氨苄青霉素及LB培养基的配置方法
《细胞实验》17 质粒转染实验步骤
质粒转染大肠杆菌材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调pH），氨苄青霉素，卡那霉素，质粒提取试剂盒仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒1.5ml 离心管，消毒枪头，无菌操作台实验步骤：1.LB培养基的配制：在950 ml去离子水中加入: 胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.固态培养基LB固体培养基及倒板：（1）.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉（2）.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入氨苄抗生素（终浓度为50μg/ml），以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
（3）.倒板：一般10ml倒1个板子。
培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。
（4）.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。
2.从-70℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液，室温下使其解冻，解冻后立即置冰上。
3.加入质粒DNA溶液（含量不超过50ng，体积不超过10μl），轻轻摇匀，冰上放置30分钟后。
4.42℃水浴中热击45s/90s，热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。
5.向管中加入1ml LB液体培养基（不含Amp），混匀后37℃振荡培养1小时，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因（Ampr ）。
6.将上述菌液摇匀后取100μl 涂布于含Amp的筛选平板上，正面向上放置半小时，待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿，37℃培养16-24小时。
同时做两个对照：对照组1：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，其它操作与上面相同。
此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。
对照组2：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。
微生物实验常用抗生素浓度配制
微生物实验常用抗生素浓度配制----------四川大学生命学院-微生物代谢与工程重点实验室1、氨苄青霉素（[Amp]Ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
2、羧苄青霉素（[Car]Carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
3、甲氧西林（[Met]Methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml 终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
4、卡那霉素（[Kan]Kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
5、氯霉素（[Cm]Chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
6、链霉素（[Str]Streptomycin）（50mg/ml）溶解500mg链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
7、萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
8、四环素（[Tet]Tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
LB培养基
LB培养基LB培养基LB培养基是一种培养基的名称，生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增,达到使用要求。
培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。
通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒，工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础。
成分表(1L溶液中)：Tryptone(胰蛋白胨)：10gYeast Extract(酵母提取物)：5gNaCl(氯化钠)：10g若配制固体培养基，则再加入15g Agar(琼脂)，切记琼脂直接加入瓶子中，因为它很黏很难冲洗下来。
若配制低盐培养基，则全部减半。
液态培养基根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著）配制每升培养基，应该在950 ml去离子水中加入：胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.4（该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长）。
用去离子水定容至1L。
121℃高压灭菌20min。
高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素AMP 分装100mg/ml，使用浓度100μg/ml在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液）。
瓶盖用封口膜封好，4℃保存。
固态培养基LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉。
