培养基湿热灭菌

培养基湿热灭菌

湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，以高温高压水蒸气为介质，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，最终导致微生物的死亡，所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高。

一、方法

煮沸灭菌法；巴氏灭菌；间歇灭菌；高压蒸汽灭菌等。

（1）煮沸灭菌法：是指将待灭菌物置于沸水中灭菌的方法。煮沸时间通常为30-60分钟。该法灭菌效果较差，常用于注射器、注射针等器皿的消毒。

（2）巴氏灭菌：利用病原体不是很耐热的特点，用适当的温度和保温时间处理，将其全部杀灭。但经巴氏消毒后，仍保留了小部分无害或有益、较耐热的细菌或细菌芽孢。

（3）间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。

（4）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。

二、对培养基的影响

1、形成沉淀物：有机物，如多肽类沉淀；无机物，如磷酸盐、碳酸盐等沉

淀。

2、破坏营养，提高色泽：褐变，产生氨基酸、焦糖或黑色素。

3、改变培养基的PH，一般为降低PH

4、降低培养基浓度，气温低时会增加冷凝水

三、解决方法

温度的选择

培养基灭菌过程中，除微生物被杀死外，还伴随着培养基成分被破坏，在加热下氨基酸及维生素等受破坏。在生产中必需选择既能达到灭菌目的，又能使培养基成分破坏减至最少的条件。

灭菌过程微生物死亡是属于一级反应动力学类型，在其它条件不变时，反应速度常数κ与温度的关系可用阿累尼乌斯方程式表示：

lnk=lnk0-Ea/RT

达到相同的灭菌效果，提高灭菌温度可以明显缩短灭菌时间，并可减少培养基因受热时间长使营养成分遭到破坏的损失。