薄层分析

薄层色谱的概述

薄层色谱是近年来发展起来的一种微量、简单并能快速分离和定性分析少量物质的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。适用于少量样品（几到几十微克，甚至0.01μg）的分离；若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。因此又可用来精制样品。

故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此外，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。

通常所说的薄层色谱一般是指吸附薄层色谱，可根据TLC所采用的涂层材料性质的不同，其物理化学原理也有所不同，可分为：

(1)吸附薄层色谱。采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层，利用吸附剂表面对不同组分吸附能力的差别达到分离的方法。

(2)分配薄层色谱。由硅胶、纤维素铺成薄层，不同组分在指定的两相中有不同的分配系数。

(3)离子交换薄层色谱。由含有交换活性基团的纤维素辅成薄层。

(4)排阻薄层色谱。利用样品中分子大小不同，受阻情况不同加以分离，也

称疑胶薄层。此外，还有利用氢键能力的强弱而分离的聚酰胺薄层色谱等。

吸附薄层色谱是使用最为广泛的方法，其原理概括起来是：由于混合物中的各个组分对吸附剂(固定相)的吸附能力不同，当展开剂(流动相)流经吸附剂时，发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速度，最终得以在固定相薄层上分离。）

基本原理

•薄层色谱法是将固定相吸附剂均匀地涂在玻璃板上制成薄层板，试样中的各组分在固定相和作为展开剂的流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。不同物质上升的距离不同而形成彼此分开的斑点从而达到分离。薄层色谱可分为吸附薄层色谱（以硅胶氧化铝等吸附剂）、分配薄层色谱（用

硅藻土和纤维素等）和离子交换薄层色谱。

TLC应用优点

薄层层析在化学中有许多重要用途，它可用于：证实两个化合物相同；测定混合物中组分的数目；决定适用于柱层析分离用的溶剂；监控柱层析分离；检查通过柱层析、结晶或萃取所达到的分离的有效程度；跟踪一个反应的进程等；近年来，薄层层析法在药物的合成、中草药有效成分的分离分析等方面也得到了广泛的应用。薄层色谱是目前最重要的分析方法之一：具有学习快，容易掌握、便宜、灵活的特点。可随时改换展开剂、展开方向，随时衍生、显色、观察、检测，方法开发快；灵敏度及分辨率高、分离快速、操作方便、同时分离多个样品、样品预处理简单、设备简单等特点。

薄层色谱法应用在药物领域的研究已趋成熟，尤其在质控方面已有许多的报道。采用TIC 扫描法测定银杏叶浸膏中白果内酯的含量，可得到平均回收率为99.83％(RSD=1.78％)的结果。且该法较高效液相色谱分析简便易行，不需繁杂的前处理，精确度高，可用于银杏叶浸膏的质量控制[4]。采用同一块薄层板，同一种展开剂可同时鉴定葛根、黄芩、黄连三味药，并可采用薄层色谱扫描法对葛根素进行定量。该法定性鉴别简便快速、专属性强、定量分析准确、重现性好。利用薄层色谱扫描法测定冠心口服液中人参皂甙(Rg1)含量，结果令人满意

综上所述，薄层色谱是可以提供大量定性定量信息的方法之一，但对其色

谱的质量应进行精心的研究，薄层色谱绝大多数为正相色谱，操作简单，快速，可同时比较、鉴别多种样品，独具特色。经数据处理，可得出各样品积分值，适合原料药材及复方制剂的分析，在优化的规范操作条件下得到薄层色

谱荧光彩色图象，可以在同一板上形象地比较各样品的异同。但由于受到薄

层板的质量和开放式层析系统或需显色的斑点其显色剂用量、加热条件等外

界因素的影响，实验结果易产生一定的误差。因此，薄层色谱法在中药研究中

的应用还需进一步加强研究。

•薄层层析有多中展开方式，可分为上行、下行、双向展开等。展开时均需在密闭的容器（展开缸）中进行，且该容器内应使流动相的蒸气饱和。

•（1）上行法：在缸中加入足够量的展开剂，将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中）,密封缸盖,待展开前沿离薄板上端1cm时，取出薄层板，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。

•（2）下行法：在展开缸的盖子上装一个小钩，将展开的纸片钩住，并通过一滤纸条将展开剂和纸片连起来。待展开剂前沿离纸片下端1cm时，取出纸片，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。

•（3）双向法：通常用于分离组分复杂的混合物。一般操作是取一块方形的薄板，在角上点样，展开后取出晾干。将薄板转90度，换另一种展开剂再次展开，可取得较好的分离效果。

（2）薄层板的制备；

（3）点样；

（4）展开；

（5）显色，Rf值计算。

分离部分

•

仪器和试剂

•载玻片，烘箱，烧杯，点样毛细管，层析缸，铅笔

•硅胶G，1%偶氮苯对照品溶液，0.01%对-二甲氨基偶氮苯对照品溶液，偶氮苯和对-二甲氨基偶氮苯样品溶液

•展开剂（正丁醇：苯=10：1）

•

•

•

•2、薄板的制备

薄层板的好坏将决定分离的效果。薄层板应该尽量均匀且厚薄一致。

（1）使用铺板器：将洁净干燥的玻璃板置于铺板器中间，在铺板槽中倒入糊状物，自左向右推，将糊状物均匀地涂在玻璃板上。

（2）倾注法：将调成糊状物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角，轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去糊状物中的气泡。

Or

（薄层板的制备

使表面均匀光滑且厚度为0.2mm～1mm，

在110℃下活化30min，冷后，备用。

2．点样

每个斑点直径不超过0.3cm，间距为1cm～1.5cm为宜。

3．展开

注意：点样斑点必须保持在展开剂液面之上。展开剂升到距离顶端1cm～1.5cm）或各组分已分开时，取出，标出前沿位置。

4．显色

(1) 紫外灯照射法

(2) 碘蒸气法：

(3) 碳化法：

(4) 专属显色剂显色法：）