点突变研究酶活性的文章阅读有感

专业英语作业学号：1110516045 姓名：肖卓丽点突变研究酶活性的文章阅读有感

羧肽酶A的Try248曾被认为是酶催化活性的提供质子的位点。在此之前，科学家已经研究过嗜热菌蛋白酶酸碱催化的反应机制。

这篇文章利用酪氨酸和苯丙氨酸只有一个酚羟基的差异，利用点突变的方式，改变羧肽酶248位的氨基酸。

对其cDNA进行诱变使得TA T→TTT，从而氨基酸的密码子发生变化，在翻译过程中Try248→Phe248。

实验又将野生型和突变型cDNA转到带有α-因子的酵母载体中，进行蛋白质的表达。

在1986年的时候，点突变技术刚刚形成不久，对于点突变研究酶活性也是一个刚刚开始的技术方式。本文在NA TURE上发表时，正是对酶的性质研究的一个新方向的开始。

点突变后，单个氨基酸的改变如何影响酶活性的，或者单个氨基酸如何在酶催化反应的作用，本研究的作者通过四个方面的实验，不同方向上佐证羧肽酶A的248位酪氨酸并不是酸碱催化位点而是一个酶的催化结合位点。

第一个实验为：测量野生型和突变型的CPA对四种不同底物酶催化的K cat、K m、10-5K cat/K m 得到的结果为突变的酶影响了反应的亲和力。

第二个实验为：利用抑制剂PCI对野生型和突变型酶分解肽类底物的Ki值。

得到的结果说明抑制剂结合了酶的结合位点，同时野生型和突变型的酶活性都收到了相同的影响。这个结果反映了，Try248只是酶催化反应的结合位点。

第三个实验为：X-衍射实验，说明了248位酪氨酸在酶催化反应中没有像酸碱催化一样提供质子，而是这个位点提供了底物与催化剂结合的结合位点。

第四个实验为：TNM的硝化实验。TNM硝化了野生型的248位酪氨酸。使得其提供氢键的位点发生了变化，所以相对于突变型，其酶活性变化较大。这个实验再次验证了248位酪氨酸为酶和底物的结合位点，而不是催化位点。

通过这篇文章的阅读，在生物的蛋白质酶活性的研究中，需要从多个方向多个角度和层次去分析来验证酶活性改变的原因。通过点突变的方式与野生型的酶进行对比。这个方式开创了新的酶功能方面的研究方法。但是我认为研究的还有可以增加的地方。单一的氨基酸也许会改变酶的位点的结合。如果酶有多个结合位点，那实验是否可以通过酶的多个位点突变进行叠加其突变影响的效果研究位点之间的相互作用和酶催化作用时氨基酸的作用。