指纹图谱
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气相色谱：通常使用毛细管柱，要注明色谱柱类型、 长度、内径、老化条件、载气、流速、柱温、柱头 压力、进样方式、进样口温度、检测器等。
＊选择试验方法及试验条件须根据供试品的特 点和需要设计合适的试验方案，在保证专属 性、重现性的前提下，宜选择简单、实用、 便于实施的方法和试验条件。
＊色谱中的参照峰由于作用不同于含量测定， 提高其分离度应以不牺牲色谱泊整体特征为 前提，所以不应孤立地苛求分离度必需达到 含量测定的要求。
中药材指纹图谱 质量控制及仪器方法
江苏省中医药研究院 钱大玮 段金廒
一、中药材指纹图谱的基本含义
定义：中药材指纹图谱是指某种(或某产地） 中药材中所共有的，具有特征性的某类 或几类成分的色谱或光谱的图谱。
特点：(1)通过指纹图谱的特征性,能有效鉴 别样品的真伪；
(2)通过指纹图谱主要特征峰的面积和比 例的制定，能有效控制样品质量，保证 样品质量的相对稳定。
2 应用实例
图9 黄连TLC指纹图谱
（六）高效毛细管电泳（HPCE）指纹图谱
1. 仪器简介
仪器装置通常包括高压电源、进样系统、 毛细管柱、检测器和记录系统5部分,其中毛细管 柱是分离的核心部分。
2. 应用实例
图 10 天麻及其伪品HPCE图 a天麻水提液 b天花粉水提液 c黄精水提液 d 商陆水提液e大九股牛水提液
（九）质谱（ MS）指纹图谱
将中药提取液置质谱仪中进行电子轰击 电离，可获得提取液中化学成分的MS图，不 同中药提取液所含成分不同，所得质谱图显 示的分子离子峰及进一步的裂解碎片峰亦不 一致，可资鉴别。但质谱法对提取液中主要 成分的含量要求较高，实验费用亦较大，能 否作为常用的检测方法尚待继续探索。
版一部119页红花项下的各项规定。
3.供试品溶液的制备
技术要求：
取样：应注意代表性。
称样：供试品适当粉碎后混合均匀，一般称取供试品与选取 样品的比例为1：10，即如称取1g供试品，应在混合均匀的 10g选取的样品中称取。要求取3位有效数字。
制备：选用适宜的溶剂和提取方法，尽量使药材中的成分较 多地在色谱图中反映出来，并达到较好的分离。
（七）X光衍射指纹图谱
X射线衍射法是研究物质的物相和晶体结构的主要方法
周俊国等[7] 对12个不同产地的蛇床子样品进行了粉末X射线衍 射分析。作者将不同产地的蛇床子粉末衍射图谱中的特征标记峰 与衍射整体模糊图形相结合，建立了蛇床子的特征图谱，井阐明 了其与同属植物兴安蛇床、碱蛇床的区别，认为该法可用于种内 不同产地样品的鉴别。
5.测定方法
技术要求：
仪器：仪器性能应能满足指纹图谱试验的需要，并 须经校验。
液相色谱：柱记录商品名称、生产厂家及相关参数 （固定相、柱长度、内径、填料粒度等），色谱系 统的适应性试验可用该品种指纹图谱所用的参照物， 参照常法进行；选择柱、流动相时要比较
薄层色谱：一般采用常规硅胶预制板或高效硅胶预 制薄层板，手工板一般预试中。展开剂的选择至少 需做三种不同展开剂的比较。
中药材色谱指纹图谱的建立 及技术要求与实例
中药材色谱指纹图谱概念
中药材色谱指纹图谱系指中药材经适当 处理后，采用一定的分析手段，得到的 能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。
1、汉语
拼音）
实例： （名称）红花 （汉语拼音）Honghua
实例：
红花指纹图谱：
红花药材黄酮类成分指纹图谱
技术参数： 共有峰的峰号（相对保留时间）： 1(0.11)2(0.12)3(0.21)4(0.24)5(0.28)6(0.33)7(0.35)8(0.63) 9(0.69)10(0.71)11(0.84)12(0.92)S(1.00)13(1.16)
图7 高效液相色谱仪结构示意图
2. 应用实例
图8 丹参水溶性成分HPLC指纹图谱 A 丹参素 B原儿茶醛
（五）薄层色谱（TLC）指纹图谱
1 方法简介
薄层色谱法是将固定相均匀涂铺在玻璃板上（或其它支持 物上，如塑料片或铝制薄板）成一薄层，然后用毛细管或适当 点样器将样品液滴加在薄层的起始线上，待溶剂挥散后，置入 展开槽内，用一定的溶剂展开，当溶剂前沿前行有一定距离后， 取出，干燥，检出或定量。
评价指标：供试品指纹图谱与该品种对照用指纹图谱 （共有模式）及供试品之间指纹图谱的相似性。
相似性：
两个方面：一是色谱的整体“面貌”，即有 指纹意义的峰的数目、峰的位置和顺序、 各峰之间的大致比例（TLC还有斑点的颜色） 等是否相似，以判断样品的真实性。二是 样品与对照样品或“对照用指纹图谱”之 间及不同批次样品图谱之间总积分值作量 化比较。相似性比较用“相似度”表达， 用药典会推荐的“中药指纹图谱计算机辅 助相似度计算软件”计算。0.9～1.0符合要 求。
2.来源
技术要求：
包括原植、动物的科名、中文名、拉丁学名、药用部 位、产地、采收季节、产地加工、炮制方法等。
实例： （基源）本品为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.