高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素AMP 在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液），并且倒好培养皿（大约1/3高度）。
1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉2.抗生素的加入：121℃高压灭菌20min。
高压灭菌后，将融化的LB 固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
3.倒板：一般10ml倒1个板子。
培养基倒入培养皿后，打开盖子，紫外照射10-15分钟。
氨苄青霉素 LB琼脂产品说明书
化学品安全技术说明书第一部分化学品及企业标识产品中文名称：氨苄青霉素LB琼脂产品英文名称：LB Agar with Ampicillin产品编号：028335企业名称：广东环凯微生物科技有限公司地址：广东省广州市黄埔区广州开发区科学城神舟路788号邮编：510663公司网址电子邮件地址：*********************传真号码：************销售热线：************-8602技术热线：************-8877/8876推荐用途和限制用途：生化研究/分析第二部分危险性概述GSH危害性类别非危险物质或混合物GSH标签要素非危险物质或混合物其它危害（健康危害、环境危害）未见报道第三部分成分/组成信息混合物化学品成分：参考培养基使用说明。
有害物质成分：无第四部分急救措施一般信息：无特殊的措施要求。
皮肤接触：立即用清水彻底清洗。
眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水冲洗15min。
如不适就医。
吸入：如果吸入，将人员移动到新鲜空气处，如果没有呼吸，进行人工呼吸操作，并联系医生。
食入：如误食，用水冲洗口腔，如不适就医。
就医信息：出示产品使用说明或者此MSDS。
第六部分 泄露应急处理个人防护： 穿个人实验服,佩戴手套和口罩,避免吸入干粉。
环境保护措施： 用湿布和地拖擦拭干净。
清洁/收集措施： 保持干燥。
迅速清洗弄脏的区域。
第七部分 操作处置与储存安全操作注意事项： 防止粉尘扬起，应提供通风设备。
储存注意事项： 贮存于避光、干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
第八部分 接触控制/个人防护职业接触限值 没有已知的国家规定的暴露极限。
工程控制： 提供安全淋浴和洗眼设备个人保护措施 呼吸系统防护： 在通风橱里称取产品，佩戴口罩。
眼睛防护： 佩戴安全眼镜。
身体防护： 穿实验室服。
手防护： 戴防化学品手套。
其他防护： 常规的工业卫生操作，工作后及时清洗双手。
第九部分 理化特性外观： 粉末 pH 值： 7.4±0.2（25℃） 颜色： 淡黄色 气味： 特征性 熔点： 无数据资料 沸点： 无数据资料 燃点： 无数据资料闪点：无数据资料爆炸限度 下限： 无数据资料 上限： 无数据资料 热分解：无数据资料第五部分 消防措施危险特性： 不助燃。
质粒蛋白提取、纯化的具体步骤及方法
质粒蛋白提取、纯化的具体步骤及方法携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。
蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。
一、试剂准备1. LB液体培养基：Trytone 10 g，yeast extract 5 g，NaCl 10 g，用蒸馏水配至1000 mL。
2. 氨苄青霉素：100 mg/mL。
3. 上样缓冲液：100 mM NaH2PO4，10 mM Tris，8M Urea，10 mM 2-ME，pH8.0。
4. Washing Buffer：100 mM NaH2PO4，10 mM Tris，8 M Urea，pH6.3。
5. Elution Buffer：100 mM NaH2PO4，10 mMTris，8M Urea，500 mM Imidazole，pH8.0。
6. IPTG：100mM IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）：2.38g IPTG溶于100ml ddH2O中,0.22 um滤膜抽滤，-20℃保存。
二、获得目的基因1. 通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。
2. 通过RT-PCR方法：用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
三、构建重组表达载体1. 载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2. PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
四、获得含重组表达质粒的表达菌种1. 将连接产物转化大肠杆菌DH5α，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法一、常用培养基1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2、SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。
分成100ml的小份，高压灭菌。
培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
4、TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
5、2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
lb培养基的配制方法和过程
lb培养基的配制方法和过程嘿，咱今儿就来唠唠 lb 培养基的配制方法和过程。
lb 培养基啊，那可是微生物实验里的大宝贝哟！先来说说需要准备啥材料。
那肯定得有胰蛋白胨啦，这就好比做菜的主料，可不能少。
还有酵母提取物，它就像那调料，给培养基增添风味。
再来就是氯化钠，就像给菜加点盐，让味道更丰富。
这三样东西，那可是缺一不可呀！然后呢，咱就开始动手啦。
先找个干净的容器，就像给食材找个合适的锅一样。
把适量的胰蛋白胨倒进去，看着那白白的粉末，是不是感觉很神奇？接着再加入酵母提取物，它们在容器里相聚，就像好朋友见面一样开心。
