美国药典微生物检测精要

美国药典微生物检测精要

培训小结

一微生物实验室规范

重要的控制点：无菌技术、培养基控制、菌种控制、设备操作与控制、数据记录与实验室布局和运作、员工培训等。

1无菌技术：防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作方法和管理方法。可通过无菌环境、灭菌、消毒、卫生要求、无菌操作技术等手段来实现。

2培养基：是微生物实验工作的核心。包括培养基制备、培养基储存、培养基质量控制。2.1培养基制备

2.1.1根据既定的目的选用正确的培养基

2.1.2参考生产商的ＣＯＡ和说明书：关于配制、储存和菌种选用等。

2.1.3所用的水应为去离子水或蒸馏水，应记录用量。

2.1.4成分的称量应用校准过的天平，根据称量量的不同选择合适的天平。使用清洁的容器

和工具（<1051>玻璃器皿清洁）以防外来污染和抑制剂。应记录称量量。

2.1.5加热帮助溶解时应防止过度加热，通常培养基颜色变深说明加热过度了。

2.1.6灭菌条件：

●灭菌参数应验证，验证应同时考虑无菌和培养基生长能力

●采用高压蒸汽灭菌或过滤灭菌。湿热灭菌应考虑装载分布，加热速度过慢会使培养

基过度加热，通常为121℃15min，此时间是指培养基温度达到121℃后15min。

●保证最低SAL，在无菌和过度加热之间平衡。

●与污染物分开灭菌

●消毒结束后，不应在灭菌柜中储存培养基，过度加热会影响培养基颜色、澄清、pH

和凝固能力。

2.2培养基储存

2.2.1制备培养基的储存

●琼脂培养基易受冷冻影响，低于0℃会破坏凝胶结构。

●应避光避热，密封防止水分蒸发（建议使用螺旋盖的瓶子密封，保存时间长）。

2.2.2培养基融化

●不能超过一次，以防过度加热或潜在污染。

●融化可采用水浴、流通蒸汽或微波炉加热。微波炉加热宜采用少量多次，以防过度。

●培养基融化后在40-50℃水浴中储存不应超过8小时，浇制平皿前应擦干以防污染。

2.2.3培养基标示

●培养基名称

●批号、制备批号

●制备日期、有效期

2.2.4有效期确定

●根据成分、配方、容器、储存条件等确定

●有生长能力试验数据支持

2.2.5应在验证过的条件下储存

2.2.6重要区域环控用培养基必须

●双层包装

●最终灭菌，否则进行全数培养及用前检查

2.2.7根据当地生物危险品安全程序处置过期培养基

2.3培养基质控

2.3.1灭菌后培养基检查

2.3.1.1生长能力

●每批制备的培养基均需进行

●测试菌种根据药典，供应商说明书及环境中分离得到

●测试不合格应进行调查，如无原因，或无有效纠正措施，不得使用该批号

2.3.1.2无菌

2.3.1.3pH

2.3.1.4容器/平皿的完整性

2.3.1.5抑制或指示能力

2.3.2定期稳定性检查以确认储存有效期

3菌种保藏

3.1建立标准程序处理、保存菌种，防止污染和特性变化

3.2使用前确认菌种身份和纯度

3.3根据生产商说明书复苏菌种，使用接种技术

3.4-70℃以下或冷冻干燥保存储备菌种，可延长保存周期

3.5开启后不要重新冷冻菌种，剩余部分应弃置

3.6传代次数（每接种一次即为一代）不超过5次

3.7保藏时间根据具体保藏条件确定

4设备维护

4.1定期校准、保养

4.2定期性能检查

4.3定期清洁、消毒

5实验室布局和运作

5.1防止交叉污染

5.2活动分区：无菌、环控样品的处理和培养应在无菌环境中进行

5.3当发现微生物生长，后续的工作应转移至“阳性”区

5.4环控设备应放置在待取样区域环境中并小心操作

5.5应在受控条件下小心取样

6样品处理

6.1大部分样品、水或环控样品中的微生物对操作、储存环境敏感

6.2减少样品，取样与测试间的时间间隔

6.3长时间的转移需确认转移条件对测试及样品的影响

6.4在无菌条件下，使用无菌技术取样，即使是非无菌样品

6.5取样记录：样品信息、取样日期、送样日期、人员/部门、实验室样品接受及确认7培养基培养时间

7.1短于3天，用小时表示

7.2长于3天，用天表示（上午、下午，相同时间段）

8人员培训

8.1每个岗位应有相应培训要求，进行上岗前资质确认

9实验室文件

9.1微生物人员培训和能力确认（上岗资质）

9.2设备验证、校准和维护

9.3测试中的设备性能（如温度记录）

9.4培养基制备、无菌检查、生长能力测试、选择性测试

9.5培养基清单与控制

9.6根据程序（ＳＯＰ）进行测试的重要数据

9.7数据和计算的确认

9.8经ＱＡ人员或相应领导审核过的报告

9.9超标结果调查

10实验室结果维护

10.1检测报告至少应包括：

●日期

●测试样品

●微生物检验人员名字

●程序编号

●测试结果

●偏差（如有）

●测试参数（设备、菌种、培养基）

●管理人员审核签名

10.2数据纠错：错误的地方划一横线，签名和日期，必要时说明原因

10.3测试结果

●应包含平皿计数结果（如有）

●数据分析方法应罗列在相关ＳＯＰ中

●对粘贴的图表、数据骑缝签名

10.4存档：记录应存档并防止丢失，应有记录留存计划

11测试结果解释

11.1微生物数据有时不容易解释

●与人类相关的微生物群落被广泛的用于许多测试

●人员污染是始终被关心的问题

●样品或环境中的微生物并非均匀分布

●微生物检测可变范围大：可能在+/-0.5log10单位左右

11.2不符合的结果可能是由2个原因造成的：实验室错误或产品不符合。无论哪种情况，管

理层必须立即被通知

11.3调查应包括：

●数据偏离的程度（严重性）

●平行数据间差异的评估

●实验室环境

●取样方法

●物料特性（存活的污染微生物）

●人员面谈

●留样评估

●测试过程

11.4纠偏计划（警戒限、行动限）

●如果发现实验室错误，需要

●纠偏措施的有效性需要跟踪和记录

11.5无效测试：由于错误将试验视作无效必须记录