的干燥花。 （产地）四川省简阳县。 （采收期）5月至6月当花冠由黄变红时采摘。 （炮制方法）拣净杂质，除去茎叶，蒂头，晒干。 其性状、鉴别、检查等项应符合《中国药典》2000年
4.参照物
技术要求：
参照物的选择：一般选取容易获取的一 个以上主要活性成分或指标成分，主要 用于考察指纹图谱的稳定程度和重现性， 并有助于色谱的辨认。参照物应说明名 称、来源和纯度。
参照物溶液的制备：精密称取样品，用 适宜的溶剂制成标示浓度的溶液，备用。
实例：
取红花黄色素对照品适量，加乙醇配制成每 毫升含2mg的乙醇溶液作为黄酮类成分检测的 对照品溶液。
独活、羌活、藁本、大叶柴胡、川芎，柴胡
（三）气相色谱（GC）指纹图谱
1. 仪器简介
图5 气相色谱法流程示意图 1载气钢瓶 2减压阀 3载气净化装置 4稳压阀 5压力表 6流速计 7进样器 8色谱柱 9检测器 10放大器与记录器 11气体出口
2. 应用实例
图6 高良姜等药材挥发油的GC图谱
（四）高效液相色谱（HPLC）指纹图谱 1. 仪器简介
5.测定方法
实例：
照高效液相色谱法（中国药典2000年版一部 附录 VID）测定。
色谱条件及系统适用性试验：依利特C18柱 4.6×250mm，柱温30℃，甲醇－磷酸水为流动相， 二元梯度洗脱，流速1ml/min，检测波长330nm，理 论板数按红花黄色素计算应不低于2000。
测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul， 注入液相色谱仪中，记录60min的图谱即得。以红花 黄色素的色谱峰（S峰）的保留时间和峰面积为1计 算相对保留时间和峰面积比值。
6.指纹图谱及技术参数
技术要求：
HPLC及GC：图谱记录要求1小时； TLC：必须提供从原点至溶剂前沿的图谱。
指纹图谱的辨认：应注意指纹特征的整体性。一种药 材的指纹图谱是由各个具有指纹意义的峰组成的完整 图谱构成，各个有指纹意义的峰（或TLC的斑点）其 位置（保留时间或比移值）、大小或高低（积分面积 或峰高）、各峰之间相对的比例是指纹图谱的综合参 数，注意各有指纹意义的峰相互的依存关系。
放置：一般要求供试品溶液尽量新鲜配制，如连续试验需要， 应在避光、低温、密闭容器条件下短期放置，一般不超过两 周，溶液不稳定的，一般不超过48小时。
标签：须注明编号或批号，应与取样的药材编号一致，以保 证数据的可追踪性。
实例：
取红花药材30g，粉碎，过40目筛，混匀， 取此粉未1g，精密称定，置50ml具塞三角 瓶中，精密加乙醇50ml，称重，浸泡12小 时，超声30分钟，放冷，用乙醇补足失去 的重量，滤过，弃去初滤液，收集续滤液 10ml，水浴蒸干，乙醇定容至5ml，滤过 （0.45um），作为供试品溶液。
指纹图谱起草说明
1.名称 2.来源 3.供试品制备：提取溶媒比较、超声时间、 4.参照物的制备： 5.检测方法考查：
仪器、测定条件、稳定性试验、精密度试验、 重现性试验。
6.指纹图谱及共有指纹峰的标定
谢
谢！
（一）红外光谱（IR）指纹图谱
1. 仪器简介
图1 红外光谱仪结构示意图
2. IR应用实例
图2 天麻及其伪品的红外光谱图
A、C为脂溶性提取物
B、D为水溶性提取物
（二） 紫外－可见光谱（UV）指纹图谱 1. 仪器简介