然后把氯化钠也倒进去，这时候就像给这个小聚会加点热闹的气氛。
接下来，就是加水啦！这水可不能乱加哦，得按照一定的比例。
就好像煮汤的时候，水放多了味道淡，水放少了又煮不起来。
加好水后，就开始搅拌咯，把它们搅拌均匀，让它们充分融合在一起。
这时候你就会发现，原本各自为政的它们，现在变得那么和谐。
搅拌好了，可别着急哦。
还得调节一下 pH 值呢。
就像给菜调个合适的味道一样。
用酸碱去微调，直到达到合适的范围。
然后，把这调好的培养基放到灭菌锅里去灭菌。
这灭菌锅就像是个大烤箱，把里面的细菌啊啥的都给消灭掉，让我们的培养基干干净净的。
等灭菌完了，哇哦，那就是一份完美的 lb 培养基啦！你说这 lb 培养基的配制是不是很有趣？就像做一道特别的美食一样。
你得用心去挑选材料，精心去调配，最后才能得到让人满意的成果。
想象一下，如果没有正确地配制 lb 培养基，那实验会怎么样呢？微生物们可能就没法好好生长，就像人没吃好饭一样没精神。
所以说呀，这配制方法和过程可太重要啦！咱可不能马虎哟！总之呢，lb 培养基的配制虽然看起来有点麻烦，但只要你认真去做，就一定能做好。
就像生活中的很多事情一样，只要用心，就没有做不好的！你说是不是这个理儿呢？。
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法、常用培养基1、LB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用INNaOH （〜1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2 、SOB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。
分成100ml的小份，高压灭菌。
培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁。
3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
4 、TB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60 C , 再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
5、2X Y培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用INNaOH (〜1ml )调整pH 至7.0，再补足水至1L 。
注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L 。
6、YPD 培 养基将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。
建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加1.6g 色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。
lb培养基中所用抗生素终浓度氨苄青霉素-50μgml；氯霉素-20μlgml
LB培养基中抗生素的贮液配置和工作液浓度
①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22 μm滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度
氨苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml （严紧型质粒）60 μg/ml （松弛型质粒）
羧苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml （严紧型质粒）60 μg/ml （松弛型质粒）
氯霉素：贮液浓度34 mg/ml 溶于乙醇-20℃保存工作浓度25 μg/ml （严紧型质粒）170 μg/ml （松弛型质粒）
卡那霉素：贮液浓度10 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
链霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
四环素：贮液浓度 5 mg/ml 溶于乙醇-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
质粒类型：。
氨苄青霉素配制
羧苄青霉素配制
华越洋生物
华越洋生物氨苄青霉素配制说明：
抗菌谱，革兰氏阴性和阳性细菌，假单胞菌属，可用于配制细胞培养基，组织培养去除其他细菌等。
羧苄青霉素一般以钠盐形式存在，使用时按50 mg/ml水溶配制，0.22 微米滤膜过滤除菌，分装-20度保存。
母液的配置要看你所需要的浓度。
为了保持青霉素活性，一般是在培养基灭菌后，等待冷却到50度左右再加入，适度混匀后倒平板。
别名：羧苄青霉素二钠盐；羧苄青霉素钠；羧苄青；卡比西林；α-Carboxybenzylpenicillin disodium salt
分子式：C17H16N2O6SNa2
分子量：422.37
CAS＃：4800-94-6
外观：白色粉末
特性：
湿度 (%)：≤6.0
pH (1%, 水)@25℃：6.5-8.0
溶解性：溶于水和乙醇，在水中溶解度为50mg/ml,其水溶液在室温下可保存24小时，2-8℃可保存72小时。
R：42/43
S：36/37/39
储存条件：2-8℃。
实验室常用培养基的配制方法
五、实验室常用培养基的配制方法Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)组份浓度100 mg/ml Ampicillin配制量50 ml配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)组份浓度24 mg/mL IPTG配制量50 mL配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。
4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。
X-Gal (20 mg/ml)组份浓度20 mg/ml X-Gal配制量50 ml配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。
