植物组织培养考试重点

第一章

1植物离体培养：通过无菌操作，把植物细胞或其他类型的外植体，接种于人工配置的培养基上，给予人工控制的环境条件，使培养或操作对象表现生长发育等生命活动。

2细胞全能型：细胞具有该有机体的全部遗传信息，并具有形成有机体所有细胞类型的能力。3园艺植物生物技术的应用领域一在细胞工程的应用；1良种繁育，使繁殖系数大，周年生产，繁殖速度快，苗木整齐一致。2离体种质保存，克服常规保存方法占用大量土地或消耗大量人力物力等缺点，并方便种质资源的地区和国际交换，避免病虫的人为传播。3细胞工程育种，培育园艺新品种，克服远缘杂交育种障碍。4有用物质的生产，大规模的细胞发酵罐培养生产药物，食品，调料香精等日用化工品。二基因工程运用：作为园艺作物改良的有效手段之一。三：分子标记运用，加快育种速度，降低选育种的成本，有效提高品种改良的成效。四：在植物学基础研究上的应用：进行遗传多样性的分析，系谱分析，基因表达及调控的研究等。

4细胞脱分化：指外植体中已分化的细胞，在切割损伤和培养物内外因素作用下，逐渐丧失其原有的分化了的结构和功能，合成代谢变得旺盛，细胞壁由厚变薄，细胞内部结构发生变化，细胞高度液泡化，回复到分生组织状态，形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。

5器官分化：指培养条件下的组织或细胞团分化形成不定根，不定芽等器官的过程。

6胚胎发生：指从合子到成熟胚的发生发育过程，所形成的的胚称为合子胚。

7.离体胚胎发生和器官发生有何异同：自然条件下的器官分化是受植物体本身的自主调节控制，而在离体培养条件下，器官分化则是在人工辅助条件下完成的，有3个生长阶段，第一，外植体经过诱导形成愈伤组织。第二，形成生长中心（也成为拟分生组织）。第三，器官原基及器官形成、体细胞胚是离体培养的产物，体细胞胚起源于非合子细胞，体细胞经历了胚胎发育过程，与器官发生形成个体的途径不同。

第二章

外植体：用于接种培养的各种离体的植物材料，包括胚胎材料，各种器官，组织，细胞，原生质体等。

1.外植体的类型茎尖（最常用的材料。生长速度快，繁殖率高，不易产生遗传变异。）节间部（新梢节间容易灭菌，脱分化再分化能力较强）叶和叶柄（取材容易，新出叶片杂菌较少，实验操作方便。）鳞片（水仙、百合、葱、蒜、风信子经常以鳞片为材料。）其他（种子、根、块茎、块根、花球、花粉）

2.外植体的选择原则 1.再生能力强 2.遗传稳定性好

3.外植体来源丰富

4. 外植体灭菌容易

3.外植体的选择依据 1.植物的种类和基因型 2. 外植体来源 3.外植体大小

4.取材季节

5.外植体的生理状态和发育年龄

4.外植体的预处理及消毒 1.减少带菌的处理（在长期晴朗的天气条件下取材、选择信么萌发的幼芽或嫩梢、选择表面比较光滑的材料、对母株定期喷洒杀菌药剂、用纸袋或薄膜袋将枝条封套保护待其萌发新芽后取材、在室内采用水插粗芽后取材，或是在温室植株上取材等，都可以大大减少处事戴菌量。对一些戴菌量较大的植物，如茎尖，从室外取回经剪截处理后，置于烧杯内，杯口用纱布封好，置于水龙头下流水冲洗过夜） 2.消毒剂的杀伤力和材料对消毒剂的耐受力（不同消毒剂种类杀伤力不同，不同的外植体材料对同种消毒剂的耐受力也不同。选择消毒剂时，尽可能选用对微生物消灭作用强烈而对植物材料比较安全的种类。在选择外植体材料时，则应优先考虑体积较大戴菌量较少耐受力较强的类型。对于

坚硬致密的外植体材料，如枣核，可采用渗透力较强的消毒剂，如75%的酒精直接进行表面消毒，或用0.1%氯化汞消毒10分钟或更长时间。）3. 清洗的重要性（外植体经消毒后，必须用无菌水洗去残存的消毒剂，否则会对外植体造成长期伤害，尤其是氯化汞，应清洗多次，去除表面的汞离子）

