13第十三章 分支杆菌属

六、免疫性与变态反应
• 结核杆菌侵入机体后，机体主要产生细胞免疫 结核杆菌侵入机体后，机体主要产生细胞免疫 • 结核病的细胞免疫和体液免疫存在分离现象，细胞 结核病的细胞免疫和体液免疫存在分离现象， 免疫随病情加重而减弱， 免疫随病情加重而减弱，体液免疫则随病情的加重而 增强。 增强。 • 结核杆菌在激发机体免疫应答的同时，迟发性 结核杆菌在激发机体免疫应答的同时， 变态反应随之产生。可用于结核病检测。 变态反应随之产生。可用于结核病检测。 结核菌素： 结核菌素：是结核杆菌的蛋白质组分之一
3.动物接种： 动物接种： 4.变态反应： 变态反应： 5.血清学检查： 血清学检查：
皮肿胀厚度差≥4mm为阳性； 皮肿胀厚度差≥4mm为阳性； ≥4mm为阳性 皮肿胀厚度差在2 mm为疑似； 皮肿胀厚度差在2-4mm为疑似； 为疑似 皮肤肿胀厚度差在2mm以下为阴性 皮肤肿胀厚度差在2mm以下为阴性
病灶内的结核分支杆菌 抗酸染色） （抗酸染色）
痰液内的结核分支杆菌 荧光染色） （荧光染色）
二、培养与生化特性
本菌为专性需氧菌，对营养要求严格， * 本菌为专性需氧菌，对营养要求严格，添加特殊营养才能生长 生长缓慢 一般需10-30d看到菌落，呈颗粒、结节或菜花状 缓慢， 看到菌落， * 生长缓慢，一般需 看到菌落 呈颗粒、 液体培养基，形成浮于液面有皱褶的菌膜 液体培养基，形成浮于液面有皱褶的菌膜 常用的培养基 的培养基： * 常用的培养基：罗杰二氏培养基 丙酮酸培养基 小川培养基
第十三章 分支杆菌及相似属
内容提要 第一节 分支杆菌属 第二节 放线菌属 第三节 第四节 第五节 奴卡菌属 棒状杆菌属 红球菌属
第一节： 第一节：分支杆菌属
本届菌均为平直或微弯的杆菌 有时分支， 菌均为平直或微弯的杆菌， * 本届菌均为平直或微弯的杆菌，有时分支，呈丝状 无鞭毛、芽孢、荚膜，革兰氏阳性菌。 无鞭毛、芽孢、荚膜，革兰氏阳性菌。 抗酸菌菌体细胞壁含有大量类脂（ ％ ％） 菌体细胞壁含有大量类脂 * 抗酸菌菌体细胞壁含有大量类脂（ 20％-40％） 抗酸染色呈红色（非抗酸菌蓝色） 抗酸染色呈红色（非抗酸菌蓝色）
微生物学诊断
1.显微镜检查： 1.显微镜检查： 显微镜检查
取粪便、直肠刮取物，涂片、抗酸染色发现红色成丛的 取粪便、直肠刮取物，涂片、抗酸染色发现红色成丛的 两端钝圆的中小杆菌，即可确诊。 两端钝圆的中小杆菌，即可确诊。
2.分离培养： 2.分离培养： 分离培养
病料用2%NaOH或4%H2SO4液处理，中和后接种于固体培养基， 液处理，中和后接种于固体培养基， 病料用2%NaOH或 2%NaOH 37℃培养 培养5 发现菌落生长时进行鉴定。 37℃培养5-7周，发现菌落生长时进行鉴定。
病料处理： 病料处理：用4%NaOH或3%HCl、6%H2SO4液处理 或 、 液处理 15min后，经中和、离心，取 沉淀物用于接种。 后 经中和、离心， 沉淀物用于接种。 细菌培养：处理物物接种于培养基，37℃培养8周，培养阳性 细菌培养：处理物物接种于培养基，37℃培养8 进行培养特性和生化特性鉴定。 时，进行培养特性和生化特性鉴定。 抗酸酸色— 抗酸酸色—发现红色成丛杆菌
旧结核菌素（ ） 旧结核菌素（OT） 结核杆菌液体培养物加热浓缩过滤制成的 纯蛋白衍生物（ 纯蛋白衍生物（PPD） OT经三氯醋酸沉淀后的纯化物 ） 经三氯醋酸沉淀后的纯化物 核菌素 皮内注射或 滴入眼结膜囊 阳性： 阳性：炎症反应 阴性： 阴性：无反应