LB培养基组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl配制量 1 L配制方法3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5高温高压灭菌后，4。
C保存。
LB/Amp培养基组份浓度配制量配制方法3.滴加5 N NaOH(约0.2 mL)。
调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，冷却至室温。
6.加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。
7.4℃保存。
TB培养基组份浓度配制量 1.L配制方法 1.配制磷酸盐缓；中液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。
LB培养基
LB培养基LB培养基是一种培养基的名称，生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增,达到使用要求。
培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。
通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒，工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础。
成分表(1L溶液中)：Tryptone(胰蛋白胨)：10gYeast Extract(酵母提取物)：5gNaCl(氯化钠)：10g若配制固体培养基，则再加入15g Agar(琼脂)，切记琼脂直接加入瓶子中，因为它很黏很难冲洗下来。
若配制低盐培养基，则全部减半。
液态培养基根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基，应该在950 ml去离子水中加入：胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.4（该pH适合目前使用最广的原核表达菌种 E.coli的生长）。
用去离子水定容至1L。
121℃高压灭菌20min。
高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素 AMP 分装100mg/ml，使用浓度100μg/ml在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液）。
瓶盖用封口膜封好，4℃保存。
固态培养基LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉。
高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素 AMP 在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液），并且倒好培养皿（大约1/3高度）。
1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉2.抗生素的加入：121℃高压灭菌20min。
高压灭菌后，将融化的LB 固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
3.倒板：一般10ml倒1个板子。
培养基倒入培养皿后，打开盖子，紫外照射10-15分钟。
抗氨苄青霉素大肠杆菌的分离、培养及计数实验报告(参考内容)
实验1抗氨苄青霉素大肠杆菌的分离、培养及计数姓名班级实验原理如何进行分离、培养和计数1实验需要制备并使用选择培养基：选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。
其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。
2分离单克隆菌落采用平板划线法，其原理如下：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落。
3使用LB液体培养基并放置在恒温培养箱中培养单克隆菌落以达到扩大培养的目的。
4稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液（10^5,10^6,10^7）分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。
5用无菌水稀释菌液：取一毫升液体培养基基液加入一瓶含有9ml的无菌水中，震荡使液体充分扩散。
取震荡后溶液中的1ml液体加入另一瓶无菌水中，震荡，重复此步操作，进行梯度稀释，每一步浓度稀释到之前的十分之一。
6计数时，选择未污染的培养基计数。
使用记号笔在培养基表面标记，并使用计数器计数菌落个数。
实验目的1掌握选择培养基的使用方法；2掌握使用液体培养基扩大培养；3练习使用平板划线法分离单克隆菌落；4练习使用平板涂布法计数；5实践无菌操作技术。
实验材料和药品待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、LB固体培养基、LB液体培养基、接种环、玻璃三角刮刀、培养皿、恒温培养箱、摇床、超净工作台、酒精灯、9ml无菌水、移液枪实验步骤（用简单的流程图表示）实验数据（划线平板的照片、扩大培养的照片、平板涂布计数照片及表格等）平板划线后培养所得单克隆聚落数量只有一个。
在平板涂布的九个平板中有7个污染较为严重，一个轻度污染，一个未污染。
其中轻度污染的稀释浓度为10^6，菌落个数：84个；未污染的稀释浓度为10^5，菌落个数：559个实验结果及讨论平板划线操作错误讨论：第一次划线过于用力使得培养基破裂严重，接种环经酒精灯灼烧后冷却时间太短，余温烧死了部分菌液中的细菌。
氨苄青霉素LB琼脂基础产品说明书
产品说明书Product Manual产品中文名：氨苄青霉素LB琼脂PRODUCT NAME：Ampicillin LB Agar【货号、规格、名称、产品形态及包装形式】货号规格名称产品形态包装形式028335250g氨苄青霉素LB琼脂基础脱水干粉塑料瓶装SR067010支/盒氨苄青霉素LB琼脂配套试剂冻干粉西林瓶装【产品用途】用于分离含有抗氨苄青霉素质粒的大肠杆菌。
【检验原理】酵母粉、胰蛋白胨提供氮源、维生素、生长因子；氯化钠用于维持细胞渗透压；琼脂为凝固剂。
