分子诊断策略与常用技术PPT(共23页)

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29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人 也无法 逆向而 行，只 能在急 促而繁 忙的进 程中， 偶尔转 过头来 ，回望 自己留 下的蹒 跚脚印 。
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30、时间，带不走真正的朋友；岁月， 留不住 虚幻的 拥有。 时光转 换，体 会到缘 分善变 ；平淡 无语， 感受了 人情冷 暖。有 心的人 ，不管 你在与 不在， 都会惦 念；无 心的情 ，无论 你好与 不好， 只是漠 然。走 过一段 路，总 能有一 次领悟 ；经历 一些事 ，才能 看清一 些人。
等位基因特异寡核苷酸探针（ASO）
引物1 5’
点突变（C to T）
探针1 3’
G
3’
引物2 5’
探针2 3’
5’
A
限制性片段长度多态性分析（RFLP） ➢ 原理
指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一 限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生 变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性 类型 利用特定限制性识别位点进行基因分析
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25、你不能拼爹的时候，你就只能 去拼命 ！
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26、如果人生的旅程上没有障碍，人还 有什么 可做的 呢。
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27、我们无法选择自己的出身，可是我 们的未 来是自 己去改 变的。 励志名 言：比 别人多 一点执 着，你 就会创 造奇迹
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28、伟人之所以伟大，是因为他与别人 共处逆 境时， 别人失 去了信 心，他 却下决 心实现 自己的 目标。
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31、我们无法选择自己的出身，可是我 们的未 来是自 己去改 变的。
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32、命好不如习惯好。养成好习惯，一 辈子受 用不尽 。
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33、比别人多一点执着，你就会创造奇 迹。
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50、想像力比知识更重要。不是无知 ，而是 对无知 的无知 ，才是 知的死 亡。
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51、对于最有能力的领航人风浪总是格 外的汹 涌。
➢ 优点
• 检测基因变异，具有操作简便、快速特点，不需特殊设 备，适用于大样本筛选。 • 己广泛应用于检测各种病原体基因的点突变及缺失突变， 基因的多态性分析等。
（ PCR-SSCP）示意图
DNA测序
DNA自动测序结果举例
DNA芯片技术
四、分子诊断的应用及举例
遗传疾病 肿瘤 感染性疾病 判断个体疾病易感性 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定
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4、心中没有过分的贪求，自然苦就少。 口里不 说多余 的话， 自然祸 就少。 腹内的 食物能 减少， 自然病 就少。 思绪中 没有过 分欲， 自然忧 就少。 大悲是 无泪的 ，同样 大悟无 言。缘 来尽量 要惜， 缘尽就 放。人 生本来 就空， 对人家 笑笑， 对自己 笑笑， 笑着看 天下， 看日出 日落， 花谢 花开， 岂不自 在，哪 里来的 尘埃!
三、分子诊断常用技术
核酸分子杂交技术 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific
oligonucleotide, ASO) DNA限制性长度多态性(restriction
fragment length polymorphism, RLFP)分析 PCR-SSCP DNA测序 DNA芯片技术
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
MstⅡ酶切位点(CCTNAGG)
GAG → GTG ↓
谷Aa→缬Aa 5´
3´
1.15kb
×
正常基因
5´
3´
1.35kb
突变基因
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
1.35kb
﹣
1.15kb
0.2kb
正常人
+
突变携带着 患者
镰状红细胞贫血患者基因组的ASO探针杂交
﹣
+
正常人
纯合突变 杂合突变
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1、不是井里没有水，而是你挖的不够深 。不是 成功来 得慢， 而是你 努力的 不够多 。
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2、孤单一人的时间使自己变得优秀，给 来的人 一个惊 喜，也 给自己 一个好 的交代 。
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3、命运给你一个比别人低的起点是想告 诉你， 让你用 你的一 生去奋 斗出一 个绝地 反击的 故事， 所以有 什么理 由不努 力!
DNA多态——RFLP、VNTR、SNP
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二、分子诊断策略
DNA多态（DNA Polymorphism）
群体中每个个体DNA区域中等位基因（或片段）存在两种 或两种以上的形式，对基因功能没有影响，称DNA多态。
DNA分析中常用的遗传性多态性标记有3类：
1）RFLP：称限制性片段长度多态性，为第一代多态性标记； 2）重复序列多态性（VNTR）：如STR其重复次数在人群中存在 变异，形成多态即 VNTR ，为第二代多态性标记； 3）单碱基多态性（SNP）：发生在基因组中的单个核苷酸的替 代，为第三代多态性标记。
第十二章 分子诊断
一、分子诊断的概念和特点
概念：
利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法， 通过检测基因结构或其表达水平是否正常，从而对人 体健康状态和疾病作出诊断的方法。
传统的诊断：表现型→基因型 基 因 诊 断：基因型→表现型
（ 逆向诊断）
一、分子诊断的概念和特点
特点析法
RFLP分析
➢ 优点 • 分辩率高，无需标记,重复性好，简便快速直观 • 主要用于核酸变异分析比较, 微生物的分群分型， 癌基因分析，遗传病的诊断等。 ➢ 局限
只能应用突变引起限制性酶切位点改变筛选，检测 效率低。
PCR/单链构象多态性分析（SSCP）
➢ 原理
将经扩增的DNA片段变性形成单链，由于序列不同，单 链构象就有差异，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率 不同，通过与标准物的对比，即可检测出有无变异。
灵敏度高
早期诊断性 已明确疾病表型与基因型的关系
适应性强
检测致病基因突变；分析与疾病连锁的遗传标志；建立 多基因疾病表型克隆；定量分析致病基因的表达水平
二、分子诊断策略
直接诊断——直接检测致病基因的突变
基因突变类型—缺失、点突变、重复、插入等
间接诊断——应用DNA多态性为遗传标记进行连锁分析，
确定待测者是否得到带有致病的染色体，从而间接地作出 诊断
Normal βΑGene Probe——与正常 Probe βΑ杂交稳定 Mutation βS Gene Probe——与异常
βS杂交 稳定
镰状红细胞贫血患者基因组的ASO探针杂交 斑点杂交结果： βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS
正常探针 异常探针
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Leber 病患者 PCR/SSCP分析