淋巴细胞功能检测
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1-3h 绵羊红细胞 B
+ 补体 有丝分裂原
B 浆
浆
溶 血 空 斑 实 验
酶联免疫斑点试验(ELISPOT)
① 稳定、特异,且抗原用量少; ②可同时检测不同抗原诱导的抗体分泌,并可定量检测 ③可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞
3、细胞因子的检测
细胞因子的检测有助于了解该细胞因子在免疫调节 中的作用,以及鉴定分离提纯后的淋巴细胞的功能。 (1)免疫学检测法 以细胞因子为抗原的检测法 (2)生物学活性检测法 测定细胞因子相关的生物学活性
实验动物分组
对照组、实验组处理因素干预
免疫功能检测指标确立 对照组、实验组机体免疫功能检测
实验方案
6W, 雌性 Balb/C 小鼠共 30 只, 静脉注射 环磷酰胺,每 3 天一次,共 4 次
香菇多糖组 10 只
广告产品组 10 只
PBS 组 10 只
2 周后,停止处理,改为给小鼠 肌注 PHA, 一天一次,共三天 取小鼠外周血,制备血涂片,瑞氏姬姆 萨染色,镜检计算淋巴细胞转化率
(3)分子生物学测定法
用基因的技术检测细胞因子含量以及预测合成量
4、CKR 、CD、 AM 、表面受体的检测
检测方法目前大多采用间接荧光、 FCM 检查 其在细胞膜上的分布和测定某些样品中的含量。 上述分子除表达于细胞膜表面外,还以可 溶性形式存在于体液中。
二、示教:淋巴细胞转化
测定淋巴细胞功能的一种方法。 人类T、B淋巴细胞表面有丝裂原受体,T、B淋巴细胞能分 别与不同的丝裂原结合,发生淋巴细胞的转化增殖反应。
T细胞转化、增殖试验:H3-TdR掺入
T PHA ConA 母 测转化率 增殖
加H3-TdR
T
T
T
测掺入量
T细胞毒性试验
CTL
+
靶
-51Cr
靶细胞溶解, 51Cr释放 测放射活性
酶联免疫斑点试验(ELISPOT)
淋巴细胞功能的体内试验
结 核 菌 素 反 应
2、B细胞功能测定 溶血空斑试验
B
+ 温育
免疫学检测的临床应用(回顾)
认识、阐明相关疾病发病机制 诊断、辅助诊断相关疾病 免疫功能检测与监视
实验四 设计性实验:常见细胞免疫检测II
【实验任务】
市场上有一广告产品,据说有免疫增强作用,请设计一 个方案证实之(从影响淋巴细胞功能、T淋巴细胞增殖的 角度考虑)。
【目的要求】
一、学会设计实验,从淋巴细胞功能、T淋巴细胞增殖的角 度证实某产品有免疫增强作用。 二、掌握淋巴细胞转化试验的原理及临床实用价值。
【实验材料】
一、实验动物(如balbwenku.baidu.comc小鼠)
二、注射器、针头、10ml离心管、滴管、试管、 玻片等常规实验仪器。
三、PHA、瑞氏姬姆萨染液,肝素,Hanks液等常 规实验试剂。
【作业】
请将你们小组的设计方案与技术路线在讨论完善 后记录在实验报告本,并将可行的实验内容在实 验课中实施。
一、讨论 (一)设计性方案要点
根据淋巴细胞转化率,可以间接判断机体免疫状态。
三、操作:淋巴细胞转化试验
(一)原理:
T淋巴细胞受到特异性抗原或非特异丝裂原(PHA、 PWM和ConA)刺激均能使细胞发生形态改变而转化为 淋巴母细胞。 T淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免疫功能水平, 常被作为细胞免疫功能指标之一。 计算200个淋巴细胞中转化为母细胞的细胞数(包括过渡 型、母细胞和分裂相淋巴细胞。 细胞免疫缺陷时,患恶性肿瘤或
(二)淋巴细胞功能检测的主要内容
T细胞功能测定
B细胞功能测定
单核巨噬细胞、NK细胞等功能测定
细胞因子的检测
CD分子、表面受体、粘附分子的检测
1、T细胞功能测定
(1)T细胞转化、增殖试验 ① H3-TdR掺入 ②细胞能量代谢测定( MTT检测法) ③形态学计数 (2)迟发性超敏反应的检测 (3)T细胞分泌功能的检测 (4)流式细胞仪对T细胞功能的检测 (5)T细胞介导的细胞毒试验
48~72 h
【思考题】
检测T、B淋巴细胞功能的实验主要有哪些? 淋巴细胞转化试验有何临床实用意义?
影响淋巴细胞转化试验的因素有哪些?
How to make blood smears
血涂片质量评价
头体尾 分明 厚薄均匀 长度 适中
推片
计算
转化淋巴细胞数 淋巴细胞转化率= 100 % 转化淋巴细胞数+未转 化淋巴细胞数
一般认为转化率的正常值为60~70%
结果与结果分析
PHA
ConA 增殖 母 细胞因子
T
T T
T
PHA
某些其他疾病时,转化率明显降低。
淋巴细胞的转化标准
方法:
提前三天给小鼠注射PHA0.5ml,6mg/kg ,一天一次, 连续三天。 剪断小鼠尾巴,向洁净载玻片上滴一滴血,用另一块洁 净的推片以450角推成血膜(头、体、尾分明)。
干燥后,瑞氏姬姆萨染色:滴3-5滴A液于载玻片1min, 6-10滴B液, 3min后充分水洗。 镜检,计算淋巴细胞的转化率:油镜下观察玻片的头、 体、尾三段。每段各一纵列(以减少推片中细胞分布不 均的误差)。