氨苄青霉素用于抑制不含抗氨苄青霉素质粒的菌株。
【配方成分】配方（每升）含量（g/L）胰蛋白胨10.0酵母膏粉 5.0氯化钠10.0琼脂15.0最终pH7.4±0.2（25℃）成分含量（/支）氨苄青霉素0.01g【使用方法】脱水干粉培养基使用：称取本品干粉40g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌10min。
取1支配套试剂（SR0670），加入1ml预热至37℃的无菌生理盐水，使试剂完全溶解，然后添加于灭菌后冷却至45-50℃100mL（028335）培养基基础中，混合均匀，倾注平板备用。
（注：配制不同用量体积，可按比例扩增或缩小。
）【质量控制】1.外观方面：脱水干粉培养基：流动性良好的淡黄色粉末。
（配套试剂：白色冻干。
）平板凝胶：淡黄色凝胶。
2.生物学方面质控菌株及编号指标质控评判标准大肠杆菌FSCC(I)14902502生长性G≥5，白色菌落大肠杆菌FSCC(I)14902501选择性G≤1【储存条件及保质期】脱水干粉：贮存于避光、干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
未开封产品贮存期三年。
配套试剂：2~8℃，避光保存，有效期见标签。
【注意事项】1、称量脱水干粉培养基时避免粉尘扬起，应佩戴口罩操作以免吸入粉尘引起呼吸道系统不适。
2、干粉培养基使用后立即旋紧瓶盖，避免吸潮结块。
3、质检报告可以登录环凯网站，在主页中点击“质检报告”进入下载页面，输入产品批号点击搜索后方可进行下载。
质粒转染实验步骤
质粒转染大肠杆菌材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调pH），氨苄青霉素，卡那霉素，质粒提取试剂盒仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒1.5ml 离心管，消毒枪头，无菌操作台实验步骤：1.LB培养基的配制：在950 ml去离子水中加入: 胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.固态培养基LB固体培养基及倒板：（1）.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉（2）.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入氨苄抗生素（终浓度为50μg/ml），以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
（3）.倒板：一般10ml倒1个板子。
培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。
（4）.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。
2.从-70℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液，室温下使其解冻，解冻后立即置冰上。
3.加入质粒DNA溶液（含量不超过50ng，体积不超过10μl），轻轻摇匀，冰上放置30分钟后。
4.42℃水浴中热击45s/90s，热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。
5.向管中加入1ml LB液体培养基（不含Amp），混匀后37℃振荡培养1小时，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因（Ampr ）。
6.将上述菌液摇匀后取100μl 涂布于含Amp的筛选平板上，正面向上放置半小时，待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿，37℃培养16-24小时。
同时做两个对照：对照组1：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，其它操作与上面相同。
此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。
对照组2：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。
细菌培养常用溶液配制
1、大肠杆菌的液体培养基1)LB（Luria-Bertani）液体培养基：配制每升培养基，应在950mL去离子水中加入：胰化蛋白胨10g酵母提取物5gNaCl 10g用5mol/L NaOH （约0.2mL）调pH至7.0，用去离子水定容至1L。
在15 psi（1.05 kg/cm2）高压下蒸汽灭菌20min。
注：1Mpa=145psi(pounds per square inch)=10.2kg/cm22)LB固体培养基：在LB液体培养基中加入1.5%的琼脂粉，在15 psi高压下蒸汽灭菌20min，室温保存。
3)氨苄青霉素（Amp）去离子水配成浓度为50mg/mL，0.22μm滤器过滤除菌，-20℃备用。
4)表达用LB液体培养基配制20%葡萄糖，15psi灭菌20min，添加至LB液体培养基中，使终浓度为0.2%。
5)表达用LB固体培养基待高压LB固体培养基温度降至50mL左右，取20%过滤灭菌的葡萄糖加入LB固体培养基中，终浓度为0.2%，加氨苄青霉素到100-120μg/mL浓度2、溶菌酶存贮液（10mg/mL）使用前用10mmol/L Tris-Cl（pH 8.0）即刻溶解溶菌酶，配制成10mg/mL浓度的贮存液。
（确保Tris-Cl的pH是8.0，低于该值，溶菌酶不能有效工作。
）3、某一特定pH的0.05mol/L的Tris-Cl缓冲液配制将50mL的0.1mol/L Tris碱溶液与下表所示相应体积的0.1mol/L的HCl混合，加水调整至100mL。
（10mmol/L和100mmol/L的Tris溶液pH值会相差0.1pH单位，溶液浓度越大，则其pH值越高。
）所需pH值所需0.1mol/L的HCl的体积（mL）7.8 34.57.98.0 8.1 8.2 32.0 29.2 26.2 22.94、透析袋处理液（500mL）1mM EDTA –Na 0.186g2% NaHCO310g定容至500mL处理方法：1)煮液煮沸10min2)冲洗透析袋内外壁3)置于dd水中煮沸10min4)冲洗内外壁5)放入新鲜dd水中于4℃保存。
实验室常用试剂配制方法
