#乳酸菌活菌制剂对动物免疫调节作用研究进展

乳酸菌活菌制剂对动物免疫调节作用研究进展
黑龙江省科学院微生物研究所曹亚斌
Fuller于1989年首次给益生菌下的定义是“益生菌是通过改善肠道菌群平衡而对宿主健康产生有益作用的活菌添加剂。

”FAO和WHO 给出益生菌的定义为“当摄人足够数量时可对宿主起有益健康作用的活的微生物。

”不少地方采用这一概念，但随着研究的进行逐渐发现了这个定义的局限性，不同的研究者也不断提出应对益生菌概念进行调整和完善。

在有益菌中，主角是乳酸菌，各国科学家对活性乳酸菌的研究取得诸多成果。

活性乳酸菌对动物机体有众多的有益作用，如协调和维持胃肠道微生态平衡；和病原体竞争肠黏膜的吸附位点，致使病原菌无法在肠黏膜上定植，促进营养成分的吸收，抗肿瘤作用，刺激免疫细胞的活性，提高机体的免疫力等，其中最引人注目的是活性乳酸菌对于机体免疫力的影响。

一、活性乳酸菌发挥免疫调节作用应具备的条件
对于活性乳酸菌菌株的选择应建立在它能够促进肠内免疫反应而不会改变肠内动态平衡的基础上。

要胜任这个使命，乳酸菌应具有以下特点：①应具有较高的活性，必须能耐受低pH以及胆汁酸；②如果菌株不能在肠道内定植，应能够在肠道内持续存在（可通过持续摄人而满足）；③能够附着到肠上皮以抵抗肠蠕动的冲洗作用；④应该能够和肠相关的免疫细胞相互作用或者发出信号。

1、乳酸菌的活性
一般认为活性乳酸菌要对免疫系统起作用，它们必须保证是存活状态的，可以在肠道内增殖并存活下去，包括FAO和WHO的概念中都认为益生菌应该是活的微生物。

