亲和层析名词解释
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亲和层析名词解释
亲和层析是研究样品中的各组分与某些对生物大分子有专一性
吸附能力的特殊分子或离子相互作用,并利用这种相互作用选择和富集待测组分。
所谓亲和层析是根据生物大分子具有可解离或与配体结合成牢
固的结合态,因而它们与蛋白质、核酸、糖类及脂质等生物大分子形成复杂的亲和力。
这些生物大分子不仅能与不同的蛋白质、核酸以及糖类等结合,而且还能与多种其他分子结合。
这种结合的专一性使它在吸附分离生物大分子时比一般选择性薄层色谱更加灵敏、迅速。
所以根据生物大分子的可解离性以及由此产生的不同的亲和力,在某些生物大分子上就能达到高度的分离,获得纯化的生物大分子。
这是亲和层析技术应用的理论基础。
8-nm亲和层析与氨基酸、核酸的亲和层析一样,属于离子交换
层析法的一种。
它是用2。
5-5。
0尼龙的电极,以连续可变的电压通过被洗脱组分,从而将它带出来的。
亲和层析也可以用阴离子型缓冲溶液(如Ca(2+), Mg(2+)等)进行,然后再用等电点沉淀或分子筛效应进行分离。
在亲和层析时,要使用电极活性较低的阴离子,并要用与样品等电点接近的缓冲溶液洗脱,避免电解质引起的组分沉淀。
9。
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大多数氨基酸、核酸等生物大分子都有亲和性。
氨基酸中的甘氨酸、丝氨酸、半胱氨酸等的羧基部分都有强亲和性,例如氨基酸的
D-COOH-COO NH2与亲和层析的AgNO3等阴离子或阳离子生成稳定的
Ag,而氨基则保持游离状态。
相反,许多游离胺基酸如丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸等都具有亲和性。
氨基酸中的尿素、天冬酰胺、谷酰胺等碱性氨基酸都不具有亲和性,它们的亲和性与相应的羧酸有关。
游离的蛋白质多数也具有亲和性。
在亲和层析时,电极活性越低,对生物大分子的亲和性越小,则洗脱时的迁移率越快,即层析的分辨率越高。
蛋白质的氨基虽然能以N-NH2基形式存在,但多数只有N-NH2的形式才具有亲和性,所以通常称为弱亲和蛋白质。
通常用于分离蛋白质的有氨基苯甲酸盐、咪唑啉酮、大豆苷、天冬酰胺等。
各种动植物的天然蛋白质中,许多蛋白质的氨基或羧基也有亲和性。