七、微生物学诊断
1.显微镜检查： 显微镜检查： 2.分离培养： 分离培养：
抵抗力
对自然环境抵抗力较强
在粪便和土壤中存活11个月 在粪便和土壤中存活 个月 牛乳中存活10个月 个月。 牛乳中存活 个月。 耐酸和碱， 液中30min仍保持活力 耐酸和碱，4%NaOH或5%H2SO4液中 或 液中 仍保持活力 60℃ 30min、80℃1-5min即可杀死即可杀死 ℃ 、 ℃ 即可杀死即可杀死 一般消毒剂杀灭本菌
3.变态反应诊断： 方法同结合病 3.变态反应诊断： 变态反应诊断
副结核菌素或 用提纯的副结核菌素 禽结核菌素（PPD） 用提纯的副结核菌素或禽结核菌素（PPD）
补体结合反应或酶联免疫吸附试验（ELISA） 补体结合反应或酶联免疫吸附试验（ELISA） 4.血清学检查 血清学检查： 4.血清学检查： 检测抗体来进行诊断。 抗体来进行诊断 检测抗体来进行诊断。
培养需要特殊营养条件才能生长 特殊营养条件才能生长， * 培养需要特殊营养条件才能生长，生长速度缓慢
结核分支杆菌、牛分支杆菌、禽分支杆菌和 * 结核分支杆菌、牛分支杆菌、禽分支杆菌和副结核分支杆菌
一、形态与细胞壁组成
形态： 菌体细长、直或微弯；牛分支杆菌菌体较短而粗； 形态： 菌体细长、直或微弯；牛分支杆菌菌体较短而粗；禽分支 杆菌呈多形性。在陈旧培养基或病灶内菌体可见分支。 杆菌呈多形性。在陈旧培养基或病灶内菌体可见分支。 糖脂（ ） 组成： 本菌的细胞壁不仅有肽聚糖，还有特殊的糖脂 组成： 本菌的细胞壁不仅有肽聚糖，还有特殊的糖脂（10%） 影响染色 染色、 影响染色、免疫佐剂
核分支杆菌 的培养物
三、抵抗力 抵抗力很强
干燥的环境中可存活6-8个月 干燥的环境中可存活 个月 湿热的抵抗力较弱， 湿热的抵抗力较弱，62-63℃15min即可杀死 ℃ 即可杀死 对4%NaOH、3%HCl、6%H2SO4 、 、 有抵抗力15min不受影响 不受影响——病料的处理 有抵抗力 不受影响 病料的处理 一般的消毒药作用不大
牛分支杆菌：主要引起牛结核病，其他家畜、 牛分支杆菌：主要引起牛结核病，其他家畜、野生 反刍动物、 反刍动物、人、灵长目动物 猫等肉食动物均可感染。 犬、猫等肉食动物均可感染。豚 敏感，家禽无致病性。 鼠、兔 敏感，家禽无致病性。 禽分支杆菌：主要引起禽结核，包括家禽与野禽， 禽分支杆菌：主要引起禽结核，包括家禽与野禽， 也可引起猪的局限性病灶。 也可引起猪的局限性病灶。 结核杆菌：主要引起人的结核病，灵长类动物、 结核杆菌：主要引起人的结核病，灵长类动物、犬及其 他与人接触的动物均可感染。豚鼠、 他与人接触的动物均可感染。豚鼠、仓鼠 敏感，禽不敏感。 敏感，禽不敏感。
五、变异性
该菌可发生多种变异现象。 10ug/m1异烟肼 该菌可发生多种变异现象。1-10ug/m1异烟肼 多种变异现象 ug/m1 可诱导本菌形态变异产生L 胞壁消失， 可诱导本菌形态变异产生L型，胞壁消失，呈多型 产生对异烟肼的耐药性 耐药性。 性，产生对异烟肼的耐药性。
卡氏(Calmette)和介氏 Galmette)将牛分支 和介氏( 卡氏(Calmette)和介氏(Galmette)将牛分支 杆菌在培养基上经13 230次传代 13年 次传代， 杆菌在培养基上经 13 年 230 次传代 ， 有毒菌株变 为毒力减弱的菌株，对人、牛无致病性， 为毒力减弱的菌株，对人、牛无致病性，培育出 广泛应用的卡介苗 卡介苗。 广泛应用的卡介苗。
形态与染色特性
