反相高效液相色谱柱C18保护柱说明

酸性及两性小分子化合物的分析。对于酸性和两性化合物，调流动相到pH2~3左右质子化酸性官能团时可取得极佳峰形和良好分离。对于碱性化合物，调流动相到pH1~3时可取得比较好的峰形。但在许多情况下，也可将流动相pH调至4~8甚至更高，以维持化合物稳定性或改变分离选择性。pH4~8时推荐使用10~100mM缓冲盐溶液。对于峰明显拖尾的强碱性化合物，推荐添加10~20mM三乙胺或5~10mM二甲基辛胺改善峰形。这个时候特别推荐使用BetaBasic C18或TX产品。

柱性能

Innovation TM ZW&A C18色谱柱性能参数(柱效、拖尾因子、测试条件等)详见产品测试证书。

色谱柱安装和使用

旋下色谱柱两端柱头，按照色谱柱标签上液体流动方向将其连接于仪器。色谱柱不使用时，旋上两端柱头。

样品和流动相

为了避免堵塞色谱柱，样品和流动相使用前，须过0.45um滤膜、甚至孔径更小的滤膜。流动相为有机相和水相混合相，例如甲醇-水、乙腈-水。流动相脱气后方可使用。

操作注意点

承载溶剂：由于C18键合相为非极性相，因此，流动相最好为甲醇-水、乙腈-水等混合相。一般情况，随着有机相比例的增加，样品的保留时间会缩短。梯度洗脱时，10%甲醇或乙腈常作为初始流动相，100%甲醇或乙腈常作为终点流动相。需要说明的是，C18键合相可以与大多数有机相兼容。对于新的色谱柱，柱内含有甲醇(或乙腈)和水混合相，因此，用户初次使用的流动相中不能含有与之反应的成分。应首先用60%左右甲醇冲洗色谱柱，以除去色谱柱在包装和运输过程中引入的杂质。然后使用目标流动相。如果柱压或基线出现波动，说明柱内有气泡，此时，应打开排气阀，同时把流速调至更高，并维持2~5min，以除去气泡，例如，对于250×4.6mm色谱柱，可将流速调至3mL/min。

pH：推荐pH使用范围为2~8。

温度：如果流动相黏度较高，可采用升高柱温的办法以提高分离效率。虽然最高操作温度为70℃，但是，为了更长的使用寿命，建议最佳操作温度为<50℃，在温度高于70℃下连续使用，可能损坏色谱柱，尤其是在pH>8或pH<2条件下，对色谱柱损坏更大。

流速：对于5um250×4.6mm色谱柱，标准流速为1mL/min。

柱保护：为了防止流动相或样品中的杂质，在色谱柱之前最好安装一个保护柱或预柱。通常情况下，预柱能阻止来自于样品、流动相、泵或进样器的杂质，对色谱柱起到保护作用。

文章转自：/com/dongkangkeji/news/itemid-16.html