大实验三米曲霉固体发酵制曲(参考课件)
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
14
附：大实验四“苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis; B.t）杀虫剂液体摇瓶发酵”方案设计
研究内容：1）培养基组成对B.t芽孢形成的影响 2）通气状况对B.t芽孢形成的影响
以实验小组为单位，根据研究内容自行查阅资料， 拟定实验方案，于下次实验课提交教师审阅、修改、确 定实验方案。
实验步骤 (continued)
已培养好的米曲霉孢子斜面一支，加入约10ml无菌水， 洗下孢子，制成孢子悬液。
注意：勿使孢子飘落实验室
5
4、接种：
实验步骤 (continued)
每茄瓶加入孢子悬液2ml，抖动茄瓶，使孢子悬液与麸 皮培养基混匀。
Байду номын сангаас
6
5、培养：
实验步骤 (continued)
28℃培养4天 其间，于接种24～48h左右抖动茄瓶翻曲一次 观察记录菌丝生长及孢子形成情况
15
素材和资料部分来自 网络，如有帮助请下载!
大实验三 米曲霉固体发酵制曲
1
实验目的要求 1、学习固体发酵工艺 2、制备米曲霉固体曲，测定蛋白酶活力
2
实验原理
3
实验步骤
1、制备麸皮固体培养基：
25g麸皮，加15ml水（加水量40%～60%），拌匀； 装茄瓶。
2、灭菌：
0.1Mpa 灭菌20～30min，冷却至室温。
4
3、制备孢子悬液菌种：
10
实验步骤 (continued)
5）培养（反应）： 将加样后的平板小心平端放入30℃培养箱，放置20小时左右。 6）观察结果： 可直接观察透明圈有无、测定透明圈直径；也可向平板 滴加少量10%三氯乙酸，以增强观察效果。
11
实验结果
12
实验报告 1、实验原理、方法步骤、结果及分析 2、思考题
7
另一次实验
8
6、蛋白酶活力测定：
实验步骤 (continued)
1）粗酶液制备： 向一茄瓶中加入无菌水约100ml，浸泡固体曲1h；过滤得 粗酶液。
2）倒平板： 融化酪蛋白明胶双基质固体培养基，每人倒一平板。
9
实验步骤 (continued)
3）打孔： 打孔器经酒精燃烧灭菌后，每平板打1～3孔，并在酒精灯 火焰上稍稍加热打孔处，使孔周围的培养基微融，然后平 放冷却。 4）加样： 往孔内加入粗酶液适量（约100ul），可设对照。
13
准 备：
1、10%三氯乙酸 2、双基质固体培养基
（以对应的L-R组配制，每L-R组配400ml，分装3瓶）
配方：10g干酪素，10g明胶，18g琼脂，1000ml， pH7.0 配法：干酪素先用0.2N NaOH溶解，倒入热水中加热搅拌 至完全溶解；适量1N HCl调至pH7.0；加入明胶和琼脂， 继续加热至完全融化。
附：大实验四“苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis; B.t）杀虫剂液体摇瓶发酵”方案设计
研究内容：1）培养基组成对B.t芽孢形成的影响 2）通气状况对B.t芽孢形成的影响
以实验小组为单位，根据研究内容自行查阅资料， 拟定实验方案，于下次实验课提交教师审阅、修改、确 定实验方案。
实验步骤 (continued)
已培养好的米曲霉孢子斜面一支，加入约10ml无菌水， 洗下孢子，制成孢子悬液。
注意：勿使孢子飘落实验室
5
4、接种：
实验步骤 (continued)
每茄瓶加入孢子悬液2ml，抖动茄瓶，使孢子悬液与麸 皮培养基混匀。
Байду номын сангаас
6
5、培养：
实验步骤 (continued)
28℃培养4天 其间，于接种24～48h左右抖动茄瓶翻曲一次 观察记录菌丝生长及孢子形成情况
15
素材和资料部分来自 网络，如有帮助请下载!
大实验三 米曲霉固体发酵制曲
1
实验目的要求 1、学习固体发酵工艺 2、制备米曲霉固体曲，测定蛋白酶活力
2
实验原理
3
实验步骤
1、制备麸皮固体培养基：
25g麸皮，加15ml水（加水量40%～60%），拌匀； 装茄瓶。
2、灭菌：
0.1Mpa 灭菌20～30min，冷却至室温。
4
3、制备孢子悬液菌种：
10
实验步骤 (continued)
5）培养（反应）： 将加样后的平板小心平端放入30℃培养箱，放置20小时左右。 6）观察结果： 可直接观察透明圈有无、测定透明圈直径；也可向平板 滴加少量10%三氯乙酸，以增强观察效果。
11
实验结果
12
实验报告 1、实验原理、方法步骤、结果及分析 2、思考题
7
另一次实验
8
6、蛋白酶活力测定：
实验步骤 (continued)
1）粗酶液制备： 向一茄瓶中加入无菌水约100ml，浸泡固体曲1h；过滤得 粗酶液。
2）倒平板： 融化酪蛋白明胶双基质固体培养基，每人倒一平板。
9
实验步骤 (continued)
3）打孔： 打孔器经酒精燃烧灭菌后，每平板打1～3孔，并在酒精灯 火焰上稍稍加热打孔处，使孔周围的培养基微融，然后平 放冷却。 4）加样： 往孔内加入粗酶液适量（约100ul），可设对照。
13
准 备：
1、10%三氯乙酸 2、双基质固体培养基
（以对应的L-R组配制，每L-R组配400ml，分装3瓶）
配方：10g干酪素，10g明胶，18g琼脂，1000ml， pH7.0 配法：干酪素先用0.2N NaOH溶解，倒入热水中加热搅拌 至完全溶解；适量1N HCl调至pH7.0；加入明胶和琼脂， 继续加热至完全融化。