图3 紫外－可见分光光度计的结构示意图
2. UV 应用实例
图4 独活等药材的UV光谱图 A 紫外光谱图 B 二阶导数光谱图
（十）DNA指纹图谱
现代分子生物学研究发现，中药材 （不含矿物药）所依赖的生物资源—— “物种”的多样性是由于其基因多态性的 结果。而基因多态性可在分子水平上检 测，它比形态、组织和化学水平上检测 更能代表其变异类的遗传标记。
结语
综上所述，光谱、色谱检测手段的科学性、 准确性与灵敏度的提高，以及先进仪器设备的 普及，使指纹图谱在中药研究中得到日益广泛 的应用，这将大大推动中药标准化、规范化的 进程。随着科学技术的迅速发展，中药指纹图 谱的研究趋势也将是多学科的渗透，从单指标 到多指标综合发展，对药物的质量作整体计价， 更好地保证用药的安全与有效。
（八）核磁共振（NMR）指纹图谱
假设是以一定的程序可获取植物类中药的特征性化学成 分（或化学成分组）的总提取物，同时这些特征的化学成分 的含量是相对固定的。因此，在规范的提取分离程序下，植 物类中药的1HNMR图与植物品种间存在严格的对应关系，没 有混淆的余地。
秦海林等对天麻及四种伪品黄精、芭蕉芋、紫茉莉和大 理菊进行了1HNMR分析，伪品的指纹图谱均与正品的特征峰 毫无相似之处。所研究的各种植物的1HNMR指纹图谱，均有 高度的特征性与重现性，同一品种不同产地的样品的1HNMR 指纹图有很好的一致性。
二、建立中药材指纹图谱的原则与方法
系统性：是指中药材指纹图谱所反映的化学 成分应包含中药有效部位所含大部分成分的 种类。
特征性：是指中药指纹图谱所反映的化学成 分信息(保留时间或位移值)所具有的高度选 择性 。
稳定性：是指指纹图谱在规定的条件下，应 有很好的重现性，以保证指纹图谱的通用性 和实用性，这是作为分析方法的必备条件。
＊选择试验方法及试验条件须根据供试品的特 点和需要设计合适的试验方案，在保证专属 性、重现性的前提下，宜选择简单、实用、 便于实施的方法和试验条件。
＊色谱中的参照峰由于作用不同于含量测定， 提高其分离度应以不牺牲色谱泊整体特征为 前提，所以不应孤立地苛求分离度必需达到 含量测定的要求。
中药材指纹图谱 质量控制及仪器方法
江苏省中医药研究院 钱大玮 段金廒
一、中药材指纹图谱的基本含义
定义：中药材指纹图谱是指某种(或某产地） 中药材中所共有的，具有特征性的某类 或几类成分的色谱或光谱的图谱。
特点：(1)通过指纹图谱的特征性,能有效鉴 别样品的真伪；
(2)通过指纹图谱主要特征峰的面积和比 例的制定，能有效控制样品质量，保证 样品质量的相对稳定。
2 应用实例
图9 黄连TLC指纹图谱
（六）高效毛细管电泳（HPCE）指纹图谱
1. 仪器简介
仪器装置通常包括高压电源、进样系统、 毛细管柱、检测器和记录系统5部分,其中毛细管 柱是分离的核心部分。
2. 应用实例
图 10 天麻及其伪品HPCE图 a天麻水提液 b天花粉水提液 c黄精水提液 d 商陆水提液e大九股牛水提液
（九）质谱（ MS）指纹图谱
将中药提取液置质谱仪中进行电子轰击 电离，可获得提取液中化学成分的MS图，不 同中药提取液所含成分不同，所得质谱图显 示的分子离子峰及进一步的裂解碎片峰亦不 一致，可资鉴别。但质谱法对提取液中主要 成分的含量要求较高，实验费用亦较大，能 否作为常用的检测方法尚待继续探索。