试验证实和活性的德氏乳杆菌组相比，无活性的德氏乳杆菌组激活分泌细胞子的细胞数量要少。

另有一些试验结果明确地显示，被摄取的菌株并役有成为肠道正常菌群的固定成员而只是在摄取期间存在或者是在给料后维持相当短的一段时间。

另外，乳酸菌的代谢产物中的乳酸及一些可溶性因子也会发挥作用。

从8种冻干乳酸菌株组成的乳酸菌混合物VSL3中提取的DNA可引起上皮细胞和免疫细胞的非炎性反应。

在一个同样使用(VSL3)混合物的相似的研究中发现，这种乳酸菌的染色体DNA通过TLR9信号途径对右旋糖酐硫酸酯钠引起的小鼠大肠炎模型有抗炎作用。

试验证明，只有活性乳酸菌，在肠内存在至少48 h～72 h才能发挥作用，这是所有颗粒性抗原要诱导肠内免疫促进作用所必须的。

这一结果提示了对于每一种动物来说每天定量的活性乳酸菌摄人对于其发挥免疫作用是非常重要的。

这类研究有助于阐明关于活性乳酸菌对免疫调节的分子基础。

2、益生菌的黏附性
关于益生菌的黏附性也受到较多的关注，对宿主细胞或黏滚的黏附能力被认为对益生菌来说是必须的。

因为只有黏附到肠道内表面才能抵抗肠道的蠕动而不被很快的排出，只有黏附之后才有和肠上皮和相关免疫细胞相互作用的可能。

然而对于活性乳酸菌的黏附性，尤其
是对上皮细胞的黏附性的认识主要是建立在体外试验的基础上。

而这种体外试验只是在很小一部分上模拟了复杂的肠内生态系统。

对于黏液凝胶以及它作为一个防御实体的重要性的认知还非常有限。

因为常规的肠组织固定方法（乙醛固定法），通常是伴随其表面黏液的脱离和丧失。

这种体外试验的局限性已被Matsuo K等证实，他们用卡诺依氏固定液保证人直肠石蜡样品中表面黏液的存在。

观察发现细菌被限定在外层唾液黏蛋白和硫黏蛋白之间，这显示出黏液凝胶是阻止肠内菌黏附到上皮表面的一个重要屏障。

对大多数试验使用的体外培养系统中，不分泌黏液的上皮细胞系是否有实际的生理意义，同时也提出了对于活性乳酸菌黏附性研究的新方向。

不过，这些简化了的系统对于研究可能存在的细胞通路以及分子标记仍然是有用的重要工具，在大量的研究中还是观察到上皮细胞对黏附性乳酸菌株所做出的反皮。

对于乳酸菌的黏附性的研究还有待进一步的深入，还需要更多的研究来确定在体内是否有特定的菌株能够到达并且黏附到上皮上，最终产生一定的生理学效应。

二、活性乳酸菌诱导免疫的机制
1、活性乳酸菌的内化
活性乳酸菌可诱导黏膜免疫应答，要完成这个过程，活性乳酸菌必须和上皮细胞以及肠相关免疫细胞进行相互作用，以启动免疫信号网络，活性乳酸菌的内化途径对于激活免疫细胞和启动免疫反应有重要作用。

活性乳酸菌可以通过在派伊氏结或绒毛中的M细胞而内化，也可能被树突状细胞以整个细胞或它们的抗原片段的形式而被捕获。

Galdeano M C等用荧光标记技术在小鼠的体内试验证实了几种活性乳酸菌的内化途径，观察到在派伊氏结、小肠绒毛固有层及大肠淋巴结内的活性乳酸菌及其和肠相关细胞的相互作用。

树突状细胞定植于上皮细胞之间，它可穿过上皮间连接而捕获肠腔内的微生物，有证据显示，固有层树突状细胞对活性乳酸菌或它们的片段的摄取可能是通过Toll样受体和CD-206甘露糖受体完成的。

完整的细菌内化到绒毛的途径可能是通过绒毛里的M细胞，而细菌碎片的内化，可能和Toll 样受体2或CD-206受体有关，因为观察到在这个过程中固有层相关的免疫细胞中或派伊氏结细胞中的这两种受体数量都显著的增加。

另外一个可使活性乳酸菌穿过上皮的途径是细菌对于覆盖在派伊尔氏结表面的M细胞的黏附。

利用阴沟肠杆菌作为模型细菌，研究发现这个捕获过程实际上可能是特化的M细胞而发生的，在研究中可观察到M细胞下的上皮下凸点区可发现一些活着的正常菌。

可进行原位检测和鉴定的经过遗传标记的重组菌株可极大的促进对于M细胞捕获及和益生菌相互作用的具体过程的深入研究。

2、活性乳酸菌诱导的肠内局部免疫反应
和肠内相关细胞相互作用后，活性乳酸菌或其片段被内化，之后最早和它们相互作用的细胞有抗原递呈细胞(APC)、巨噬细胞、肠固有层相连的树突状细胞，和这些细胞接触后，细胞因子被释放并对免疫应答进行调节。

活性乳酸菌和上皮细胞相互作用后诱导白细胞介素一6 (IL-6)的释放。

巨噬细胞和树突状细胞吞噬益生菌或它们的碎片后被诱导产生细胞因子，如肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素(IFN)。