本菌为短杆菌，大小为0.2-0.5um*0.5-1.5um，无鞭毛、不形 本菌为短杆菌，大小为0.2-0.5um*0.5-1.5um，无鞭毛、 短杆菌 0.2 um*0.5 成荚膜和芽孢，在病料和培养基上成丛排列 革兰氏阳性， 成丛排列， 成荚膜和芽孢，在病料和培养基上成丛排列，革兰氏阳性，抗酸 染色阳性。 染色阳性。
复习思考题
1.简述结核杆菌的形态、染色特性与细胞壁的结构关系。 1.简述结核杆菌的形态、染色特性与细胞壁的结构关系。 简述结核杆菌的形态 2.简述结核杆菌的致病作用和免疫特点 简述结核杆菌的致病作用和免疫特点。 2.简述结核杆菌的致病作用和免疫特点。 3.叙述简述结核杆菌的微生物学诊断程序。 3.叙述简述结核杆菌的微生物学诊断程序。 叙述简述结核杆菌的微生物学诊断程序
八、免疫与治疗
犊牛在1月龄时也可皮下接种卡介苗100mg，20d产生免疫， 100mg 犊牛在1月龄时也可皮下接种卡介苗100mg，20d产生免疫， 可维持12 18个月 12- 个月。 可维持 12 - 18 个月 。 接种卡介苗的牛一年后仍维持变态反应阳 在用结核菌素检疫时无法与自然感染牛区别，因而不宜推 性，在用结核菌素检疫时无法与自然感染牛区别，因而不宜推 广应用。 广应用。 不接种卡介苗， 按规定，饲养牛群不接种卡介苗 每年春、秋需进行检疫， 按规定，饲养牛群不接种卡介苗，每年春、秋需进行检疫， 结核菌素变态反应检测阳性者，要隔离饲养。 结核菌素变态反应检测阳性者，要隔离饲养。对检出的患结核 病动物要扑杀处理。 病动物要扑杀处理。 该病为人畜共患病，凡对人结核病有效的药物， 该病为人畜共患病，凡对人结核病有效的药物，对动物也 有效。但除珍稀或观赏动物外，不提倡用药物治疗。 有效。但除珍稀或观赏动物外，不提倡用药物治疗。
ห้องสมุดไป่ตู้
副结核菌抗酸染色照片
培养特性
本菌为需氧菌，最适pH6.8-7.2， 本菌为需氧菌，最适pH6.8-7.2，最 需氧菌 pH6.8 适温度37℃ 属于慢生长种 一般需6 37℃。 慢生长种（ 适温度37℃。属于慢生长种（一般需6-8 ），对营养要求严格 对营养要求严格， 周），对营养要求严格，在添加特殊营 养的培养基上才能生长，菌落粗糙、 养的培养基上才能生长，菌落粗糙、隆 边缘不整齐、不透明，呈颗粒、 起、边缘不整齐、不透明，呈颗粒、结 节或菜花状。液体培养基， 节或菜花状。液体培养基，形成浮于液 面有皱褶的菌膜 皱褶的菌膜。 面有皱褶的菌膜。
对常用的磺胺类及多种抗生素药物不敏感 对链霉素、异烟肼、利福平、 对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸等敏感 但长期用易产生抗药菌株
四、致病机理及致病性
本菌以细胞内寄生和形成局部病灶为特点。 本菌以细胞内寄生和形成局部病灶为特点。 细胞内寄生 为特点 细菌—呼吸道肺泡 被巨噬细胞吞噬 形成病灶， 细菌 呼吸道肺泡—被巨噬细胞吞噬 形成病灶，干酪样坏死 呼吸道肺泡 被巨噬细胞吞噬—形成病灶 坏死灶被吞噬细胞、 细胞与 细胞等包围，形成结核结节。 细胞与B细胞等包围 坏死灶被吞噬细胞、T细胞与 细胞等包围，形成结核结节。 本菌毒力因子：细菌能在吞噬细胞内存活， 本菌毒力因子：细菌能在吞噬细胞内存活，与其一种表达类 吞噬细胞内存活 溶血素的产物的基因有关 由于胞壁富含糖脂 的产物的基因有关。 糖脂， 似溶血素的产物的基因有关。由于胞壁富含糖脂，可保护本菌 免受吞噬细胞形成的吞噬溶酶体的氧化破坏。 免受吞噬细胞形成的吞噬溶酶体的氧化破坏。