版一部119页红花项下的各项规定。
3.供试品溶液的制备
技术要求：
取样：应注意代表性。
称样：供试品适当粉碎后混合均匀，一般称取供试品与选取 样品的比例为1：10，即如称取1g供试品，应在混合均匀的 10g选取的样品中称取。要求取3位有效数字。
制备：选用适宜的溶剂和提取方法，尽量使药材中的成分较 多地在色谱图中反映出来，并达到较好的分离。
（七）X光衍射指纹图谱
X射线衍射法是研究物质的物相和晶体结构的主要方法
周俊国等[7] 对12个不同产地的蛇床子样品进行了粉末X射线衍 射分析。作者将不同产地的蛇床子粉末衍射图谱中的特征标记峰 与衍射整体模糊图形相结合，建立了蛇床子的特征图谱，井阐明 了其与同属植物兴安蛇床、碱蛇床的区别，认为该法可用于种内 不同产地样品的鉴别。
5.测定方法
技术要求：
仪器：仪器性能应能满足指纹图谱试验的需要，并 须经校验。
液相色谱：柱记录商品名称、生产厂家及相关参数 （固定相、柱长度、内径、填料粒度等），色谱系 统的适应性试验可用该品种指纹图谱所用的参照物， 参照常法进行；选择柱、流动相时要比较
薄层色谱：一般采用常规硅胶预制板或高效硅胶预 制薄层板，手工板一般预试中。展开剂的选择至少 需做三种不同展开剂的比较。
中药材色谱指纹图谱的建立 及技术要求与实例
中药材色谱指纹图谱概念
中药材色谱指纹图谱系指中药材经适当 处理后，采用一定的分析手段，得到的 能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。
1、汉语
拼音）
实例： （名称）红花 （汉语拼音）Honghua
实例：
红花指纹图谱：
红花药材黄酮类成分指纹图谱
技术参数： 共有峰的峰号（相对保留时间）： 1(0.11)2(0.12)3(0.21)4(0.24)5(0.28)6(0.33)7(0.35)8(0.63) 9(0.69)10(0.71)11(0.84)12(0.92)S(1.00)13(1.16)
图7 高效液相色谱仪结构示意图
2. 应用实例
图8 丹参水溶性成分HPLC指纹图谱 A 丹参素 B原儿茶醛
（五）薄层色谱（TLC）指纹图谱
1 方法简介
薄层色谱法是将固定相均匀涂铺在玻璃板上（或其它支持 物上，如塑料片或铝制薄板）成一薄层，然后用毛细管或适当 点样器将样品液滴加在薄层的起始线上，待溶剂挥散后，置入 展开槽内，用一定的溶剂展开，当溶剂前沿前行有一定距离后， 取出，干燥，检出或定量。
评价指标：供试品指纹图谱与该品种对照用指纹图谱 （共有模式）及供试品之间指纹图谱的相似性。
相似性：
两个方面：一是色谱的整体“面貌”，即有 指纹意义的峰的数目、峰的位置和顺序、 各峰之间的大致比例（TLC还有斑点的颜色） 等是否相似，以判断样品的真实性。二是 样品与对照样品或“对照用指纹图谱”之 间及不同批次样品图谱之间总积分值作量 化比较。相似性比较用“相似度”表达， 用药典会推荐的“中药指纹图谱计算机辅 助相似度计算软件”计算。0.9～1.0符合要 求。
2.来源
技术要求：
包括原植、动物的科名、中文名、拉丁学名、药用部 位、产地、采收季节、产地加工、炮制方法等。
实例： （基源）本品为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.