在进
行活性乳酸菌的研究时发现其对这两种因子的作用是最显著的。

活性乳酸菌诱导的TNF-a是启动黏膜相关的免疫细胞和肠上皮细胞相互作用所必须的，IFN-y被证实是一些免疫细胞成熟所必须的。

这些细胞因子又增强上皮细胞的刺激作用，启动所有相关免疫细胞的相互作用。

肥大细胞也被激活而释放IL-4。

另外，所有活性乳酸菌都存在刺激调节性细胞因子IL-10分泌的增加。

1L-6可以促进分泌IgA+B细胞的增殖，增加分泌IgA的细胞的数量以及它们向肠固有层浆细胞靠近的通路。

IL-6和IL-4以及转化生长因子(TGF-p)可以诱导B细胞表面非胸腺依赖性的IgM向IgA的转化，并能通过这种途径增加肠固有层IgA+B细胞的数量。

体外研究发现，活性乳酸杆菌的一些不明成分可能对T细胞有抗增殖作用并对T细胞分泌细胞因子也有抑制作用。

肠内T细胞反应是被局部和其相互作用的树突状细胞（DC细胞）调节的，而DC细胞又可以被活性乳酸菌所影响，所以活性乳酸菌可通过调节T细胞而影响机体的免疫反应过程。

3、活性乳酸菌所诱导的系统免疫反应
活性乳酸菌或其片段在派伊氏结中被M细胞内化后，和巨噬细胞及树突状细胞相互作用，这两种细胞被激活而产生细胞因子。

在免疫应答的感应部位，免疫细胞被细菌刺激后，细胞因子的分泌增强，IgMB细胞向IgA B细胞的转化也增强。

免疫细胞分泌的IL-10、IL-6、IL-4和TGF-p，也可以增强这种非胸腺依赖性免疫球蛋白的辖换。

益生菌的刺激可以诱导IgA循环，增加离肠较远处的黏膜部分的IgA+细胞的数量。

IgA+细胞转移到肠系膜淋巴结，并通过胸导管进入循环，
到达支气管、乳腺和尿生殖道[19-20]等处的粘膜发挥作用，从而实现对机体系统免疫反应的调节。

在派伊氏结中，因活性乳酸菌刺激而释放的细胞因子是激活系统免疫反应的复杂的信号。

4、活性乳酸菌对机体自身免疫的影响
活性乳酸菌除可增强机体对于外来抗原的免疫力，启动黏膜和系统免疫反应外，对于机体自身免疫也发挥着作用，研究者用多种自身免疫疾病的模型研究了活性乳酸菌对于自身免疫的调节作用。

如非肥胖型糖尿病I型小鼠模型可出现自身反应性CD8+T细胞对胰岛的浸润，这可看做是一种自身反应性疾病的模型。

当它们摄入含有0. 05%的(Lactobacillus casei Shirota株，LcS)的日粮后和对照组相比糖尿病的发病率得到了有效的控制和降低，并且进行病理分析发现，在LcS 处理组CD8+T在脾脏里的比例下降，也显示了对自身反应的抑制。

在类风湿关节炎疾病模型中，口服活性乳酸菌可通过抑制相应抗体及IFN-，y的产生降低自身免疫性。

活性乳酸菌通过调节自身反应性辅助T细胞亚群间的平衡来抑制自身免疫疾病。

使用致癌药物人工诱导的致癌作用试验中，活性乳酸菌的摄入可激活机体固有免疫系统中的相关免瘦细胞，如自然杀伤(NK)细胞等抑制致癌作用。

在这些研究中对于活性乳酸菌的摄入途径的认识和前面所述都是一致的，即活性乳酸菌必须通过内化过程后和相应细胞发生相互作用而发挥免疫调节作用，调节机体对外源及自体抗原的识别，调节机体的免疫平衡状态。

三、结语
要更好的使用活性乳酸菌，首先应弄清楚它们作用的机制。

虽然
目前关于活性乳酸菌对于机体的有益作用越来越受到人们的重视，但是对其作用机理尤其是其不同免疫调节作用的确切分子基础还有待进一步的深入研究。

哈尔滨中科生物工程有限公司
构筑生态免疫屏障，活菌才是硬道理
活性乳酸菌饲料添加剂
利用现代生物技术，发酵生产的具有活性的乳酸菌制剂，是安全、高效的动物保健制剂，目前已经投入广泛使用的是黑龙江省科学院微生物研究所和哈尔滨中科生物工程有限公司共同研发的固体发酵和液体发酵的两类活菌制剂。

