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
细菌接种法
平板划线接种法： ★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，
形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法： ★分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ★连续划线法：适用于含菌量较少的标本
细菌在液体培养基中的生 长现象：
细菌在半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向 外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线 边缘清晰。
细菌在半固体培养基中的生长现象
无动力 现象
有动力 现象
斜面接种法
接种斜面后菌落生长示意图（菌苔）
革兰染色
原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形
细菌培养及鉴定思路
内江市第一人民医院
叶帮芬
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明来源和检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
标本接收原则
严格实行核对制度 ：包括姓名、性别、年
1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称S 型
2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型 3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又称M型
S型菌落
2021/2/11
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R型菌落
M型菌落
细菌在液体培养基中的生长现象
混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌
显微镜下的杆菌
Hale Waihona Puke Baidu
革兰染色注意事项
标本涂片不宜太厚 固定不宜过热 脱色不宜过度 选用培养18--24小时菌龄的细菌为宜
抗酸染色
原理：分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中
主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染 色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性 乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红 的颜色,达到染色目的。
龄、门诊号/住院号、病床号、标本类型、容器、 标识、检验目的等。
所有拒收或退回标本均应在登记本上登 记，登记内容包括：病人姓名、病区、床号
送检医师、送检项目、拒收(退回)原因、拒收 时间、经手人等
痰标本涂片染色低倍镜下分类
分级 白细胞（个） 上皮细胞（个）
A
>25
<10
B
>25
<25
C
<10
>25
甲
紫紫色色（（GG＋＋））
菌
初染 媒染 脱色 复染
革结兰晶氏紫 染碘色液步骤乙示醇 意图稀释复红
乙
红色（G-）
菌
革兰染色步骤示意图
【结果】
细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；
阳性菌——紫色（G+b
阴性菌——红色（G-b)
G+ 球菌
G-杆菌
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
真菌显色平板—真菌培养用 罗氏培养基—分枝杆菌用
接种工具
接种针和接种环 ：由三部分组成，即环 （针）、金属柄和绝缘 柄 接种针：用于穿刺接种细菌 接种环：用于固体、液体培养基的细菌 接种
器具：接种环（上）和接种针（下）
2—5cm
柄约22cm
5—8cm
金属柄约14.5cm
绝缘柄 约7.5cm
安装环(针)的螺口(约8mm)
液体培养基接种法 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数
分区划线法(3区)
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
连续划线法
细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养 箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧 罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
细菌在固体培养基中的生长现象
菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形
成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透
明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型
（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
菌落
菌落与菌苔
菌落的三个类型：
A、B两种情况的痰适合做培养，C不合格，应重新留标 本
常用的培养基种类和用途
哥伦比亚血平板—营养要求高的细菌 巧克力平板—含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、 脑膜炎球菌和淋球菌用 中国蓝/麦康凯平板—G-杆菌用 SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用 M-H平板—细菌药敏用 TCBS平板—弧菌科细菌用 沙包氏平板—真菌培养用