CCK8测细胞存活率

CCK-8法测细胞存活率

1、在96孔板中配置100μL 的5000 CelL／mL细胞悬液。将培养板在培养箱预

）。

培养24h（37℃，5% CO

2

2、向培养板加入10μL不同浓度的多肽1uM、2 uM 、5uM、10uM。每种多肽浓度设3个复孔，并设不加细胞液的调零孔和只加细胞液、不加肽液的空白对照孔。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24h。

4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4h。

6、一般用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24h内测定，吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

活力计算：

细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100

A（加药）：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度

A（0加药）：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

多肽稀释：母液40uM 100ul 1000uM 4ul +96ul PBS

10uM 60ul 40uM 15ul +45ul PBS

５uM40ul40uM5ul +35ul PBS

2uM 40ul 10uM 8ul +32ul PBS

1uM 40ul 10uM 4ul +36ul PBS

A=pisL9K20 A1-A4（10uM、5uM、2uM、1uM）= A5-A8 =A8-A12

B=pis L9K22TG

C= pis L9K22WK

D=GV21-2

E= 空白E1-E3 = 100ul培养基+10ul CCK 0加药E5-E7 = 100ul细胞+10ul CCK