克服了死的菌体及代谢产物效果不确切的弊端，为动物保健及食品安全保障提供了动力。

固态发酵制剂
使用移动发酵技术、多菌种复合保质技术、高负压吸真空技术，好氧厌氧分阶段发酵技术，使发酵产品在潮湿状态保质期达到18个月以上，保证了乳酸菌的活性。

产品以中草药做载体，以活性乳酸菌发酵的活菌制剂。

液态发酵制剂
免费为养殖场提供小型全自动乳酸菌发酵罐，并提供菌种、培养基，由养殖场自行发酵，随用随饮，保证了乳酸菌的活性。

对肠道疾病及提高免疫能力效果显著。

哈尔滨中科生物工程有限公司是黑龙江省科学院微生物研究所2002年以发酵工程技术研究中心为基础组建的高科技公司，是微生物研究所科技成果转化的生产基地。

公司凭借黑龙江省科学院技术、人才优势，先进的实验、检验设备及超前的研发能力，使公司一直站在微生物科学的前沿。

公司是从事科学研究、技术开发、产品中试、人员培训、对外服务的等综合性生产技术中心。

公司是黑龙江省人事厅博士后产业化基地、东北农业大学硕士生实习基地、黑龙江大学硕士生实习基地。

公司下设三个中试生产车间、三个实验室、一个菌种保藏中心、一个发酵工程中心、主要是从事发酵工程、酶工程、细胞工程、基因工程等领域的技术研究和开发工作。

公司成立以来共承担国家、省、部级科研课题八项。

其中：国家863项目一项、国家自然科学基金项目两项。

公司多年来一直以技术创新、产品创新为己任，开发的发酵中药活菌制剂，已取得多项国家专利，在全国养殖行业取得巨大反响。

黑龙江省科学院微生物研究所是从事微生物工程技术研究和开发的综合性科研单位，始建于1959年。

50年的技术积累使研究所在基因工程技术、农业微生物、生物技术、自控发酵技术、食用菌等项领域形成专业特色和技术优势，共取得200余项科研成果，先后有80余项得到各级各类奖励，并和日本、美国、加拿大、俄罗斯、法国等国家建立了学术合作关系，在微生物肥料、微生物饲料、污染水体净化等方面为农牧业发展作出了突出的贡献。

黑龙江省科学院微生物研究所
哈尔滨中科生物工程有限公司
电话：3 400-000-3690
地址：道里区机场路35公里
招商加盟（加盟热线：400-000-3690）
抓住机遇超越竞争
恶劣的竞争环境
今天的兽药、饲料行业的竞争越来越接近白热化，而需求却增长缓慢甚至停滞萎缩。

随着越来越多的企业去瓜分和拼抢有限的市场份额和利润，无论采取“高品质”还是“低价格”战略，企业取得获利性增长的空间都越来越小。

在这种情况下，经销商如何才能从血腥的竞争中脱颖而出？如何才能启动和保持获利性的增长？如何去寻找一片新的市场空间？
新的市场空间在哪里？
新的市场空间在哪里？或许所有的经销商都在思考这同一个问题。

在竞争日益激烈的市场中，如何生存下来，并脱颖而出，走向获利性增长的道路？经销商需要做的，不只是学习现有的产业所谓的“优秀模式”，更要想办法改变产业景框，重新设定游戏规则；
重新设定游戏规则
不是瞄准现有市场中“高端”或“低端”的顾客，而是要面向巨大的潜在需求；不是一味地通过低价格满足顾客的偏好，而是要通过合并市场整合需求。

所以最后我们得出的结论就是我们不是要寻找新的市场空间，而是要用革命性的产品重新覆盖现有市场空间！
如何超越竞争？如何拥有覆盖市场的能力？
我们或许都曾经听过一句话：选择大于努力！我们选择了潮流或趋势，别人将无法阻挡我们前进的步伐！所以选择一个好的、趋势性的产品，就可以让我在经营过程中事半功倍！兽药、饲料行业竞争如此激烈，产品同质化更是极为严重，趋势性的产品到底在哪里呢？
中药发酵，中科创造
全国首创的第四代益生素---活性乳酸菌发酵中药微生态制剂的问世给我们带来了天赐良机！腹泻、过料一天见效！长期保健节省药费，提高成活率、提高饲料转化率、提高养殖效益一倍……这就是中药发酵制剂带来的不可阻挡的趋势！
中药发酵专利技术的优势
真正的活菌制剂，用中药加活菌第四代益生素保健，是养殖业必然的发展趋势，是不可阻挡的市场潮流，发展前景十分广阔。

