机能实验学 不同类型缺氧模型小鼠制备实验报告

机能实验学实验报告

实验项目名称：不同类型缺氧模型小鼠制备

1.实验目的

①了解缺氧的分类，了解和复制不同类型缺氧模型（本次实验的缺氧模型包括低张性缺氧模型及血液性缺氧模型）；

②了解不同类型缺氧的表现特征，观察缺氧时呼吸节律和皮肤粘膜颜色的变化规律。

③熟练掌握小鼠的抓取、灌胃、腹腔注射、注射器使用及颈椎脱臼处死技术；

2.材料与方法

（1）实验动物

成年昆明种小鼠，10只，体重18～22g，雌雄不拘，由南方医科大学实验动物中心提供。

（2）实验器材与试剂

器材：密封广口瓶，一氧化碳发生装置，酒精灯，注射器及针头，灌胃器，塑料盆，量杯等

药品：钠石灰，甲酸，浓硫酸，5%亚硝酸钠，1%亚甲蓝，生理盐水

（3）实验方法与步骤

A.小鼠乏氧性缺氧模型的制备

1）实验步骤

①观察记录小白鼠正常呼吸频率、深度和皮肤、粘膜颜色等指标；

②抓取小白鼠并放入装有钠石灰广口瓶中，观察，记录；

③塞紧瓶塞，计时，拍摄，每3min重复观察上述指标1次，如有其它变化，随时记录，直至动物死亡，记录其存活时间。

2）注意事项

①主要通过爪部、尾部观察皮肤颜色，通过口唇部观察粘膜颜色。

②诱导小鼠进入广口瓶时，将广口瓶平放，向后拉拽小鼠尾部，使

小鼠本能前进进去广口瓶，当小鼠全头进入时将广口瓶直立；B.小鼠血液性缺氧模型的制备——一氧化碳中毒性缺氧

1）实验步骤

①准备一氧化碳发生装置；

②将1只小白鼠放入广口瓶中，观察其正常表现后与一氧化碳发生装置连接；

③用量杯取甲酸3ml放于试管内，沿试管壁缓慢加入浓硫酸2ml，塞紧瓶塞；

④计时，拍摄并记录各项指标直至死亡。

2）注意事项

①加液先加入甲酸，后加入浓硫酸，防止酸入水飞溅，造成危险；

②大试管橡皮塞应迅速盖紧，并注意室内通风，防止一氧化碳中毒。

③若试管内无明显气泡冒出，可以使用酒精灯加快反应速度；同时

应注意CO气体不宜产生过快，小鼠缺氧死亡过速不便观察个体状态和皮肤、黏膜颜色。

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C.小鼠血液性缺氧模型的制备——亚硝酸钠中毒性缺氧

1）实验步骤

①选取体重相近的小白鼠2只，观察正常指标；

②腹腔注射5％亚硝酸钠0.3 ml/只；

③立即取其中1只，腹腔内注入l％亚甲蓝溶液0.3 ml；另1只立即注入生理盐水0.3 ml为对照；

④计时，拍摄并记录各项指标，比较2只小白鼠的表现及死亡时间。2）注意事项

①腹腔注射亚甲蓝或生理盐水应在亚硝酸钠注射完毕后立即进行，

防止出现亚甲蓝救治不及时，影响实验结果

②抓取操作（采用双手抓取法）

1.将小鼠放置在粗糙的台面上，右手抓尾后拉，左手拇指食指迅

速抓住小鼠大部分头颈部皮肤，将其固定于左手大鱼际处

2.拉直四肢，并用左手无名指、小拇指压紧尾部或夹于两指间，

右手即可进行其他操作。

③腹腔注射操作

1.小鼠体位：左手固定小鼠，采取头低尾高位，使内脏前移；

2.持针方式：采用持弓式持针法，右手拇指中指捏住针管两侧，

食指于针管上方便于控制力度与角度；

3.进针位置：两大腿根部上缘连线与腹中线交叉点一侧约0.5cm，

左侧进针避免损伤肝脏；

4.进针方式：先刺入皮下，向前推进0.5cm，再45 °（30 °～

60 °）刺入腹腔；针头刺入不宜超过1cm，以免刺入脏器；刺

入后应先回抽针管再注射，确认针头未扎入膀胱或肠道

④器材处理：亚甲蓝注射器用后不用清洗，避免污染环境，上交统

一处理。

3.结果

（1）不同类型缺氧的小鼠各项指标的记录（每隔3分钟观察记录一次）

1）乏氧性缺氧

正常0 正常29 正常红润

3 狂躁32 正常红润

缺氧 6 狂躁35 加快紫绀

9

活力减

退23 加快紫绀

14分23

秒

12 安静18 减慢紫绀

14分

23秒

死亡0 不呼吸紫绀2）CO中毒性缺

氧

正常0 正常27 正常红润

缺氧 3 正常24 正常红润9分50秒

6 躁狂34 加快樱桃红

9 安静19 减慢樱桃红

9分50

秒

死亡0 无呼吸樱桃红色

3）NaNO2中毒性

缺氧

正常0 正常26 正常红润

亚甲蓝救治 3 正常33 正常红润

9 正常29 加快红润

12

活力减

退20 减慢紫绀

17分10

秒

15 安静17 减慢棕色

17分

11秒

死亡0 无呼吸棕色

生理盐水对照0 正常24 正常红润

3 躁狂36 加快紫绀7分40秒

6 安静2

7 正常紫绀

7分40

秒

死亡0 不呼吸棕色

（2）实验图像

图1 乏氧性缺氧(左为正常至躁狂状态，右为安静状态)

图2 CO中毒性缺氧(左为正常至躁狂状态，右为安静至濒死状态)

图3 NaNO2中毒性缺氧(从左到右依次为盐水小鼠，盐水小鼠与亚甲蓝小鼠的对比，盐水小鼠)

（3）实验过程记录

1）实验前：

本组10只小鼠10s内呼吸次数19次，28次，27次，21次，23次，25次，27次，24次，20次，24次，得到小鼠呼吸频率为142.8次/分，与小鼠平均正常呼吸频率140～210次/分接近，本组十只小鼠呼吸情况正常。

2）实验时：

①乏氧性缺氧

小鼠进入广口瓶后行为活跃，有不间断的排便现象；

一至二分钟，小鼠呼吸平缓，活动逐渐增多，表现不安；

三至六分钟，小鼠表现躁狂，呼吸加深加快，胸廓起伏明显，该现象随时间推移愈发明显；

六至九分钟，小鼠不安和狂躁状态表现至最大，并伴有抽搐现象；十二分钟后小鼠活动逐渐减少至最后卧于瓶中静止少动，呼吸频率降低；

实验进行14分23秒时小鼠呼吸停止，完全无活动，认定死亡。