实验室常用试剂配制方法一、50×TAE：称242g Tris溶于800mL 双蒸水中，加入57.1mL 冰醋酸和18.6g（或100mL 0.5mol/L，pH=8.0）EDTA，再加水定容至1L，室温保存备用。
二、1×TAE：将50×TAE加双蒸水稀释至1×使用。
三、LB液体培养基：称取10g蛋白胨（bacto-typtone）、5g 酵母提取物（bacto-yeast extract）和10g NaCl，溶于950mL 双蒸水中，摇动至完全溶解，定容至1L，120℃湿热灭菌20min，冷却至室温后4℃保存备用。
四、100mg/mL氨苄青霉素（Amp）：称取100mg粉末状氨苄青霉素（Amp）置于1.5mL 离心管中，加入800μL 无菌水使其完全溶解，定容至1mL，-20℃保存备用。
五、LA液体培养基：按照x mL培养基加入x μL的比例将100mg/mL的氨苄青霉素（Amp）加入LB液体培养基中，4℃保存备用。
六、LB固体培养基：称取10g蛋白胨（bacto-typtone）、5g 酵母提取物（bacto-yeast extract）、10g NaCl和15g琼脂粉，溶于950mL 双蒸水中，摇动至完全溶解，定容至1L，120℃湿热灭菌20min，稍冷却后按照x mL培养基加入x μL的比例加入100mg/mL的氨苄青霉素（Amp），充分混匀后倒入培养皿中制成琼脂平板，4℃保存备用。
（1L培养基大约可以倒40个平板）七、200mg/mL IPTG：称取2g 粉末状IPTG溶于8mL 双蒸水中，再定容至10mL，配成200mg/mL 溶液，（用0.22μm滤膜过滤除菌，）分装为每份1mL，-20℃保存备用。
八、20mg/mL X-gal：将X-gal溶于二甲基甲酰胺，配成20mg/mL，分装后于-20℃避光保存。
九、DEPC水：将水加入干净玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（v/v），放置过夜，高压湿热灭菌，4℃保存备用。
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法
细菌培养常⽤培养基和抗⽣素的配制⽅法细菌培养常⽤培养基和抗⽣素的配制⽅法、常⽤培养基1、LB 培养基将下列组分溶解在0.9L ⽔中：蛋⽩胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要⽤INNaOH （?1ml）调整pH⾄7.0，再补⾜⽔⾄1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2 、SOB 培养基将下列组分溶解在0.9L⽔中：蛋⽩胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L 氯化钾2.5ml⽤⽔补⾜体积到1L。
分成100ml的⼩份，⾼压灭菌。
培养基冷却到室温后，再在每100ml 的⼩份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁。
3、SOC培养基成分、⽅法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的⼩份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于⾜够⽔中，再⽤⽔补⾜到100ml，⽤0.22um的滤膜过滤除菌）。
4 、TB 培养基将下列组分溶解在0.9L⽔中:蛋⽩胨12g酵母提取物24g⽢油4ml各组分溶解后⾼压灭菌。
冷却到60 C , 再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在⾜量的⽔中，使终体积为100ml。
⾼压灭菌或⽤0.22um的滤膜过滤除菌）。
5、2X Y培养基将下列组分溶解在0.9L⽔中:蛋⽩胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要⽤INNaOH (?1ml )调整pH ⾄7.0，再补⾜⽔⾄1L 。
注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L 。
6、YPD 培养基将下列组分溶解在 0.9L ⽔中：蛋⽩胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g⽤⽔补⾜体积为 1L 后，⾼压灭菌。
建议在⾼压灭菌之前，对⾊氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g ⾊氨酸，因为 YPD 培养基是⾊氨酸限制型培养基。
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氨苄青霉素的配置方法
一、组分浓度100mg/ml氨苄青霉素
配置体积：50ml
1.称取取5 g 氨苄青霉素粉末，置于50ml灭菌塑料离心管中；
2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解之后定容至50ml；
3.0.22um滤膜过滤除菌,小份分装(1ml管)后后,置于-20度保存。
4.LB培养基的氨苄青霉素浓度一般是50-100 ug/ml，采用80 ug/ml。
二、LB培养基配制方法
胰蛋白胨(tryptone) 10g
酵母提取物(yeast extract) 5g
氯化钠(NaCl) 10g
固体培养基另加琼脂粉15-20g
加双蒸水定容至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min
配制方法
（1）称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。
（2）溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。
（3）定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。
（4）调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。
（5）加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。
（6）分装、加塞、包扎。
（7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
三、。