饲喂中药加活菌制剂，畜禽体内无抗生素残留，无耐药性，可达到绿色食品要求。

中草药发酵可以提高利用率7-200倍。

可以比一般的物理或化学的炮制手段更大幅度地改变药性，提高疗效，降低毒副作用，扩大适应症。

抓住商机领先潮流
当今兽药、饲料行业产大于销，市场竞争异常激烈。

第四代益生素--活性乳酸菌发酵中药微生态制剂的问市是畜牧业科技创新的成果，有远见的经销商必将抓住机遇、快速开拓市场、摆脱竞争，占领更大的市场份额！
加盟中科创富未来
（加盟热线：400-000-3690）
领先的技术研发实力、双赢的战略伙伴策略，真正的厂商合作模式。

1、合理的利润空间
合理的供货价格，保证客户有充足的市场运作空间。

2、独家的代理权益
公司承诺在合同限定的经销区域内只将合同产品供给合同客户，保障合同客户独家代理经销的权益。

3、严格的市场保护
公司对制剂实行全国统一供应价，同时督促各地经销商严格按照公司的指导价进行销售，制止或制裁低价倾销、异地窜货等不良竞争行为。

4、强大的营销及媒体支持
①免费提供VI手册，营销资料等。

②网络媒体、饲料产品博览会等宣传推广支持，中科公司统筹全国性广告投放，区域性的广告计划和各区域代理商共同协商确定。

5、专业的人员支持
根据合同客户的要求，甲方可派驻专职业务人员协助合同客户开拓市场，指导合同客户进行有效的销售及促销活动。

6、无忧退换货政策
公司保证将产品保质、保量、按期交付合同客户。

凡属产品质量问题（由于合同客户保管不善而造成的质量问题除外）公司负责退、换货。

7、超强的研发能力
中科生物工程有限公司依托黑龙江省科学院技术、人才优势，先进的实验、检验设备及超强的研发能力，使公司一直站在微生物科学的前沿。

全国首创的中药发酵专利技术，免费使用的全自动乳酸菌中药发酵机，市场前景无限。

公司的承诺
一、一地一户，垄断经营，签订常年合同（外省可成立分公司）
二、实行市场保护，决不窜货
三、品种手续齐全，可提供农业部全部批件
四、专业的营销策划，宣传物料齐备,帮您培训技术人员
五、讲究诚信，保证发货及时快捷
六、多种优惠政策，保证您的利益最大化
七、有产品滞销，公司给调换，包您零风险运营
加盟的条件
1、经营者具备一定资金、一定的的兽药、饲料经营经验和品牌意识。

a有市场，需要好产品开拓市场，增强盈利能力的经销商。

b有技术，有能力，需要好项目创业的技术人员。

c有销售经验，有渠道、有创业欲望的销售人员。

d从事畜牧相关行业，有资金，正在选择项目的人员。

2、能够根据当地的实际情况制定一个销售目标，准时参加公司举办的定货会，首次提货享有公司的支持。

如果达到一定的销量公司将根据起初拟订的标准给予丰厚的业绩嘉奖。

3、应具备一定的铺货能力，开拓市场的人力，物力。

4、应具备地域代理的人脉关系、市场控制能力，市场管理能力。

并具有召开宣传会议，营销会议的组织能力。

5、应具备产品的储存、保管、物流、转运的能力。

6、应具备产品组织推广，营造市场氛围的能力。

7、应具备畜牧业的从业经验，相应的的专业技术水平及产品售后服务的能力。

8、拥有良好的素质及商业经验，商业眼光，商业敏感度，为公司新产品的研发提供意见和建议。

加盟程序
1、客户有意合作，事先了解我们公司和我们公司旗下的品牌产品。

2、客户提出加盟申请。

3、可以到公司的样板市场参观学习，倾听用户反馈，了解产品性能及运作模式。

4、选定市场范围，选定主攻的产品。

5、参观公司，签定合作协议（公司报销往返机票）。

6、做好市场启动的企划工作。

7、制定近期预期销售目标及远期销售预期目标。

销售任务及奖励
(一)销售任务
代理商月销量任务应不低于50件，市场开拓期3个月，首批进货50件，前3
个月总销量不低于100件。

(二) 开拓期后应完成公司下达的销售任务，代理商不能完成以上销售任务，又没有合理理由，甲方取消其代理资格，返还保证金。

(三)奖励办法（略）
加盟咨询：QQ 138360035 QQ 1352826957 QQ 759509052 QQ 1347937881
咨询电话：
加盟热线：400-000-3690 3。