的干燥花。 （产地）四川省简阳县。 （采收期）5月至6月当花冠由黄变红时采摘。 （炮制方法）拣净杂质，除去茎叶，蒂头，晒干。 其性状、鉴别、检查等项应符合《中国药典》2000年
4.参照物
技术要求：
参照物的选择：一般选取容易获取的一 个以上主要活性成分或指标成分，主要 用于考察指纹图谱的稳定程度和重现性， 并有助于色谱的辨认。参照物应说明名 称、来源和纯度。
参照物溶液的制备：精密称取样品，用 适宜的溶剂制成标示浓度的溶液，备用。
实例：
取红花黄色素对照品适量，加乙醇配制成每 毫升含2mg的乙醇溶液作为黄酮类成分检测的 对照品溶液。
独活、羌活、藁本、大叶柴胡、川芎，柴胡
（三）气相色谱（GC）指纹图谱
1. 仪器简介
图5 气相色谱法流程示意图 1载气钢瓶 2减压阀 3载气净化装置 4稳压阀 5压力表 6流速计 7进样器 8色谱柱 9检测器 10放大器与记录器 11气体出口
2. 应用实例
图6 高良姜等药材挥发油的GC图谱
（四）高效液相色谱（HPLC）指纹图谱 1. 仪器简介
5.测定方法
实例：
照高效液相色谱法（中国药典2000年版一部 附录 VID）测定。
色谱条件及系统适用性试验：依利特C18柱 4.6×250mm，柱温30℃，甲醇－磷酸水为流动相， 二元梯度洗脱，流速1ml/min，检测波长330nm，理 论板数按红花黄色素计算应不低于2000。
测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul， 注入液相色谱仪中，记录60min的图谱即得。以红花 黄色素的色谱峰（S峰）的保留时间和峰面积为1计 算相对保留时间和峰面积比值。
6.指纹图谱及技术参数
技术要求：
HPLC及GC：图谱记录要求1小时； TLC：必须提供从原点至溶剂前沿的图谱。
指纹图谱的辨认：应注意指纹特征的整体性。一种药 材的指纹图谱是由各个具有指纹意义的峰组成的完整 图谱构成，各个有指纹意义的峰（或TLC的斑点）其 位置（保留时间或比移值）、大小或高低（积分面积 或峰高）、各峰之间相对的比例是指纹图谱的综合参 数，注意各有指纹意义的峰相互的依存关系。
放置：一般要求供试品溶液尽量新鲜配制，如连续试验需要， 应在避光、低温、密闭容器条件下短期放置，一般不超过两 周，溶液不稳定的，一般不超过48小时。
标签：须注明编号或批号，应与取样的药材编号一致，以保 证数据的可追踪性。
实例：
取红花药材30g，粉碎，过40目筛，混匀， 取此粉未1g，精密称定，置50ml具塞三角 瓶中，精密加乙醇50ml，称重，浸泡12小 时，超声30分钟，放冷，用乙醇补足失去 的重量，滤过，弃去初滤液，收集续滤液 10ml，水浴蒸干，乙醇定容至5ml，滤过 （0.45um），作为供试品溶液。
指纹图谱起草说明
1.名称 2.来源 3.供试品制备：提取溶媒比较、超声时间、 4.参照物的制备： 5.检测方法考查：
仪器、测定条件、稳定性试验、精密度试验、 重现性试验。
6.指纹图谱及共有指纹峰的标定
谢
谢！
（一）红外光谱（IR）指纹图谱
1. 仪器简介
图1 红外光谱仪结构示意图
2. IR应用实例
图2 天麻及其伪品的红外光谱图
A、C为脂溶性提取物
B、D为水溶性提取物
（二） 紫外－可见光谱（UV）指纹图谱 1. 仪器简介
图3 紫外－可见分光光度计的结构示意图
2. UV 应用实例
图4 独活等药材的UV光谱图 A 紫外光谱图 B 二阶导数光谱图
（十）DNA指纹图谱
现代分子生物学研究发现，中药材 （不含矿物药）所依赖的生物资源—— “物种”的多样性是由于其基因多态性的 结果。而基因多态性可在分子水平上检 测，它比形态、组织和化学水平上检测 更能代表其变异类的遗传标记。
结语
综上所述，光谱、色谱检测手段的科学性、 准确性与灵敏度的提高，以及先进仪器设备的 普及，使指纹图谱在中药研究中得到日益广泛 的应用，这将大大推动中药标准化、规范化的 进程。随着科学技术的迅速发展，中药指纹图 谱的研究趋势也将是多学科的渗透，从单指标 到多指标综合发展，对药物的质量作整体计价， 更好地保证用药的安全与有效。
（八）核磁共振（NMR）指纹图谱
假设是以一定的程序可获取植物类中药的特征性化学成 分（或化学成分组）的总提取物，同时这些特征的化学成分 的含量是相对固定的。因此，在规范的提取分离程序下，植 物类中药的1HNMR图与植物品种间存在严格的对应关系，没 有混淆的余地。
秦海林等对天麻及四种伪品黄精、芭蕉芋、紫茉莉和大 理菊进行了1HNMR分析，伪品的指纹图谱均与正品的特征峰 毫无相似之处。所研究的各种植物的1HNMR指纹图谱，均有 高度的特征性与重现性，同一品种不同产地的样品的1HNMR 指纹图有很好的一致性。
二、建立中药材指纹图谱的原则与方法
系统性：是指中药材指纹图谱所反映的化学 成分应包含中药有效部位所含大部分成分的 种类。
特征性：是指中药指纹图谱所反映的化学成 分信息(保留时间或位移值)所具有的高度选 择性 。
稳定性：是指指纹图谱在规定的条件下，应 有很好的重现性，以保证指纹图谱的通用性 和实用性，这是作为分析方法的必备条件。