5.褐变外植体接种后，于伤口处发生褐化，产生褐色物质，不仅使培养基变褐，而且可能造成外植体死亡，或严重抑制外植体脱分化再分化。

6.外植体褐变原理褐变包括酶促褐变和非酶促褐变，目前认为植物组织培养中以酶促褐变为主，多酚氧化酶（PPO)是植物体内普遍存在的一种末端氧化酶，它催化酚类化合物形成醌和水，醌在经非酶促聚合形成深色物质，对外植体材料产生毒害作用，影响其生长分化，严重时导致其死亡。

7.防止褐变的措施 1.选择适宜的外植体 2. 预处理母株和外植体 3. 筛选适宜的培养基和培养条件 4. 添加褐变抑制剂和吸附剂 5. 连续转移

8.培养基的基本成分 1.水 2.无机营养成分 A大量元素（氮磷钾钙镁硫）B微量元素（铁硼锰锌铜钼钴氯）3.有机营养成分（碳水化合物、维生素、肌醇、氨基酸）4.植物生长调节剂 A生长素类（吲哚乙酸IAA 萘乙酸NAA 吲哚丁酸IBA 2，4-D等，活性强度2，4-D>NAA>IBA>IAA）B 细胞分裂素类 C其他类（赤霉素、脱落酸、多效唑）5.琼脂 6.活性炭与硝酸银 7.抗氧化物8.染色剂 9.抗生素

9.培养基的类型 1.高盐型培养基（MS培养基是使用最广泛的培养基。特点是无机盐浓度高，养分齐全，铵态氮和硝态氮含量高，比例合适，不需要添加更多的有机附加物，离子平衡情况较好，使用误差较小，利于愈伤组织的诱导和增值，能满足植物组织对矿物质营养的需求，适用于高需肥量植物或生长迅速的培养材料）2.高硝酸钾型培养基（对于喜钾、喜硝态氮或忌铵态氮的外植体材料而言比较适宜，配方有B5 和N6，前者特点是铵盐浓度较低，盐酸硫胺素浓度较高，对枇杷胚状体诱导效果更佳）3.中盐型培养基 4.低盐型培养基（无机盐浓度低，适用于生根培养，成熟胚胎培养或种质材料的保存）

10.培养基的制备 1.母液的配制和保存 2.培养基的配置（先将储存母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿、量筒、烧杯、移液管、玻璃棒、漏斗等放在指定位置。称量好所需的琼脂、蔗糖并加热溶解，然后按母液顺序，根据各种母液的倍数吸取相应的量。加完所有的培养基组分，继续加温并不断搅拌，待琼脂完全融化后定容。）3.PH的调节 4.培养基的分装与灭菌

11.灭菌方法 1.培养基的高压湿热灭菌 2.金属器械的灼烧灭菌 3.玻璃器皿及耐热用具的干热灭菌 4. 不耐热物质的过滤灭菌 5.室内空间的紫外线和熏蒸灭菌 6.一些物体表面的药剂喷雾灭菌 7.外植体的表面消毒

12.紫外线灭菌：利用紫外线的辐射作用，引起细菌蛋白质变性或核酸结构发生变化，导致生物大分子发生严重破坏而造成死亡。

13.熏蒸灭菌：用加热焚烧，氧化等方法，使得化学药剂变为气体状态，扩散到空气中，杀死空气和物体表明的微生物

14.外植体的接种程序 1.接种室的消毒 2. 器皿灭菌 3.材料的分离、切去和接种（接种具体步骤：操作人员穿戴好洁净的工作服、帽子、口罩后，用70%的酒精擦拭双手双臂，在超净工作台上切取经过消毒的外植体。较大的材料可用肉眼直接观察切离，较小的材料需要在双筒实体显微镜下操作。切取材料通常在无菌培养皿或灭菌纸上进行。将试管或三角瓶瓶口靠近酒精灯火焰，瓶口倾斜，将瓶口外部在火焰上旋转烧灼数秒，然后轻轻取下封口物。将瓶口在火焰上旋转烧灼后，用烧灼后冷却的镊子将外植体均匀接种在培养基上。茎尖、茎段应保持直立、先端向上接种，叶片材料可用插接，也可以平放于培养基表面，但平放时一般将叶背朝下，以利于对培养基的吸收。接种时动作要轻，以防气流中夹带细菌进入培养容